耿見(jiàn)忠，張軍會(huì)，王 宇

1.貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，貴州貴陽(yáng) 550016；2.貴州省貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，貴州貴陽(yáng) 550002

生殖道支原體是導(dǎo)致非淋球菌尿道炎(NGU)的主要病原菌，臨床上主要有解脲脲原體(Uu)和人型支原體(Mh)。生殖道支原體還與人類(lèi)多種疾病密切相關(guān)，可引起宮頸炎、盆腔炎、輸卵管炎、不孕等多種疾病，還可導(dǎo)致胎膜早破[1]、早產(chǎn)、自然流產(chǎn)、胎兒缺陷、死胎等[2-3]。支原體無(wú)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，對(duì)作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物均無(wú)效，同時(shí)由于近年來(lái)抗菌藥物不規(guī)范使用，生殖道支原體檢出率及多重耐藥率均呈上升趨勢(shì)[4-5]。為分析貴州地區(qū)女性生殖道支原體感染及藥敏情況，本研究收集2016—2020年連續(xù)5年的支原體培養(yǎng)和藥敏分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析2016-2020年貴州地區(qū)122家醫(yī)院門(mén)診送至貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心的12 158例女性宮頸分泌物標(biāo)本檢測(cè)情況，其中貴陽(yáng)市7 953例(65.41%)；黔東南苗族侗族自治州1 748例(14.38%)；畢節(jié)市1 338例(11.01%)；遵義市832例(6.84%)；銅仁市180例(1.48%)；六盤(pán)水市58例(0.48%)；安順市45例(0.37%)；黔西南布依族苗族自治州4例(0.03%)。

1.2儀器與試劑 北京科偉永興儀器有限公司提供的隔水式培養(yǎng)箱；支原體培養(yǎng)鑒定計(jì)數(shù)藥敏試劑盒由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供，試劑盒包括12種常用抗菌藥物，即米諾環(huán)素、鹽酸多西環(huán)素、紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素、交沙霉素、甲砜霉素、克林霉素、司帕沙星、左氧氟沙星、加替沙星。

1.3方法 參照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，取出試劑盒基礎(chǔ)液和藥敏試驗(yàn)板，放置至室溫后，使用移液器吸取100 μL基礎(chǔ)液加入空白對(duì)照孔；分泌物標(biāo)本與液體培養(yǎng)基充分混勻，將含有標(biāo)本的基礎(chǔ)液加入其余的微孔中，每孔100 μL，完成后輕輕振蕩檢測(cè)板，使物質(zhì)溶解；所有微孔加1滴礦物油，覆蓋培養(yǎng)液的液面；將檢測(cè)板加蓋后，放置于隔水式培養(yǎng)箱，35 ℃培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)果判讀：培養(yǎng)24 h后觀察培養(yǎng)液顏色變化，微孔內(nèi)試劑保持橘黃色不變，表示沒(méi)有支原體生長(zhǎng)，判讀結(jié)果為陰性；微孔內(nèi)試劑由橘黃色變?yōu)榧t色，表示有支原體生長(zhǎng)，判讀結(jié)果為陽(yáng)性。藥敏結(jié)果判讀：上下兩孔均為陰性判為敏感(S)；上孔陽(yáng)性、下孔陰性判為中介(I)；上、下兩孔均為陽(yáng)性判為耐藥(R)。當(dāng)培養(yǎng)24 h的培養(yǎng)液變?yōu)闇\紅色或顯色不明顯時(shí)，可延長(zhǎng)12～24 h觀察結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12016—2020年支原體檢出情況 連續(xù)5年間共收到12 158例女性標(biāo)本，檢出支原體陽(yáng)性5 642例，檢出率為46.41%(5 642/12 158)，其中單純感染Uu 3 547例，檢出率為29.17%(3 547/12 158)；單純感染Mh 393例，檢出率為3.23%(393/12 158)，混合感染Uu和Mh 1 702例，檢出率為14.00%(1 702/12 158)，3種感染類(lèi)型檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。分別對(duì)不同年份之間Uu檢出率、Mh檢出率及混合感染檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=61.55、29.28、33.16，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2016—2020年支原體檢出情況[n(%)]

2.2不同年齡段女性支原體檢出情況 12 158例女性，其中151例未提供年齡，對(duì)其余12 007例女性標(biāo)本的支原體檢出率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，共檢出支原體陽(yáng)性5 571例，陽(yáng)性標(biāo)本女性的年齡主要集中在21～<31歲和31～<41歲，這兩個(gè)年齡段支原體陽(yáng)性構(gòu)成比分別為39.20%和27.48%。兩個(gè)年齡段合計(jì)構(gòu)成比為66.68%。統(tǒng)計(jì)不同年齡段支原體檢出率，<21歲年齡段支原體檢出率為53.76%，高于其他各年齡段檢出率；分別對(duì)不同年齡段患者之間Uu檢出率、Mh檢出率及混合感染檢出率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=44.43、16.30、21.46，P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 不同年齡段女性支原體檢出情況[n(%)]

2.3貴州地區(qū)生殖道支原體總體藥敏分析情況 3 547例單純感染Uu患者藥敏分析結(jié)果顯示，對(duì)12種常用抗菌藥物的敏感率居前4位的依次為交沙霉素(99.66%)、米諾環(huán)素(94.64%)、鹽酸多西環(huán)素(94.50%)；耐藥率居前3位的依次為克林霉素(31.94%)、甲砜霉素(22.72%)、司帕沙星(19.40%)；393例單純感染Mh患者藥敏分析結(jié)果顯示，敏感率居前3位的依次為交沙霉素(100.00%)、鹽酸多西環(huán)素(99.75%)、米諾環(huán)素(98.22%)；耐藥率居前4位的依次為紅霉素(95.42%)、克拉霉素(94.91%)、阿奇霉素(94.40%)、羅紅霉素(94.40%)；1 702例混合感染Uu和Mh患者藥敏分析結(jié)果顯示，敏感率居前3位的依次為交沙霉素(97.18%)、鹽酸多西環(huán)素(91.83%)、米諾環(huán)素(90.83%)；耐藥率居前3位的依次為紅霉素(96.53%)、羅紅霉素(96.47%)、阿奇霉素(94.77%)。見(jiàn)表3。

表3 貴州地區(qū)2016—2020年支原體藥敏分析結(jié)果[n(%)]

2.42016—2020年貴州地區(qū)生殖道支原體耐藥趨勢(shì)變化 2016—2020年單純感染Uu對(duì)甲砜霉素及司帕沙星的耐藥率整體呈上升趨勢(shì)，對(duì)甲砜霉素耐藥率從2016年的14.56%上升至2020年的25.19%；對(duì)司帕沙星耐藥率從2016年的17.62%上升至2020年的26.09%；2016—2019年對(duì)克林霉素的耐藥率整體呈上升趨勢(shì)，2020年稍有下降。2016年單純感染Uu對(duì)阿奇霉素、紅霉素、克拉霉素、羅紅霉素、米諾環(huán)素、鹽酸多西環(huán)素呈偏高的耐藥率，后期耐藥率下降并逐步穩(wěn)定，見(jiàn)表4。2016—2020年單純感染Mh對(duì)司帕沙星及左氧氟沙星的耐藥率整體呈下降趨勢(shì)，其中對(duì)司帕沙星的耐藥率從2016年的60.00%下降至2020年的39.76%；對(duì)左氧氟沙星的耐藥率從2016年的40.00%下降至2020年的30.12%；對(duì)阿奇霉素、紅霉素、羅紅霉素等的耐藥率無(wú)明顯變化趨勢(shì)，見(jiàn)表5。2016—2020年混合感染Uu和Mh對(duì)紅霉素的耐藥率呈小幅度上升趨勢(shì)，對(duì)其余抗菌藥物耐藥率無(wú)明顯變化，見(jiàn)表6。

表4 2016—2020年單純感染Uu的耐藥情況[n(%)]

表5 2016—2020年單純感染Mh的耐藥情況[n(%)]

表6 2016—2020年混合感染Uu和Mh的耐藥情況[n(%)]

3 討 論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，各地域生殖道支原體檢出率存在較大差異，可能與不同的標(biāo)本采集方法，采用的不同試劑類(lèi)型，不同研究人群及其文化、生活習(xí)慣、社會(huì)經(jīng)濟(jì)地位等有關(guān)[6]。本研究結(jié)果顯示，貴州地區(qū)女性生殖道支原體的檢出率為46.41%，低于曾麗洪等[7]報(bào)道的湖南衡陽(yáng)地區(qū)支原體檢出率(66.5%)和張華萍等[8]報(bào)道的支原體檢出率(70.1%)，與周青雪等[9]報(bào)道的支原體檢出率(49.41%)相當(dāng)。本研究中支原體感染類(lèi)型以單純感染Uu為主，與國(guó)內(nèi)其他報(bào)道基本一致[10-11]。貴州地區(qū)單純感染Uu檢出率為29.17%；其次為混合感染Uu和Mh(14.00%)，單純感染Mh檢出率最低(3.23%)，與魏箐箐等[11]報(bào)道單純感染Uu檢出率(30.03%)基本一致；混合感染和單純感染Mh與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道存在差異[4,11]，但是不同類(lèi)型支原體感染整體趨勢(shì)基本一致。Uu檢出率較高，其可能原因有：(1)Uu對(duì)pH值要求較低；(2)Uu可分解尿素產(chǎn)氨，改變陰道內(nèi)環(huán)境pH值，有利于Uu自身的繁殖；(3)與使用商品試劑有關(guān)，大多數(shù)商品培養(yǎng)液的pH值是6.0，更有利于Uu的生長(zhǎng)及檢出。

2016—2020年不同年份間不同生殖道支原體感染類(lèi)型的檢出率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),單純感染Uu 2018年檢出率(33.61%)最高，后逐漸降低至2020年的24.73%；單純感染Mh檢出率呈逐年下降趨勢(shì)，從2016年的最高5.85%下降至2020年的2.62%?；旌细腥緳z出率的變化趨勢(shì)與單純感染Uu檢出率變化趨勢(shì)基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)，生殖道支原體感染患者主要集中于21～<41歲女性，其構(gòu)成比為66.68%，與國(guó)內(nèi)其他研究報(bào)道基本一致[11-12]。本研究中貴州地區(qū)<21歲女性支原體檢出率高于其他年齡段女性，與廣州地區(qū)[6]及武漢地區(qū)[11]有差異，可能與低年齡段女性機(jī)體免疫力有差異及不同地域人群的生活習(xí)慣不同有關(guān)；單純感染Uu檢出率隨年齡增加逐漸下降，單純感染Mh、混合感染Uu和Mh檢出率在不同年齡段無(wú)明顯的規(guī)律變化。整體支原體檢出率隨年齡增加有降低趨勢(shì)，其中>50歲檢出率明顯降低，可能與該年齡段女性性生活活躍度及雌激素水平降低密切相關(guān)。

支原體是一類(lèi)無(wú)細(xì)胞壁，能通過(guò)過(guò)濾器，且能在人工培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的最小原核型微生物，臨床上常使用干擾蛋白或核酸合成的抗菌藥物作為支原體感染治療藥物，例如四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、喹諾酮類(lèi)及氨基糖胺類(lèi)等抗菌藥物。此外，建議支原體陽(yáng)性患者的伴侶同時(shí)采集標(biāo)本做支原體培養(yǎng)和藥敏分析，如果后者支原體培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性應(yīng)雙方同時(shí)進(jìn)行治療，避免再次交叉感染，減少耐藥支原體的產(chǎn)生。本研究中，單純感染Uu對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗菌藥物(紅霉素、阿奇霉素、羅紅霉素、克拉霉素)敏感率較高，耐藥率均未超過(guò)5%，對(duì)部分抗菌藥物耐藥率低于國(guó)內(nèi)其他報(bào)道[4-5，11]；單純感染Mh對(duì)此類(lèi)抗菌藥物敏感率則相反，表現(xiàn)為耐藥率大于90%。3種支原體感染類(lèi)型對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗菌藥物(交沙霉素)均有較高的敏感率，與國(guó)內(nèi)其他報(bào)道基本一致[11]。不同支原體感染類(lèi)型對(duì)四環(huán)素類(lèi)抗菌藥物(米諾環(huán)素、鹽酸多西環(huán)素)均有較高的敏感性，作為新型的四環(huán)素類(lèi)抗菌藥物，治療支原體感染有較好的療效。單純感染Uu對(duì)除加替沙星的敏感性為85.09%外，對(duì)其他喹諾酮類(lèi)藥物(司帕沙星、左氧氟沙星)敏感性均較低，與國(guó)內(nèi)其他報(bào)道基本一致[11]，其耐藥機(jī)制主要與ParC基因突變[13]、生物膜形成[14]、DNA解螺旋酶變異[15]等相關(guān)。單純感染Mh對(duì)林可酰胺類(lèi)藥物(克林霉素)的敏感率為87.79%，單純感染Uu對(duì)其的敏感率較低。3種支原體感染類(lèi)型對(duì)氯霉素類(lèi)藥物(甲砜霉素)敏感性均較低，大多為中介水平，不建議作為治療支原體感染常規(guī)使用藥物?；旌细腥綰u和Mh整體表現(xiàn)為Uu和Mh耐藥性的交集，對(duì)多數(shù)抗菌藥物耐藥，對(duì)交沙霉素、米諾環(huán)素及鹽酸多西環(huán)素表現(xiàn)為高度敏感，符合國(guó)內(nèi)外其他地區(qū)文獻(xiàn)報(bào)道[4,16]。貴州地區(qū)支原體對(duì)常用抗菌藥物敏感率與其他地區(qū)有差異，進(jìn)一步表明不同地區(qū)女性生殖道支原體對(duì)抗菌藥物的敏感性不同，臨床有必要通過(guò)支原體培養(yǎng)確定患者感染類(lèi)型和藥敏情況，避免盲目使用抗菌藥物，對(duì)患者進(jìn)行針對(duì)性治療有較大的幫助。本研究對(duì)連續(xù)5年藥敏數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，單純感染Uu對(duì)甲砜霉素及司帕沙星耐藥率整體呈上升趨勢(shì)，與國(guó)內(nèi)其他報(bào)道有明顯差異[4]；單純感染Uu對(duì)大多數(shù)藥物(阿奇霉素、紅霉素、克拉霉素、羅紅霉素、米諾環(huán)素、鹽酸多西環(huán)素)耐藥性較穩(wěn)定，與近年來(lái)合理使用抗菌藥物監(jiān)管政策的落實(shí)及臨床規(guī)范診療有關(guān)。

本研究得出的結(jié)論尚存在一定局限性：(1)支原體為條件致病菌，可以正常定植女性生殖道，當(dāng)免疫力低下或支原體數(shù)量達(dá)到一定程度時(shí)才可致??；(2)本研究使用肉湯培養(yǎng)基，單純采用培養(yǎng)基顏色變化判斷是否為陽(yáng)性結(jié)果，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果增加；(3)支原體不耐干燥，采樣后如果未能及時(shí)送檢或接種，會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

綜上所述，女性生殖道支原體感染以Uu為主，貴州地區(qū)單純感染Mh檢出率呈現(xiàn)逐年下降趨勢(shì)。<21歲女性支原體檢出率高于其他年齡段女性，同時(shí)總體表現(xiàn)為隨年齡增加支原體檢出率逐漸下降。從藥敏分析角度看，單純感染Uu對(duì)甲砜霉素及司帕沙星耐藥總體呈上升趨勢(shì)。不同支原體感染類(lèi)型的藥敏分析結(jié)果有差異，單純感染Uu對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物、克林霉素及甲砜霉素的敏感率較低；單純感染Mh對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、喹諾酮類(lèi)藥物及甲砜霉素的敏感率較低；混合感染Uu和Mh對(duì)交沙霉素、米諾環(huán)素及鹽酸多西環(huán)素表現(xiàn)出高度敏感。建議臨床根據(jù)不同支原體的耐藥情況及藥敏分析結(jié)果選擇合適的抗菌藥物進(jìn)行治療。