李春牛 李先民 杜嬋娟 孫明艷 黃展文 盧家仕 付崗 卜朝陽

摘 ?要：為了鑒定茉莉花資源對白絹病的抗性，從主產(chǎn)區(qū)廣西橫縣的病株分離白絹病菌株，以橫縣雙瓣茉莉花為材料，對露天條件下茉莉花白絹病接種方法進(jìn)行了研究，并對盆栽的不同茉莉花品種（系）進(jìn)行接種，采用相對抗病程度評價(jià)法鑒定供試材料的抗病性。結(jié)果表明：（1）在5種接種方法中，帶菌燕麥粒埋土法的病情指數(shù)、發(fā)病率最高，分別為47.93%、86.67%，可以作為茉莉花白絹病露天接種方法;以此法接種后0～24?d期間，隨著苗齡增加，發(fā)病率及病情指數(shù)呈降低趨勢，1年生盆栽發(fā)病最迅速，病情指數(shù)也一直最高，20年生的發(fā)病最慢，病情指數(shù)一直最低;（2）供試的18份茉莉花品種（系）中，有抗病品種（系）5個(gè)、中感品種（系）6個(gè)、高感品種（系）7個(gè)，其中J0718的相對抗性指數(shù)最高，虎頭茉莉和J1836最容易感染茉莉花白絹病，橫縣雙瓣茉莉?qū)僦懈衅贩N;（3）供試的其他8份素馨屬資源中，迎春花的相對抗性指數(shù)為0.93，為高抗品種;抗病品種4個(gè)，包括耳葉茉莉、扭肚藤、厚葉素馨及濃香茉莉，高抗及抗病品種占62.50%，可為茉莉花抗性育種提供種質(zhì)資源;（4）在抗病及高感種質(zhì)資源中，都有單瓣、雙瓣及多瓣類型，不宜僅依據(jù)瓣型來判斷抗性強(qiáng)弱。

關(guān)鍵詞：茉莉花;白絹病;接種技術(shù);抗性鑒定

Abstract： In order to identify the resistance of jasmine resources to Sclerotium rolfsii， a strain of S. rolfsii was isolated from Jasminum sambac grown in Hengxian， and the inoculation technology of the strain was explored with Hengxian double petal jasmine as the material， and the resistance of different varieties of potted jasmine by relative disease resistance was evaluated. The disease index and incidence rate of the oat seed embedding method were the highest， being 47.93 and 86.67% respectively， which could be used as the outdoor inoculation method for the jasmine southern blight. 0–24 d after inoculation， the incidence and disease index decreased with the increase of seedling age， and the incidence rate of the plant which was 1 year old was the fastest and the disease index was the highest. The incidence of the plant which was 20 years old was the slowest and the disease index was the lowest. There were 5 varieties that were resistant to the disease， 6 varieties were medium susceptible varieties and 7 varieties were high susceptible varieties. The relative resistance index of J0718 was the highest. J. sambac ‘Grand Duke of Tuscany and J1836 were the most susceptible to jasmine southern blight， and Hengxian double petal jasmine was medium susceptible variety. The other 8 Jasmine resources from Jasminum L were tested. J. Nudiflorum was a high resistance variety with a relative resistance index of 0.93. Four were resistant varieties， including J. auriculatum， J. elongatum， J. pentaneurum and J. odoratum. 62.50% of the 8 varieties were high resistance and disease resistance varieties， which could be used for jasmine resistance breeding. In the disease resistant and high sensitive germplasm resources， there were single， double and multi valve types. The resistance to jasmine southern blight was not related to the corolla type.

Keywords： Jasminum sambac; Sclerotium rolfsii; artificial inoculation technique; evaluation of resistance

茉莉花[Jasminum sambac （L.） Aiton]，系木犀科（Oleaceae）素馨屬（Jasminum）綠灌木，原產(chǎn)于印度[1]，根據(jù)花冠輪數(shù)，常分為單瓣茉莉、雙瓣茉莉、多瓣茉莉三種類型。茉莉花花量大，花期長，花香持久、被譽(yù)為“天下第一香”[2]，是著名的花茶和香精原料[1]，還具有較高的觀賞和藥用價(jià)值。我國種植茉莉花已有2000多年的歷史，現(xiàn)在我國廣西橫縣、福建福州市、四川犍為縣及云南元江縣等地規(guī)模種植，種植面積12 300?hm2，年產(chǎn)鮮花120 600?t，年產(chǎn)茉莉花茶110 800?t[3]，是重要的“一帶一路”經(jīng)濟(jì)植物[4]。白絹病是茉莉花最主要的病害，近年來發(fā)生日益嚴(yán)重，可導(dǎo)致茉莉花大面積枯死，嚴(yán)重影響茉莉花的產(chǎn)量及品質(zhì)，成為制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸問題[5-6]。

茉莉白絹病，俗稱白毛病、菜籽病，是土棲真菌齊整小核菌（Sclerotium rolfsii Sacc.）引起的一種土傳根部危險(xiǎn)性病害[5， 7]。該病菌的寄主范圍極廣，包括花生[8]、芝麻[9]、番茄[10]、辣椒[11]、蘋果[12]等近100個(gè)科500多種植物[13]，且病菌菌核在土壤中可存活5～6 a，因此很難防治[5]，在國內(nèi)外茉莉花產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生[14-17]，發(fā)病率可達(dá)36.5%[16]，甚至完全毀滅種植園[18]。國內(nèi)外已有不少針對該病的化學(xué)防治及生物防治的相關(guān)研究報(bào)道[7， 17， 19-22]，但有些化學(xué)藥劑殘留期較長，易造成環(huán)境污染[18]。而以微生物菌劑、菌肥為主要載體的生物防治措施，防治成本較高，且生防菌的定殖易受土壤pH、水分、溫度等環(huán)境因素的影響，防治效果尚不夠穩(wěn)定[7]。種植抗病品種是防治作物病害最經(jīng)濟(jì)有效的防治手段[23]。種質(zhì)資源是育種的物質(zhì)基礎(chǔ)，鑒定抗病種質(zhì)是抗病育種的基礎(chǔ)工作[24]。國內(nèi)外已有開展花生種質(zhì)對白絹病抗性鑒定的報(bào)道[23， 25-27]，Sennoi等[28]進(jìn)行了洋姜白絹病室內(nèi)抗性鑒定，Gholami等[29]開展了菜豆抗白絹病評價(jià)。而茉莉花白絹病抗性評價(jià)及抗病資源篩選的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。

本研究以收集的18份茉莉花品種（系）及8份素馨屬其他種為材料，開展了茉莉花白絹病露天接種技術(shù)及盆栽抗病性鑒定研究，旨在建立茉莉花白絹病露天接種方法并篩選抗源，為茉莉花抗性育種及種質(zhì)資源的科學(xué)利用提供技術(shù)支撐。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?試驗(yàn)地點(diǎn)概況 ?試驗(yàn)在廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所露天苗圃（22°48′ N、108°22′ E）進(jìn)行，地面新鋪黑色地布。試驗(yàn)地屬南亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，年平均氣溫21.6?℃，年均降雨量1304.2?mm，平均空氣相對濕度79%，無霜期334?d[30]。

1.1.2 ?試驗(yàn)材料 ?供試材料包括18份茉莉花品種（系），8份素馨屬其他種的植物。茉莉白絹病菌（齊整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc.）菌株SRNN1分離自廣西橫縣校椅鎮(zhèn)茉莉種植園內(nèi)的感病植株，經(jīng)純化鑒定，菌株rDNA-ITS序列GenBank登錄號為MT634388。燕麥粒為市售燕麥，千粒重23.87?g。病菌培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA），配方為：馬鈴薯200?g，葡萄糖20?g，瓊脂15?g，水1?L，pH自然。

1.2 ?方法

1.2.1 ?帶菌燕麥粒的制備 ?制備方法參考晏立英等[23]的方法，略作修改。將茉莉白絹病菌在PDA培養(yǎng)基平板上28?℃培養(yǎng)3?d，用滅菌打孔器在菌落邊緣打取直徑5?mm的菌碟，備用。燕麥粒裝入三角瓶中，蒸餾水浸泡4?h后，倒掉水分，121?℃高壓滅菌60?min。將白絹病菌碟接種于滅菌的燕麥粒中，置于28℃黑暗條件下培養(yǎng)7?d，期間每隔12?h搖動三角瓶1次，直至所有燕麥粒上均長滿菌絲。

1.2.2 ?不同接種方法的比較 ?以橫縣雙瓣茉莉的健壯扦插苗為試材，取3年齡種苗移栽到種植盆，種植盆直徑18?cm，深17?cm，栽培基質(zhì)為黃心土∶泥炭土=4∶1。移栽后露天養(yǎng)護(hù)6個(gè)月，選取長勢一致的盆苗進(jìn)行接種試驗(yàn)。共設(shè)置5種接種方法及對照共6個(gè)處理，每個(gè)處理10盆，3次重復(fù)。參考晏立英等[23]的方法，修改了接種數(shù)量形成撒表土法、埋土法、貼莖法，增加覆蓋基質(zhì)或無菌燕麥粉形成蓋泥炭法及混合埋土法，具體方法如下：

（1）撒表土法。植株澆透水分，將帶菌的燕麥粒撒在植株莖基部周圍的土壤表面，15粒/盆。

（2）埋土法。帶菌燕麥粒埋入莖基部周圍2?cm深的土層中，15粒/盆。

（3）貼莖法。帶菌燕麥粒粘于透明膠帶上，固定于莖基部，15粒/盆。

（4）蓋泥炭法。植株澆透水分，將帶菌的燕麥粒撒在植株莖基部周圍的土壤表面，15粒/盆。覆蓋一層2～3?cm厚濕透的泥炭土。

（5）混合埋土法。帶菌燕麥粒與無菌燕麥粉混合埋入莖基部周圍2?cm深的土層中，帶菌燕麥粒15粒/盆。

（6）對照（CK）。植株澆透水分，將不帶菌的燕麥粒撒在植株莖基部周圍的土壤表面，15粒/盆。

1.2.3 ?不同苗齡的植株感病情況比較 ?以橫縣雙瓣茉莉?yàn)樵嚥?，選取1、3、5、10、20年苗齡植株移入種植盆，種植盆直徑18 cm，深17?cm，栽培基質(zhì)為黃心土∶泥炭土=4∶1。移栽后露天養(yǎng)護(hù)6個(gè)月，選擇長勢較一致的盆苗進(jìn)行接種試驗(yàn)，采用帶菌燕麥粒埋土法進(jìn)行接種。每個(gè)處理10盆，3次重復(fù)。

1.2.4 ?不同品種（系）抗病性鑒定 ?供試材料包括18份茉莉花品種（系），8份素馨屬其他種的植物，均為扦插繁殖的1年苗齡的盆栽。種植盆直徑18?cm，深17?cm，栽培基質(zhì)為黃心土∶泥炭土=4∶1。采用帶菌燕麥粒埋土法進(jìn)行接種，每個(gè)處理10盆，3次重復(fù)。

1.2.5 ?病情調(diào)查 ?接種后每3?d調(diào)查1次病情，計(jì)算病情指數(shù)和發(fā)病率。不同接種方法比較試驗(yàn)連續(xù)調(diào)查14次，其他試驗(yàn)連續(xù)調(diào)查8次。病情分級標(biāo)準(zhǔn)及計(jì)算參照杜嬋娟等[7]的方法稍加修改，病情分級標(biāo)準(zhǔn)：0級指未見枯黃病葉病枝;1級指全株<25%以下萎蔫和死亡;3級指全株25%～50%表現(xiàn)萎蔫和死亡;5級：全株>50%表現(xiàn)萎蔫，但未死亡;7級指整株枯死。病情指數(shù)的計(jì)算公式為：DI={[Σ（各級病株×對應(yīng)級數(shù)值）]/（調(diào)查總株數(shù)×7）}×100。發(fā)病率=（發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)）×100%。

1.2.6 ?抗性評價(jià)方法 ?采用相對抗病程度評價(jià)方法[23]鑒定供試材料的抗性，以病情指數(shù)最高的茉莉花品種（系）為對照，計(jì)算其他品種的相對抗性。相對抗病指數(shù)=（最高病情指數(shù)-評價(jià)品種病情指數(shù)）/最高病情指數(shù)。根據(jù)抗病指數(shù)抗病程度分為5級，免疫：相對抗病指數(shù)為1.0;高抗：相對抗病指數(shù)為0.80～0.99;抗?。合鄬共≈笖?shù)為0.40～0.79;中感：相對抗病指數(shù)為0.20～0.39;高感：相對抗病指數(shù)低于0.20。

1.3 ?數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及作圖，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行方差分析。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?接種方法的比較

以主栽品種橫縣雙瓣茉莉3年生盆栽植株為試材，測試了5種不同接種方法的茉莉發(fā)病情況。由結(jié)果可知，不同接種方法的茉莉初始發(fā)病時(shí)間不同，病情指數(shù)及發(fā)病率亦有不同。接種6?d后，埋土法、混合埋土法、貼莖法及蓋泥炭法開始發(fā)病;接種12?d后，撒表土法開始發(fā)病（圖1）。接種后6～42?d，埋土法的病情指數(shù)均高于其他處理;接種42?d后，埋土法的病情指數(shù)高達(dá)47.93，顯著高于其他接種方法，埋土法與混合埋土法發(fā)病率分別達(dá)到86.67%和90.00%，二者差異不顯著，但顯著高于撒表土法、蓋泥炭法及貼莖法（圖2，表1）。因此，埋土法為茉莉花露天接種白絹病的理想方法。

2.2 ?不同苗齡的病情比較

以1～20年苗齡的橫縣雙瓣茉莉盆栽植株為試材，采用埋土法接種后，各苗齡的茉莉均能發(fā)病，但不同苗齡發(fā)病表現(xiàn)不同。1、3及5年苗齡的接種6?d后開始發(fā)病，10?a的接種9?d后開始發(fā)病，20年生的接種18?d后才開始發(fā)?。▓D3）。

接種24?d后，在發(fā)病率方面，1年苗齡的發(fā)病率與3、5年苗齡的差異不顯著，但顯著高于10、20年苗齡的;而在病情指數(shù)方面，1年苗齡的病情指數(shù)顯著高于其他苗齡，3年與5年的差異不顯著，10年與20年的差異不顯著（表2）。隨著苗齡增加，發(fā)病率及病情指數(shù)有降低趨勢。在接種后0～24?d期間，1年生盆栽發(fā)病最迅速，病情指數(shù)也一直最高，20年的發(fā)病最慢，病情指數(shù)一直處于最低水平。

2.3 ?不同品種（系）抗性鑒定

接種24?d后，不同品種（系）發(fā)病情況及對相對抗性見表3。供試18份茉莉花品種（系）資源中，有抗病品種（系）5個(gè)，占27.78%，相對抗性指數(shù)為0.43～0.75，其中J0718的相對抗性指數(shù)最高，為0.75;有中感品種（系）6個(gè)，占33.33%，相對抗性指數(shù)為0.22～0.37，其中主栽品種橫縣雙瓣茉莉的抗性指數(shù)為0.34;有高感品種（系）7個(gè)，占38.89%，相對抗性指數(shù)為0.00～0.18，其中虎頭茉莉和J1836的抗性指數(shù)最低為0.00，最容易感染茉莉花白絹病。

供試的其他8份素馨屬資源中，有高抗品種1個(gè)，即迎春花，相對抗性指數(shù)為0.93;抗病品種4個(gè)，包括耳葉茉莉、扭肚藤、厚葉素馨及濃香茉莉;中感品種1個(gè)，高感品種2個(gè);高抗及抗病品種占62.50%，可為茉莉花抗性育種提供抗源。

3 ?討論

白絹病抗性鑒定的方法較多，Sennoi等[28]采用帶菌高粱室內(nèi)接種法鑒定洋姜對白絹病的抗性，Shokes等[25]采用菌碟貼莖法比較不同花生品種對白絹病的抗性，晏立英等[23]利用帶菌燕麥粒撒表土法鑒定花生在苗期對白絹病的抗性。據(jù)本文作者預(yù)試驗(yàn)觀察，茉莉花白絹病菌在燕麥粒上的菌絲生長量比在高粱粒上更為豐富，也更易產(chǎn)生菌核。另外，由于茉莉花為木本植物，接種至發(fā)病的時(shí)間較長，菌碟貼莖法中使用的菌碟很容易在較短時(shí)間內(nèi)干縮，導(dǎo)致病菌死亡，不易引起茉莉花發(fā)病。因此，本文選用燕麥粒制備接種體。本研究中，帶菌燕麥粒埋土法接種效果最好，其發(fā)病率及病情指數(shù)最高，其次是混合埋土法，而撒表土法和貼莖法的病情指數(shù)及發(fā)病率顯著低于埋土法和混合埋土法。這與晏立英等[23]在鑒定花生苗期對白絹病的抗性的研究結(jié)論不同，可能是接種環(huán)境及作物不同。本研究中接種的是木本的茉莉花，侵染相對較慢、病程長，貼莖法雖然前期長出了大量的白色菌絲，但由于長時(shí)間暴露在陽光下，受紫外線影響，菌絲不能長期存活，后期侵染能力降低，侵染率不能持續(xù)增加。而撒表土法，由于帶菌燕麥粒直接暴露在表土，離植株根系較遠(yuǎn)，侵染歷程較久，在露天接種環(huán)境下，不利于病菌保濕，前期雖然結(jié)出了菌核，在試驗(yàn)期內(nèi)沒能大量侵染植株。

茉莉花種植3～7?a后進(jìn)入豐產(chǎn)期，生產(chǎn)上也有種植20～30?a不更新的。本研究中，對1～20年苗齡的茉莉花接種相同數(shù)量的白絹病病菌，1年苗齡的盆栽發(fā)病最快、病情指數(shù)及發(fā)病率最高，隨著苗齡增加，開始發(fā)病的時(shí)間延遲、病情有變輕的趨勢。這可能是因?yàn)殡S著苗齡增加，茉莉花根系更為發(fā)達(dá)，木質(zhì)部硬化，病菌不易侵入，因此多年生植株的抗病性更強(qiáng)。而在生產(chǎn)上常見種植多年的茉莉園內(nèi)白絹病發(fā)生嚴(yán)重，可能是因?yàn)槌Ｄ赀B作導(dǎo)致白絹病菌積累量大。因此，在挖除病苗后，應(yīng)盡量補(bǔ)種大苗壯苗。對于新植園，由于茉莉花苗齡普遍較低，更易感病，建議在種植前進(jìn)行全面的土壤處理，壓低菌源;有條件的最好選種抗病品種。

謝玲玲等[31]認(rèn)為單瓣茉莉花香味好，但抗病蟲能力較差，雙瓣茉莉花抗病蟲能力較好而香味次之。在供試18個(gè)茉莉花資源中，5份抗病資源中有單瓣類型茉莉花2個(gè)，雙瓣類型1個(gè)，多瓣類型2個(gè);6個(gè)在中感品種中，有單瓣3個(gè)，雙瓣1個(gè)，多瓣1個(gè);在7個(gè)高感品種中，有單瓣1個(gè)，雙瓣2個(gè)，多瓣4個(gè)。3種不同抗性的茉莉花中，都有單瓣、雙瓣及多瓣類型;3種不同瓣型的茉莉中，都有抗病、中感、高感類型。不宜僅依據(jù)瓣型來判斷抗性強(qiáng)弱，這與謝玲玲等[31]的觀點(diǎn)不同，可能是對不同病害表現(xiàn)不同，本研究是針對白絹病的抗性。供試的其他8份素馨屬資源中，有高抗品種1個(gè)，抗病品種4個(gè)，高抗及抗病品種占62.50%。說明在同屬中有較豐富的抗性資源，可為茉莉花抗性育種提供抗源。

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