吳樹

摘要：目的 分析血液病原體經(jīng)2遍血清學(xué)（酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA））檢測加1遍核酸檢測（NAT）與1遍血清學(xué)檢測加1遍核酸檢測在無償獻血者血液檢測中的應(yīng)用效果情況，為探討更適合的無償獻血血液篩查檢測策略提供參考。方法 選擇2018年9月至2019年8月期間本血站采集的65405份無償獻血者血液標(biāo)本，將其作為常規(guī)組;另選擇2019年9月至2020年8月期間本血站采集的69243份無償獻血者血液標(biāo)本，將其作為實驗組。其中常規(guī)組血液標(biāo)本采用2遍血清學(xué)檢測和1遍核酸檢測，實驗組血液標(biāo)本采用1遍血清學(xué)檢測和1遍核酸檢測檢測。主要對比兩組中乙肝感染標(biāo)志物HBsAg和HBV-DNA檢測不合格率。結(jié)果 常規(guī)組與實驗組血液標(biāo)本HBsAg檢測不合格率分別是0.61%、0.38%（P<0.05），常規(guī)組與實驗組血液標(biāo)本HBV-DNA檢測不合格率分別是0.21%、0.21%（P>0.05）。結(jié)論 在無償獻血者血液病原體檢測中開展1遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，在能夠最大限度降低血液檢測成本，又能夠縮短病毒檢測“窗口期”，達到有效降低輸血感染風(fēng)險，保障臨床用血安全。

關(guān)鍵詞：無償獻血者;核酸檢測;酶聯(lián)免疫吸附試驗;不合格率 ;檢測策略

【中圖分類號】Q461 ? ? ? ? ? ? 【文獻標(biāo)識碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）05-127-01

在無償獻血者血液病原體檢測中，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）為血清學(xué)檢測常用方式之一，其在病毒抗原或抗體檢測中可發(fā)揮良好作用，但是在病毒感染病患感染窗口期以及病毒變異時會出現(xiàn)漏檢情況[1]，是當(dāng)前影響血液安全的主要因素。核酸檢測（NAT）技術(shù)是一種新檢測技術(shù)，具有高度的敏感性和特異性。有研究表明[2]，核酸檢測可將HBV、HCV、HIV感染的平均窗口期縮短9天、59天、11天。而西班牙的Alvarez[3]研究顯示核酸檢測可將血清學(xué)陰性血液HBV的殘留風(fēng)險降低。為探索更適合的無償獻血血液篩查檢測策略，本文通過分別對兩種不同檢測策略下乙肝感染標(biāo)志物HBsAg和HBV-DNA檢測結(jié)果進行分析，現(xiàn)匯報如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2018年9月至2019年8月期間本血站采集的65405份無償獻血者血液標(biāo)本，將其作為常規(guī)組;另選擇2019年9月至2020年8月期間本血站采集的69243份無償獻血者血液標(biāo)本，將其作為實驗組。常規(guī)組中9月-次年8月血液標(biāo)本采集例數(shù)分別是5275份、4843份、5444份、5473份、6036份、4338份、5299份、5688份、5871份、5944份、5359份、5835份。實驗組中9月-次年8月血液標(biāo)本采集例數(shù)分別是5788份、5264份、5527份、6396份、5754份、3884份、5467份、6056份、6627份、6871份、6213份、5396份。兩組一般資料對比，P>0.05，可分組研究。所有獻血者均符合獻血指征。

1.2研究方法

1.2.1檢測試劑

常規(guī)組：2種HBsAg檢測試劑盒（ELISA），分別采購自伯樂公司、北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。

實驗組：1種HBsAg檢測試劑盒（ELISA） ，北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司

核酸檢測試劑：羅氏cobas Taqman MPX test，version2.0（PCR-熒光法），華益美乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（1+2型）核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法）

1.2.2檢測方法

ELISA檢測方法（灰區(qū)設(shè)置0.9）：采集血液標(biāo)本，在離心處理后，選擇血清進行HIV、HBV和HCV感染標(biāo)志物檢測。常規(guī)組分別使用2個不同廠家試劑盒實施檢測，實驗組使用1個廠家試劑盒實施檢測。全部操作均嚴(yán)格按照試劑盒使用說明進行。

核酸檢測方法：核酸標(biāo)本用美國BDEDTA 2K帶分離膠抗凝真空管留取5mL全血，采樣后在4h內(nèi)于2-8℃低溫水平離心機以1600g離心20 min，用于核酸檢測，選擇羅氏全自動核酸檢測系統(tǒng)和華益美核酸檢測系統(tǒng)交替使用，對血清學(xué)（ELISA）檢測陰性結(jié)果標(biāo)本再實施核酸檢測。全部操作均嚴(yán)格按照試劑盒使用說明進行。

常規(guī)組血液標(biāo)本采用2遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，先開展2遍ELISA檢測，對ELISA陰性結(jié)果標(biāo)本再實施核酸檢測。實驗組血液標(biāo)本采用1遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，先選擇一個廠家的試劑盒實施ELISA檢測，對ELISA陰性結(jié)果標(biāo)本再實施核酸檢測。

1.3觀察項目

（1）對比兩組HBsAg檢測不合格率。（2）對比兩組HBV-DNA檢測不合格率。

1.4數(shù)據(jù)處理

在本次研究中，數(shù)據(jù)均使用SPSS22.0軟件開展計算，計數(shù)資料采用百分比的形式表達，實施 X2檢測，當(dāng)檢測結(jié)果顯示 P<0.05時，表明數(shù)據(jù)存在研究價值。

2研究結(jié)果

2.1對比兩組HBsAg檢測不合格率

常規(guī)組血液標(biāo)本HBsAg檢測不合格率高于實驗組（P<0.05）。見下表1：

2.2對比兩組HBV-DNA檢測不合格率

常規(guī)組64443份血液標(biāo)本中，核酸檢測中HBV-DNA不合格數(shù)量為136份;實驗組68503份血液標(biāo)本中，ELISA檢測中HBV-DNA不合格數(shù)量為142份。兩組血液標(biāo)本HBV-DNA檢測不合格率對比無明顯差異（P>0.05）。見下表2：

3討論

機體血液一方面可以維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，另一方面也可發(fā)揮防御效果，機體營養(yǎng)物質(zhì)也會通過血液進行運輸，進而維持生命。同樣血液也會給病毒傳播提供途徑，例如HIV、HBV、HCV等。無償獻血一定程度上會增加病毒傳播機率，使得傳染性疾病發(fā)病率升高。為避免增加傳染性疾病患病率，需要對無償獻血者血液開展病原體檢測。如何最大限度地降低經(jīng)血傳播疾病的危險，確保血液及血液制品的安全，成為各國該領(lǐng)域研究者面臨的主要問題。

ELISA檢測對于生物酶活性能夠發(fā)揮良好催化效果，操作方便，檢測成本低，并且具有較高的敏感。但是對于變異病毒以及處于窗口期的抗原檢測效果不佳，進而出現(xiàn)漏診率高等情況。本次對乙肝感染標(biāo)志物研究中，常規(guī)組血液標(biāo)本HBsAg在ELISA檢測不合格率高于實驗組（P<0.05），同時證明實驗組HBsAg檢出率更低，漏檢率更高，但常規(guī)組與實驗組HBV-DNA的核酸檢測不合格率卻一致。核酸檢測方法對“窗口期”、隱匿性感染標(biāo)本在檢測方面有明顯優(yōu)勢，同一地區(qū)的疾病流行水平下，如果實驗組漏檢率更高，經(jīng)ELISA檢測后進入核酸檢測中潛在陽性標(biāo)本應(yīng)會更多，實驗組HBV-DNA不合格率理應(yīng)升高，但實際結(jié)果卻是一致的，這可能是由于常規(guī)組與實驗組對象分別來自兩個年度下不同的個體，本身就存在一定的流行病學(xué)差異，從實驗組HBV-DNA的不合格率并未發(fā)生偏高，可以推論血液標(biāo)本實施“1遍血清學(xué)檢測加1遍核酸檢測”對比“2遍血清學(xué)檢測加1遍核酸檢測”策略的血液殘余風(fēng)險并未升高，也可以達到2遍血清學(xué)檢測加1遍核酸檢測的血液檢測安全水平。鑒于本次研究中，均未對血清學(xué)陽性、核酸檢測陽性樣本進行確認(rèn)試驗，也沒進行相關(guān)流行病學(xué)追蹤檢測，但也對探尋更優(yōu)的無償獻血者血液篩查檢測策略具有一定的參考意義。

綜上，在無償獻血者血液病原體檢測中開展1遍ELISA檢測和1遍核酸檢測，能夠最大限度降低血液檢測成本，減少經(jīng)濟投入，又能夠縮短病毒檢測“窗口期”，達到有效降低輸血感染風(fēng)險，保障臨床用血安全。

參考文獻：

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[3] Alvarez M，Oyonarte S，Rodríguez PM，et al.Estimated risk of transfusiontransmitted viral infections in Spain.Transfusion，2002，42 （8）：994-998.

[4]張毓，田豐，孫國棟，等.化學(xué)發(fā)光法應(yīng)用于無償獻血者HBsAg陰性/HBV DNA陽性標(biāo)本檢測及其與核酸檢測的關(guān)聯(lián)分析[J].中國輸血雜志，2020，33（7）：651-654.