陳梅 王楠馨 左澤彥 羅紹楠

摘 要：目的：通過對(duì)大腸菌群質(zhì)控樣品的檢測(cè)，比對(duì)VRBA平板計(jì)數(shù)法和LST多管發(fā)酵法在大腸菌群計(jì)數(shù)檢測(cè)中的準(zhǔn)確性，同時(shí)分析移液管和移液槍對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。方法：質(zhì)控樣品來源于中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心，按照質(zhì)控樣品證書和GB 4789.3—2016進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：VRBA平板計(jì)數(shù)法的檢測(cè)結(jié)果|z|值為0.095，LST多管發(fā)酵法的檢測(cè)結(jié)果|z|值為1.349。使用移液管進(jìn)行VRBA平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)的|z|值為0.095，而使用移液槍進(jìn)行VRBA平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)的|z|值為0.804。結(jié)論：相比于LST多管發(fā)酵法，VRBA平板計(jì)數(shù)法的檢測(cè)結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，靈敏度和準(zhǔn)確性更高。相比于移液槍，使用移液管進(jìn)行VRBA平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)的結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，準(zhǔn)確性更高。

關(guān)鍵詞：大腸菌群;質(zhì)控樣品;VRBA平板計(jì)數(shù)法;LST多管發(fā)酵法

大腸菌群是指需氧及兼性厭氧、在35～37 ℃培養(yǎng)條件下，48 h內(nèi)能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽孢桿菌[1-2]。

大腸菌群的檢測(cè)方法主要有VRBA平板計(jì)數(shù)法、乳糖膽鹽多管發(fā)酵法、LST多管發(fā)酵法、紙片法、PCR試劑盒法、全自動(dòng)生化鑒定儀法等。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》（GB 4789.3—2016），在食品檢測(cè)領(lǐng)域，VRBA平板計(jì)數(shù)法、乳糖膽鹽多管發(fā)酵法和LST多管發(fā)酵法是常用的檢測(cè)方法[3-4]。

1 材料與方法

1.1 質(zhì)控樣品來源

質(zhì)控樣品來源于中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心。質(zhì)控樣品為西林瓶真空包裝，包裝完好。

1.2 試劑與儀器

VRBA瓊脂、BGLB肉湯、LST肉湯均購于北京陸橋;氯化鈉試劑購于國藥集團(tuán)。

立式壓力蒸汽滅菌器（型號(hào)：SQ810C，廠家：重慶雅馬拓）;生化培養(yǎng)箱（型號(hào)：BD115，廠家：賓得）;光學(xué)顯微鏡（型號(hào)：DM3000LED，廠家：徠卡）。

1.3 檢驗(yàn)方法

樣品的保存和使用按照中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院測(cè)試評(píng)價(jià)中心的質(zhì)控樣品證書（證書編號(hào)：001FD09035）進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)》（GB 4789.3—2016）的要求進(jìn)行。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及評(píng)價(jià)

VRBA平板計(jì)數(shù)法和LST多管發(fā)酵法的結(jié)果按照GB 4789.3—2016的要求進(jìn)行報(bào)告。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用“z比分?jǐn)?shù)”評(píng)價(jià)。當(dāng)|z|≤2時(shí)，結(jié)果判定為“滿意”;當(dāng)2<|z|<3時(shí)，結(jié)果判定為“可疑”;當(dāng)|z|≥3時(shí)，結(jié)果判定為“不滿意”。

2 結(jié)果與分析

編號(hào)為QC-FD-003的質(zhì)控樣品由3名具有檢驗(yàn)員資質(zhì)的檢測(cè)人員進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)GB 4789.3—2016，每名檢測(cè)人員同時(shí)用LST肉湯多管發(fā)酵法和VRBA平板計(jì)數(shù)法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，以達(dá)到對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行比對(duì)的目的。為了比對(duì)移液管和移液槍對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，每名檢測(cè)人員在進(jìn)行VRBA平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)的時(shí)候，同時(shí)使用移液管和移液槍對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測(cè)。

由表1可知，LST多管發(fā)酵法（移液管）的檢測(cè)結(jié)果的|z|值為1.349，結(jié)果判定為“滿意”。由表2可知，VRBA平板計(jì)數(shù)法（移液管）的檢測(cè)結(jié)果的|z|值為0.095，結(jié)果判定為“滿意”。VRBA平板計(jì)數(shù)的|z|值比LST多管發(fā)酵法的|z|值更小，檢測(cè)結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，二者的P值為0.004，P<0.05，檢測(cè)結(jié)果具有顯著性差異。

由表2可知，使用移液管進(jìn)行VRBA平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)的|z|值為0.095，結(jié)果判定為“滿意”。使用移液槍進(jìn)行VRBA平板計(jì)數(shù)法檢測(cè)的|z|值為0.804，結(jié)果判定為“滿意”。使用移液管進(jìn)行檢測(cè)的|z|值比使用移液槍進(jìn)行檢測(cè)的|z|值更小，檢測(cè)結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，二者的P值為0.013，P<0.05，檢測(cè)結(jié)果具有顯著性差異。

3 討論

大腸菌群是評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一[5]。食品中的大腸菌群檢測(cè)方法包括VRBA平板計(jì)數(shù)法和MPN計(jì)數(shù)法，其中MPN計(jì)數(shù)法又分為GB/T 4789.3—2003的乳糖膽鹽多管發(fā)酵法和GB 4789.3—2016的LST多管發(fā)酵法?，F(xiàn)階段，預(yù)包裝食品中主要采用GB 4789.3—2016中的VRBA平板計(jì)數(shù)法和LST多管發(fā)酵法進(jìn)行檢測(cè)，只有代用茶、油辣椒、粽子等少數(shù)幾類產(chǎn)品采用GB/T 4789.3—2003中的乳糖膽鹽多管發(fā)酵法。

VRBA平板計(jì)數(shù)法中使用的VRBA培養(yǎng)基不需要滅菌，現(xiàn)配現(xiàn)用，配制時(shí)加熱煮沸2 min即可。食品中的大腸菌群是兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，正常情況下不形成芽孢，在VRBA培養(yǎng)基煮沸的過程中，即使培養(yǎng)基和實(shí)驗(yàn)用水中有大腸菌群存在也會(huì)被殺滅，不影響最終的檢測(cè)結(jié)果[6]。VRBA培養(yǎng)基中含有的結(jié)晶紫對(duì)革蘭氏陰性桿菌沒有抑制作用而對(duì)革蘭氏陽性桿菌有較強(qiáng)的抑制作用。相比于其他培養(yǎng)基，VRBA要進(jìn)行兩次傾注，主要有2個(gè)作用：①培養(yǎng)基的二次覆蓋可以在培養(yǎng)皿中形成厭氧微環(huán)境，抑制其他需氧菌的生長，而不會(huì)抑制大腸菌群的生長;②有效抑制菌落的蔓延生長，便于計(jì)數(shù)。

MPN計(jì)數(shù)法也稱為最大可能數(shù)法，是基于泊松分布的一種間接計(jì)數(shù)方法，是統(tǒng)計(jì)學(xué)和微生物學(xué)結(jié)合的一種定量檢測(cè)法，準(zhǔn)確性不如VRBA平板計(jì)數(shù)法[3-4]。

VRBA平板計(jì)數(shù)法適用于大腸菌群含量較高的食品中大腸桿菌的計(jì)數(shù)，操作簡單，靈敏度高，能夠直接計(jì)數(shù)，結(jié)果準(zhǔn)確性高。MPN計(jì)數(shù)法適用于大腸菌群含量較低的食品中大腸菌群的計(jì)數(shù)，是基于統(tǒng)計(jì)學(xué)概率論的間接的計(jì)數(shù)方法，在靈敏度和準(zhǔn)確性上不如VRBA平板計(jì)數(shù)法。在此次質(zhì)控樣品的檢測(cè)中，VRBA平板計(jì)數(shù)法和LST多管發(fā)酵法的檢測(cè)結(jié)果|z|值均≤2，均取得滿意的結(jié)果。VRBA平板計(jì)數(shù)法的結(jié)果|z|值比LST多管發(fā)酵法（MPN法）的結(jié)果|z|值更小，檢測(cè)結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，且檢測(cè)結(jié)果具有顯著性差異，說明VRBA平板計(jì)數(shù)法的靈敏度和準(zhǔn)確性更高。

移液管和移液槍是實(shí)驗(yàn)室常用的加樣器具。GB/T 4789.3—2003中規(guī)定加樣器具只能夠使用無菌移液管，而在GB 4789.3—2016中明確規(guī)定加樣器具除了可以使用無菌移液管之外，還可以使用移液槍。此次質(zhì)控樣品的檢測(cè)對(duì)移液管和移液槍做了比對(duì)，檢測(cè)結(jié)果顯示使用移液管進(jìn)行檢測(cè)的|z|值比使用移液槍進(jìn)行檢測(cè)的|z|值更小，檢測(cè)結(jié)果更接近質(zhì)控樣品的特性值，且檢測(cè)結(jié)果具有顯著性差異，說明使用移液管進(jìn)行檢測(cè)的準(zhǔn)確性更高。

參考文獻(xiàn)

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基金項(xiàng)目：貴州省科學(xué)技術(shù)基金——黔科合字[2013]2059號(hào);貴州省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局科研項(xiàng)目2017kj004號(hào)。

作者簡介：陳梅（1987—），女，布依族，貴州貴陽人，本科，助工。研究方向：食品微生物檢測(cè)。

通信作者：羅紹楠（1987—），男，布依族，貴州獨(dú)山人，碩士，工程師。研究方向：食品微生物檢測(cè)。E-mail ：673079947@qq.com。