李俊菲 唐梅艷 陳歡 徐丹

湘南學(xué)院附屬醫(yī)院婦科，湖南省郴州市 423000

異紫堇堿（isocorydine，ICD）是一種阿樸啡類生物堿，廣泛存在于禿瘡花[Dicranostigma leptopodum（Maxim.）Fedde]、紫金龍[Dactylicapnos scandens（D.Don）Hutchins]等多種罌粟科植物中，臨床用于治療痙攣和血管舒張，以及抗瘧原蟲和抗心律失常等治療[4]。既往研究結(jié)果表明，ICD可以通過誘導(dǎo)宮頸癌SiHa細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯，抑制細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，調(diào)控上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化來抑制宮頸癌細(xì)胞的生長，發(fā)揮抗癌活性的作用[5]。

最近的研究結(jié)果顯示，微小RNA（microRNA，miRNA）參與調(diào)節(jié)不同癌細(xì)胞的輻射敏感性，并在癌癥的發(fā)生和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用[6]；miR-129-5p在宮頸癌組織中低表達(dá)，其表達(dá)的上調(diào)可以抑制宮頸癌細(xì)胞的侵襲、遷移以及荷瘤裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長和血管生成能力[7]；知母皂苷A-Ⅲ抑制腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的特性，有助于抑制磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）通路，提高miR-129-5p的表達(dá)，以及下調(diào)組織蛋白酶C的表達(dá)[8]。然而ICD在宮頸癌輻射敏感性中的作用及其是否通過上調(diào)miR-129-5p和抑制PI3K/Akt信號通路來發(fā)揮作用尚未可知。

本研究探討ICD對宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、輻射敏感性的影響及其潛在的分子機制，為宮頸癌治療藥物的研發(fā)提供新思路。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

宮頸癌SiHa細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Hyclone公司，ICD購自深圳愛拓公司，MTT購自美國Sigma公司，RIPA裂解液購自上海碧云天公司，Lipofectamine 2000試劑、Trizol試劑購自美國Invitrogen公司，cDNA合成試劑盒購自日本TaKaRa公司，聚偏二氟乙烯（PVDF）膜購自美國EMD Millipore公司，二喹啉甲酸（BCA）蛋白濃度測定試劑盒購自美國Pierce公司，磷酸化組蛋白H2AX（phosphorylated histone H2AX，γ-H2AX）抗體購自上海Abcam公司，磷酸化PI3K（p-PI3K）、磷酸化Akt（p-Akt）、β肌動蛋白（β-actin）、細(xì)胞周期蛋白D1（cyclinD1）抗體購自美國Cellular Signaling Technology公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）購自武漢博士德生物有限公司，miR-NC、miR-129-5p、anti-miR-NC、anti-miR-129-5p均購自上海GenePharma公司。Multiscan MK3酶標(biāo)儀購自美國Thermo Scientific公司，7500 PCR儀購自美國ABI公司，Neulife醫(yī)用電子直線加速器購自沈陽東軟醫(yī)療系統(tǒng)有限公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與處理

在宮頸癌SiHa細(xì)胞中加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，于37℃、5% CO2、95%濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每周換液2～3次。選取處于對數(shù)生長期的SiHa細(xì)胞，分別采用25、50、100、200 μmol/L的ICD處理72 h（簡稱ICD處理組，后續(xù)實驗中均采用100 μmol/L的ICD處理72 h），同時將正常培養(yǎng)未經(jīng)ICD處理的SiHa細(xì)胞設(shè)為對照（normal control，NC）組。

1.3 MTT實驗

將密度為5×104個/mL的SiHa細(xì)胞接種于96孔板，培養(yǎng)72 h后加入20 μL 5 mg/mL的MTT溶液，37℃培養(yǎng)4 h，加入150 μL二甲基亞砜，搖床震蕩10 min，于酶標(biāo)儀490 nm波長處測定吸光度（A490值），計算細(xì)胞的增殖抑制率。增殖抑制率（%）=（1?ICD處理組吸光度/NC組吸光度）×100%。

1.4 細(xì)胞克隆形成實驗

收集ICD處理的SiHa細(xì)胞500個，分別使用0、2、4、6、8 Gy X射線照射，劑量率為300 cGy/min。待觀察到明顯的細(xì)胞克隆時，吸棄原有的培養(yǎng)液，分別使用甲醇固定和結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下觀察，以細(xì)胞數(shù)>50個作為1個克隆，計算細(xì)胞的克隆形成率。其中，細(xì)胞克隆形成率（%）=細(xì)胞克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100%，細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)（%）=受照射細(xì)胞克隆形成率/未照射細(xì)胞克隆形成率×100%。通過應(yīng)用GraphPad Prism7軟件（美國GraphPad Software公司）進(jìn)行單擊多靶模型擬合細(xì)胞存活曲線，分析放射生物學(xué)參數(shù)，包括平均致死劑量（D0）、準(zhǔn)閉劑量（Dq）、外推值（N），計算SER，SER=NC組D0/ICD處理組D0。

1.5 Western blot

采用RIPA裂解液提取ICD處理+6 Gy X射線照射后12 h的SiHa細(xì)胞蛋白（檢測γ-H2AX蛋白的表達(dá)）和ICD處理的SiHa細(xì)胞蛋白（檢測p-PI3K和p-Akt蛋白的表達(dá)），經(jīng)二喹啉甲酸（BCA）法定量后，吸取30 μg蛋白樣品進(jìn)行10%的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)PVDF膜，將PVDF膜置于5%脫脂奶粉中室溫封閉1 h，依次加入γ-H2AX、p-PI3K和p-Akt一抗（稀釋比例為1∶1000），用TBST（tris buffered saline with tween）緩沖溶液充分漂洗膜，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（稀釋比例為1∶5000），置于化學(xué)發(fā)光液中曝光顯影。以β-actin作為對照，分析γ-H2AX、p-PI3K和p-Akt蛋白的表達(dá)。

那么，即使藝術(shù)AI能夠產(chǎn)生在第三人稱經(jīng)驗上與人類作品無法區(qū)分的作品，但因為AI并不具有真正的意向能力，所以AI是不能進(jìn)行真正的藝術(shù)創(chuàng)作的。AI利用隨機性算法產(chǎn)生的“作品”本身并不具有藝術(shù)品地位，而是像自然界的奇石一樣，有待具有藝術(shù)意向能力的意識主體的揀選。當(dāng)且僅當(dāng)一個藝術(shù)家用藝術(shù)發(fā)現(xiàn)的眼光將一個“現(xiàn)成物”——一塊奇石、一個小便池或一件AI產(chǎn)生的作品——揀選出來并命名為藝術(shù)品時，這個物件才有了藝術(shù)表達(dá)的含義。相比之下，AI本身卻沒有做出這種判斷的能力和資格，所以基于深度學(xué)習(xí)算法的AI無論什么時候都不可能進(jìn)行真正的藝術(shù)“創(chuàng)作”。

1.6 實 時 熒 光 定 量PCR（real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）

采用Trizol試劑提取ICD處理的SiHa細(xì)胞總RNA，按照cDNA合成試劑盒說明書進(jìn)行操作，通過反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，進(jìn)行qRT-PCR。miR-129-5p的上游引物序列為5′-GATCCGCAAGCCCAGACCG CAAAAAGTTTTTA-3′，下游引物序列為5′-AGCT TAAAAACTTTTTGCGGTCTGGGCTTGCG-3′。內(nèi)參蛋白β-actin的上游引物序列為5′-CTACAAT GAGCTGCGTGTGG-3′，下游引物序列為5′-TAGC TCTTCTCTCCAGGGAGGA-3′。根據(jù)2?ΔΔCt法計算miR-129-5p的相對表達(dá)量。

1.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

將密度為1×105個/mL的SiHa細(xì)胞接種于6孔板中，待細(xì)胞生長至70%匯合度時，嚴(yán)格按照Lipofectamine 2000試劑說明書上的操作，分別轉(zhuǎn)染miR-NC、miR-129-5p、anti-miR-NC、anti-miR-129-5p到SiHa細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染48 h后，在轉(zhuǎn)染anti-miR-NC、anti-miR-129-5p的細(xì)胞中分別加入100 μmol/L的ICD。參照1.3～1.6節(jié)中所述方法進(jìn)行SiHa細(xì)胞的增殖和輻射敏感性、γ-H2AX蛋白的表達(dá)、PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)、miR-129-5p的相對表達(dá)量的測定；參照1.5 節(jié)中所述方法檢測cyclinD1蛋白的表達(dá)，其一抗稀釋比例為1∶1000。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料符合正態(tài)分布以xˉ±s表示，2組間數(shù)據(jù)的比較采用獨立樣本t檢驗（方差齊）。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度ICD對SiHa細(xì)胞增殖的影響

MTT實驗結(jié)果顯示，與NC組SiHa細(xì)胞的增殖抑制率[（0.05±0.01）%]相比，25、50、100、200 μmol/L ICD處理組能夠明顯提高SiHa細(xì)胞的增殖抑制率[（10.26±1.03）%、（22.16±2.21）%、（44.09±4.41）%、（70.88±7.09）%]，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）（圖1）。

圖1 不同濃度異紫堇堿對宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖的影響 a表示與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=29.736、30.013、29.959、29.970，均P<0.05）Figure 1 Effect of different concentrations of isocorydine on the proliferation of cervical cancer SiHa cells

2.2 ICD對SiHa細(xì)胞輻射敏感性的影響

與NC組比較，100 μmol/L ICD處理組能夠明顯降低2、4、6、8 Gy X射線照射的SiHa細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)（均P<0.05，圖2A），且提高γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量（P<0.05，圖2B），細(xì)胞的SER為1.12（表1）。

表1 ICD聯(lián)合X射線照射對宮頸癌SiHa細(xì)胞作用的單擊 多靶模型的參數(shù)值Table 1 Statistical results of single-click multi-target model of the effect of isocorydine combined with X-ray irradiation on cervical cancer SiHa cells

圖2 ICD對宮頸癌SiHa細(xì)胞輻射敏感性的影響 A為ICD對宮頸癌SiHa細(xì)胞輻射敏感性的影響，a表示與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=19.135～44.478，均P<0.05）；B為Western blot檢測γ-H2AX蛋白的表達(dá)，與對照組比較，ICD處理組能提高γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量（t=15.041，P<0.05）。ICD為異紫堇堿；γ-H2AX為磷酸化組蛋白H2AXFigure 2 Effect of isocorydine on the radiosensitivity of cervical cancer SiHa cells

2.3 ICD對miR-129-5p表達(dá)的影響

qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，與NC組比較，ICD處理組能夠明顯提高SiHa細(xì)胞中miR-129-5p的相對表達(dá)量（3.22±0.32對1.00±0.11，t=19.682，P<0.05）。

2.4 高表達(dá)miR-129-5p對SiHa細(xì)胞增殖和輻射敏感性的影響

由圖3可見，與轉(zhuǎn)染miR-NC組比較，轉(zhuǎn)染miR-129-5p組能夠明顯提高SiHa細(xì)胞中miR-129-5p的相對表達(dá)量（P<0.05，圖3A），這表明高表達(dá)miR-129-5p的細(xì)胞已構(gòu)建成功；與轉(zhuǎn)染miR-NC組比較，轉(zhuǎn)染（高表達(dá)）miR-129-5p組能夠明顯提高SiHa細(xì)胞的增殖抑制率[（75.06±7.51）%對（1.04±0.10）%，P<0.05，圖3B]，降低2、4、6、8 Gy X射線照射后細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)（均P<0.05，圖3C），降低cyclinD1蛋白的相對表達(dá)量（P<0.05，圖3D），并提高γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量（P<0.05，圖3E），細(xì)胞的SER為1.68（表2）。

表2 高表達(dá)miR-129-5p聯(lián)合X射線照射對宮頸癌SiHa細(xì) 胞作用的單擊多靶模型的參數(shù)值Table 2 Statistical results of single-click multi-target model of the effects of miR-129-5p overexpression combined with X-ray irradiation on cervical cancer SiHa cells

圖3 高表達(dá)miR-129-5p對宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖和輻射敏感性的影響 A為實時熒光定量PCR檢測miR-129-5p的相對表達(dá)量，a表示與轉(zhuǎn)染miR-NC組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=20.192，P<0.05）；B為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽實驗檢測細(xì)胞的增殖抑制率，a表示與轉(zhuǎn)染miR-NC組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=29.566，P<0.05）；C為高表達(dá)miR-129-5p對SiHa細(xì)胞輻射敏感性的影響，a表示與轉(zhuǎn)染miR-NC組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.239～37.015，均P<0.05）；D為cyclinD1、γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量，a表示與轉(zhuǎn)染miR-NC組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=17.393、17.076，均P<0.05）；E為Western blot檢測cyclinD1、γ-H2AX蛋白的表達(dá)。NC為對照；cyclinD1為細(xì)胞周期蛋白D1；γ-H2AX為磷酸化組蛋白H2AXFigure 3 Effect of high expression of miR-129-5p on the proliferation and radiosensitivity of cervical cancer SiHa cells

2.5 低表達(dá)miR-129-5p對IDC處理的SiHa細(xì)胞的增殖和輻射敏感性的影響

由圖4可見，與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組比較，轉(zhuǎn)染anti-miR-129-5p（低表達(dá)miR-129-5p）+ICD處理組能夠明顯降低SiHa細(xì)胞中miR-129-5p的相對表達(dá)量（P<0.05，圖4A）、細(xì)胞的增殖抑制率[（21.09±2.11）%對（71.49±7.15）%，P<0.05，圖4B]，能夠提高2、4、6、8 Gy X射線照射后細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)（均P<0.05，圖4C）、cyclinD1蛋白的相對表達(dá)量（P<0.05，圖4D），并降低γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量（P<0.05，圖4E），細(xì)胞的SER為0.83（表3）。

表3 低表達(dá)miR-129-5p聯(lián)合X射線照射對ICD處理的宮頸癌SiHa細(xì)胞作用的單擊多靶模型的參數(shù)值Table 3 Statistical results of single-click multi-target model of the effect of miR-129-5p underexpression combined with X-ray irradiation on cervical cancer SiHa cells treated with isocorydine

圖4 低表達(dá)miR-129-5p對ICD處理的SiHa細(xì)胞的增殖和輻射敏感性的影響 A為實時熒光定量PCR檢測miR-129-5p的相對表達(dá)量，a表示與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.655，P<0.05）；B為3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽實驗檢測細(xì)胞的增殖抑制率，a表示與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=20.282，P<0.05）；C為低表達(dá)miR-129-5p對ICD處理的SiHa細(xì)胞輻射敏感性的影響，a表示與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.920～28.252，均P<0.05）；D為cyclinD1、γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量，a表示與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.854、10.290，均P<0.05）；E為Western blot檢測cyclinD1、γ-H2AX蛋白的表達(dá)。NC為對照；ICD為異紫堇堿；cyclinD1為細(xì)胞周期蛋白D1；γ-H2AX為磷酸化組蛋白H2AXFigure 4 Effect of low expression of miR-129-5p on the proliferation and radiosensitivity of cervical cancer SiHa cells treated with isocorydine

2.6 PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)

由圖5可見，與NC組比較，ICD處理組能夠明顯降低SiHa細(xì)胞的p-PI3K、p-Akt蛋白的相對表達(dá)量（均P<0.05）；與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組比較，轉(zhuǎn)染anti-miR-129-5p（低表達(dá)miR-129-5p）+ICD處理組能夠顯著提高SiHa細(xì)胞中p-PI3K、p-Akt蛋白的相對表達(dá)量（均P<0.05）。

圖5 低表達(dá)miR-129-5p反轉(zhuǎn)ICD對p-PI3K、p-Akt蛋白的抑制作用 A為p-PI3K、p-Akt蛋白的相對表達(dá)量，a表示與NC組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=14.897、15.429，均P<0.05），b表示與轉(zhuǎn)染anti-miR-NC+ICD處理組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.370、13.396，均P<0.05）；B為Western blot檢測p-PI3K、p-Akt蛋白的表達(dá)。NC為對照；ICD為異紫堇堿；p-PI3K為磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶；p-Akt為磷酸化蛋白激酶BFigure 5 Underexpression of miR-129-5p reverses the inhibitory effect of isocorynine on phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase and phosphorylated protein kinase B expression

3 討論

宮頸癌的發(fā)病率和病死率在女性惡性腫瘤中排名第四位，2018年全球新發(fā)宮頸癌約570 000例，死亡311 000例[9]。在發(fā)達(dá)國家，由于婦科疾病篩查率的提高和人乳頭瘤病毒（HPV）疫苗使用的增加，宮頸癌的發(fā)病率有所下降[9]，大多數(shù)新發(fā)病例和死亡病例發(fā)生在發(fā)展中國家[10]，宮頸癌的治療仍然是這些國家面臨的一個重大的臨床問題。手術(shù)、化療聯(lián)合放療是目前宮頸癌的主要治療方法。近年來，隨著放療技術(shù)的進(jìn)步和發(fā)展，其在臨床中的作用日益突出。放療不僅在局部進(jìn)展期宮頸癌中起著關(guān)鍵作用，而且在術(shù)后治療中也可作為輔助治療方法用于防止局部復(fù)發(fā)[11]。盡管隨著宮頸癌篩查率的逐漸提高和治療策略的進(jìn)步，宮頸癌患者的生存率有所提高，但仍有一些患者因腫瘤轉(zhuǎn)移或耐藥而死亡[12]，宮頸癌細(xì)胞對輻射敏感性的降低是部分患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要原因[13]。目前仍需要新的針對宮頸癌患者的有效治療方法。因此，有必要研究宮頸癌細(xì)胞的輻射耐受機制，開發(fā)宮頸癌輻射增敏的藥物，尋找宮頸癌放療耐受患者潛在的新的治療靶點。

ICD是一種很有潛力的抗癌藥物，既往研究結(jié)果表明，ICD參與細(xì)胞的增殖、凋亡和遷移等過程，具有良好的抗癌活性[5]。ICD通過抑制肝癌細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）信號通路，抑制阿霉素誘導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[14]，并可能通過抑制核因子κB（NF-κB）通路活性抑制人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞的增殖和遷移，以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[15]。ICD對子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞的增殖、遷移具有抑制作用，對細(xì)胞凋亡具有促進(jìn)作用，具體機制與抑制PI3K/Akt/NF-κB信號通路活性緊密相關(guān)[16]。然而，有關(guān)ICD對宮頸癌輻射敏感性的影響仍不清楚。本研究結(jié)果顯示，ICD能夠明顯抑制SiHa細(xì)胞的增殖，降低2、4、6、8 Gy X射線照射后SiHa細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)，提高γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量，細(xì)胞的SER為1.12。這些結(jié)果表明，ICD對宮頸癌細(xì)胞表現(xiàn)出一定的抗增殖和輻射增敏的作用，與之前的研究結(jié)果[5]相符。

miRNA是一類小的非編碼RNA，包含18～24個核苷酸，可與靶基因的3′非編碼區(qū)特異性結(jié)合。有研究者報道，一些miRNA參與調(diào)節(jié)不同癌細(xì)胞的輻射反應(yīng)，以增加其輻射敏感性[17]。例如：miR-15a-3p通過靶向腫瘤蛋白D52增加了宮頸癌細(xì)胞的輻射敏感性[18]；miR-122-5p通過靶向細(xì)胞分裂周期蛋白25A提高了宮頸癌細(xì)胞的輻射敏感性[19]。MiR-129-5p已被證明是一種腫瘤抑制因子，具有抗癌活性[20-21]。研究結(jié)果顯示，miR-129-5p通過抑制乳腺癌細(xì)胞的自噬和高遷移率族蛋白B1的表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞凋亡，增強乳腺癌MCF-7細(xì)胞對紫杉醇的敏感性[22]。MiR-129-5p在宮頸癌中表達(dá)下調(diào)，可以抑制宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，然而其在宮頸癌細(xì)胞耐輻射中的功能和具體分子機制尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，ICD明顯提高了SiHa細(xì)胞中miR-129-5p的表達(dá)，這提示ICD增強宮頸癌細(xì)胞輻射敏感性的機制可能與miR-129-5p的表達(dá)有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示，高表達(dá)miR-129-5p能夠明顯提高SiHa細(xì)胞的增殖抑制率，降低2、4、6、8 Gy X射線照射的細(xì)胞的存活分?jǐn)?shù)，降低cyclinD1蛋白的相對表達(dá)量，并提高γ-H2AX蛋白的相對表達(dá)量，細(xì)胞的SER為1.68，這表明miR-129-5p表達(dá)上調(diào)可以抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖，這與之前的研究結(jié)果[7]一致。

PI3K/Akt信號通路在宮頸癌的輻射敏感性中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[23]。黃濤[16]指出，ICD對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和遷移的抑制作用，以及對細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用是通過抑制PI3K/Akt信號通路的激活來實現(xiàn)的。Liu等[20]發(fā)現(xiàn)，miR-129-5p通過PI3K/Akt信號通路直接靶向同源異形盒轉(zhuǎn)錄因子6（PAX6），抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和腫瘤的生長，從而抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的進(jìn)展。本研究結(jié)果顯示，ICD能夠明顯降低p-PI3K、p-Akt蛋白的表達(dá)，低表達(dá)miR-129-5p可以反轉(zhuǎn)ICD對SiHa細(xì)胞的增殖抑制作用、抑制PI3K/Akt信號通路活性的作用和增強細(xì)胞輻射敏感性的作用。以上結(jié)果表明，上調(diào)miR-129-5p表達(dá)并抑制PI3K/Akt信號通路活性可能是ICD抑制宮頸癌細(xì)胞增殖、增強其輻射敏感性的重要途徑。

綜上，本研究結(jié)果表明，ICD可以抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖，并增強其輻射敏感性，具有一定的抗癌活性，其作用機制與上調(diào)miR-129-5p表達(dá)及抑制PI3K/Akt信號通路活性有關(guān)。本研究為臨床提高宮頸癌患者放療敏感性提供了有價值的靶點和治療策略。

利益沖突本研究由署名作者按以下貢獻(xiàn)聲明獨立開展，不涉及任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明李俊菲負(fù)責(zé)方法的建立、論文的撰寫；唐梅艷、陳歡負(fù)責(zé)現(xiàn)場的實驗；徐丹負(fù)責(zé)論文的審閱。