盧詩劍，陳 俊，黃 丹，李金庫，劉文婷，黃衛(wèi)萍

（1.廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530001；2.廣西弄峰山鐵皮石斛科技股份有限公司，廣西 南寧 530001）

鐵皮石斛（Dendrobium candidum）是多年生附生草本植物,屬于蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium）藥用植物[1]。我國的浙江、四川、安徽、貴州、廣西、云南等省份有較大面積的種植，東南亞的緬甸、泰國、越南等地也有分布[2]。鐵皮石斛中含有石斛多糖、微量元素和生物堿等物質(zhì)，這一類物質(zhì)具有廣泛的藥理活性，如：清除自由基、抗氧化、抗腫瘤和抗衰老等，因此，鐵皮石斛成為新藥、藥妝、保健功能食品的新型功效原料的研究熱點，得到廣大健康產(chǎn)品研發(fā)人員的重視。石斛多糖類物質(zhì)是鐵皮石斛抗氧化的主要活性成分，有學(xué)者對鐵皮石斛多糖提取物與同等質(zhì)量的透明質(zhì)酸鈉進(jìn)行了保濕性能研究，結(jié)果表明，鐵皮石斛提取物在2～4h 內(nèi)，能很好地保持皮膚表皮細(xì)胞的水分，防止干燥損傷，兩者有相當(dāng)?shù)谋裥Ч鸞3]。鐵皮石斛保濕、抗氧化的作用得到越來越多的驗證，藥妝行業(yè)對其需求量日益增長。本研究通過低溫超微破壁技術(shù)提取鐵皮石斛多糖，研發(fā)鐵皮石斛護(hù)膚產(chǎn)品，為鐵皮石斛的綜合開發(fā)利用提供新路徑。

1 材料與方法

1.1 試驗器材

電磁爐、不銹鋼鍋、剪刀、蒸發(fā)皿、1000mL 量筒、低溫超微破壁榨汁機(jī)、80 目篩、圓錐瓶、天平、德國Corneometer CM825 型皮膚水分測量儀。

1.2 試驗藥材

質(zhì)量優(yōu)良的鐵皮石斛，由廣西弄峰山鐵皮石斛科技股份有限公司提供，經(jīng)廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)系戴傳勇副教授鑒定為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium）的鐵皮石斛的莖。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗方案設(shè)計和藥材處理方法

試驗方案的設(shè)計流程為：藥材采購→低溫超微研磨→膠原蛋白制備→鐵皮石斛活力煥膚液的研制。

挑選市場上質(zhì)量優(yōu)良的鐵皮石斛，洗凈，在溫水中“淬”2～3min，取出切成1.0～2.0 cm 的小段，后置純凈水中冷卻后備用。

1.3.2 試驗步驟

鐵皮石斛提取液制備：將鐵皮石斛洗凈，在沸水中煮1 min，取出后靜置冷卻，切成0.5～2.0 cm 的小段備用，將切小段后的150g 鐵皮石斛與1500mL 純凈水置于榨汁機(jī)中（水料液比為1∶10），啟動榨汁機(jī)，得到鐵皮石斛研磨粗液[4]。過40 目藥篩，用電磁爐煮沸，清除表面浮起的葉綠素，清除干凈后，置冰箱0～5℃冷藏過夜。取上清液，裝干凈玻璃瓶備用。

膠原蛋白制備：稱取明膠100g，加純凈水500mL 浸泡10min，然后水浴加熱，不斷攪拌溶化成液體。明膠液移出水浴待降溫至50°C 時，加入蛋白酶粉3g，攪拌均勻，然后水浴保溫50～55°C 水解4h，不斷攪拌；水解4h 后，將水浴溫度升至85°C、30min 滅酶；滅酶后加熱至100°C 滅菌，裝干凈玻璃瓶備用。

將上述石斛提取液、膠原蛋白液、茉莉花精油和甘油葡糖苷按比例優(yōu)選最佳原料配方比，選取最佳配方。

1.4 最佳原料配比考察

將石斛提取液、膠原蛋白、茉莉花精油和甘油葡糖苷按照表1 配比，混合加熱至85 ℃，維持30min 滅菌，讓基料自然冷卻到50℃時，將上述鐵皮石斛研磨上清液加到圓錐瓶的基料中，沿同一個方向不斷震蕩25 min，混合均勻，得鐵皮石斛活力煥膚液，考察其性狀與細(xì)膩度、保濕性和刺激性，實驗確定最佳配比。

表1 鐵皮石斛活力煥膚液配方（單位：mL）

1.4.1 細(xì)膩度與性狀

稱取上述鐵皮石斛活力煥膚液樣品15g，置于干凈玻璃板上，觀察其外觀性狀。稱取1.0g 的活力煥膚液樣品，隨機(jī)請10 名女性（年齡18～25 歲），將其均勻涂抹在受試者手臂內(nèi)側(cè)，用手、鼻、眼等感官指標(biāo)評價其細(xì)膩度[5]，綜合評價見表2。

表2 不同配比鐵皮石斛煥膚液形狀與細(xì)膩度評價表

根據(jù)以上試驗結(jié)果，綜合考慮鐵皮石斛活力煥膚液性狀、細(xì)膩程度、效果，確定配方3 綜合評價更突出。

1.4.2 保濕性實驗

將實驗中溫度控制在25±1℃，用5cm×5cm 的醫(yī)用透氣膠帶模擬人體皮膚，稱取0.5g 鐵皮石斛活力煥膚液樣品，均勻涂布于模擬膠帶表面，將其置于含有變色硅膠（RH=50%）的干燥器中，稱取12h 后的重量，并計算其保濕率[6]。

（1）式中:G1為放置前樣品的質(zhì)量，g；G2為放置12 h 后樣品的質(zhì)量，g。

3 個配方樣品放置12 h 后，保濕率測試結(jié)果為（配方1～3）：31.9%，32.6%，33.1%；RSD 為1.02%，1.21%，0.56%。數(shù)據(jù)表明配方3 保濕率最高、配方1 相對較弱。

1.4.3 刺激性實驗

選擇40 名志愿者（要求：年齡在18～22 歲、男女各半、皮膚健康），將志愿者的左手手背，均勻涂抹適量鐵皮石斛活力煥膚液樣品作為實驗觀察，右手手背不涂抹作為對照觀察，保持15min 后，用溫清水洗去，對3 種不同配方鐵皮石斛活力煥膚液進(jìn)行涂抹試用，觀察涂抹手背皮膚的變化現(xiàn)象，連續(xù)進(jìn)行7d 實驗測試。經(jīng)過上述實驗，志愿者反饋3 種不同配方的鐵皮石斛活力煥膚液，均未出現(xiàn)明顯的過敏、皮膚紅腫、瘙癢等不良刺激現(xiàn)象。

2 結(jié)果與分析

2.1 確定制法及配比

根據(jù)上述研究實驗，鐵皮石斛活力煥膚液的工藝為：鐵皮石斛凈制、切段，1∶10 料液比低溫研磨提取并除去葉綠素，60 目篩網(wǎng)濾過，與制備好的膠原蛋白液、甘油葡糖苷按10∶3∶2 的比例混合后，再加入4.67%比例的茉莉花精油即得。

2.2 配方的保濕性能驗證

按照配方3，制作好鐵皮石斛活力煥膚液樣品，對照樣品選取市場認(rèn)可度較高的同類保濕品種百雀羚水潤深層保濕乳，批號：20200916，規(guī)格：100mL，按照自愿原則選取10 名年齡在18～22 歲的女性志愿者，采用隨機(jī)、單盲分為實驗組和對照組，實驗組使用樣品涂抹兩側(cè)臉頰，對照組則使用百雀羚水潤深層保濕乳涂抹兩側(cè)臉頰，受試期間不得使用其他護(hù)膚產(chǎn)品，早晨潔面后使用一次，晚上臨睡前使用1 次，15d 為一個周期。在使用前、使用后第5d、第10d 和第15d 分別進(jìn)行檢測志愿受試者皮膚角質(zhì)層水分含量。皮膚角質(zhì)層的含水量（MMV）能反映出皮膚的干燥程度，從而體現(xiàn)產(chǎn)品的保濕功效。測試前受試者需要在恒溫恒濕24±2℃、相對濕度50%±5%環(huán)境下靜坐15 min，按要求潔面并暴露測試部位。啟動CM825 型測量儀皮膚水分測試探頭測定實驗組、對照組受試部位的MMV，5 次平衡測試取平均值，結(jié)果以MMV 表示[6]。通過測定實驗組、對照組受試者兩頰在使用樣品前和使用不同時間后MMV 值，用公式（2）計算樣品MMV 變化率，從而檢驗產(chǎn)品的保濕性能。使用軟件SPSS 19.0 處理數(shù)據(jù)，進(jìn)行t 檢驗。

圖1 為根據(jù)上述實驗測得實驗組、對照組受試者在使用樣品不同時間后皮膚含水量變化率。由圖1 可知，實驗組使用鐵皮石斛活力煥膚液樣品后皮膚含水量變化率隨著使用時間逐漸增大，隨使用時間增加顯著提高，而對照組使用百雀羚后皮膚含水量變化率隨時間變化不大，兩者變化率對比具有顯著差異（P＜0.05），說明鐵皮石斛煥膚液可顯著增加皮膚表皮的水合作用，具有即時和延期保濕效果。

圖1 鐵皮石斛煥膚液與百雀羚水潤深層保濕乳皮膚含水變化率

3 討論

通過文獻(xiàn)檢索確定鐵皮石斛的成分，主要含石斛多糖，以低溫超微研磨提取工藝進(jìn)行提取，最大程度保證多糖的活性，減少由于傳統(tǒng)長時間加熱提取所造成的有效成分滅失的可能，最大限度保持鐵皮石斛多糖原液的活性，再加入皮膚所必需的膠原蛋白液，起到補(bǔ)充水分、修復(fù)皮膚基底和充盈皮膚間隙的作用，再加入天然萃取的道地茉莉花精油，在天然芬芳、舒緩肌膚的同時，緩解身體的緊張情緒，起到內(nèi)外兼修、綜合調(diào)養(yǎng)肌膚的作用，再輔以甘油葡糖苷作為保濕劑，深度鎖住水分，保持肌膚滋養(yǎng)、保證肌膚一整天的活力煥發(fā)。

對確定的配方工藝制成的鐵皮石斛煥膚液進(jìn)行保濕性能評價，結(jié)果證明制成的鐵皮石斛煥膚液符合《化妝品注冊和備案檢驗工作規(guī)范》的要求，使用后，皮膚無不良刺激、過敏、紅腫等情況。

4 結(jié)語

本實驗采用低溫超微破壁技術(shù)提取鐵皮石斛多糖作為主要原料，加入產(chǎn)地萃取的廣西橫縣茉莉花精油，研制出來的鐵皮石斛煥膚液具有較好的保濕、護(hù)膚、滋養(yǎng)的效果，同時安全，無不良刺激、過敏等現(xiàn)象，符合國家化妝品的相關(guān)要求，這將為鐵皮石斛、茉莉花綜合開發(fā)利用提供新思路、新路徑。