黃 妹, 徐夢(mèng)婷, 韓 明, 王桂良, 陳 旋, 文劍波

黃妹, 徐夢(mèng)婷, 韓明, 王桂良, 陳旋, 萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院消化內(nèi)科 江西省萍鄉(xiāng)市 337000

0 引言

食管癌是起源于食管鱗狀細(xì)胞及柱狀細(xì)胞的惡性腫瘤,其中我國主要以鱗狀細(xì)胞癌為主, 占90%以上, 而美國和歐洲主要以腺癌為主, 占70%左右[1]. 食管癌是嚴(yán)重威脅人類健康及生命的疾病, 在全球發(fā)生率位居第七, 死亡率位居第六[2]. 由于食管癌早期癥狀不明顯及缺乏早期篩查的方法, 一般診斷食管癌時(shí)都已是中晚期[3]. 盡管目前治療方法較前明顯提高, 但由于中晚期食管癌的浸潤、轉(zhuǎn)移及高復(fù)發(fā)率, 其5年生存率低于20%, 預(yù)后仍然較差[4]. 但到目前為止食管癌發(fā)生的分子機(jī)制尚未完全清楚.

熱休克轉(zhuǎn)錄因子1 (heat shock transcription fact 1,HSF1)是熱休克轉(zhuǎn)錄因子(HSFs) DNA結(jié)合蛋白家族中的一員, 是熱應(yīng)激調(diào)節(jié)基因的直接轉(zhuǎn)錄激活因子, 可通過識(shí)別熱休克原件的簡單啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn), 編碼熱休克蛋白, 協(xié)助機(jī)體應(yīng)對(duì)導(dǎo)致蛋白錯(cuò)誤折疊的各種應(yīng)激, 如休克、中毒、缺氧、輻射等[5]. 在正常組織中HSF1可協(xié)助機(jī)體度過各種外界應(yīng)激而存活. 但在癌癥組織中,HSF1可促進(jìn)癌細(xì)胞的增值、浸潤、轉(zhuǎn)移及抑制凋亡,從而促進(jìn)腫瘤的生長[6]. 由于HSF1在腫瘤發(fā)生和腫瘤進(jìn)展中的重要性, 靶向轉(zhuǎn)錄因子已被越來越多地接受. 由于缺乏抑制HSF1轉(zhuǎn)錄活性的有效和特異性藥物, 靶向HSF1仍處于臨床前測(cè)試階段.

目前對(duì)于中晚期食管鱗狀細(xì)胞癌出現(xiàn)食管狹窄而喪失手術(shù)機(jī)會(huì)的患者, 局部放療、化療及支架姑息治療是首選[7]. 在臨床治療中發(fā)現(xiàn), 不同的食管鱗狀細(xì)胞癌患者對(duì)放化療的敏感度不同, 實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)HSF1在不同食管鱗狀細(xì)胞癌患者中表達(dá)也不同. 那么HSF1的表達(dá)程度是否會(huì)影響食管鱗狀細(xì)胞癌放化療敏感度呢？目前國內(nèi)外對(duì)此研究甚少. 本研究目的是要探究: 食管鱗狀細(xì)胞癌中HSF1表達(dá)情況及其對(duì)放化療敏感度是否有影響？這既為研究食管鱗狀細(xì)胞癌的靶向治療提供了方向, 又為臨床評(píng)估食管鱗狀細(xì)胞癌放化療療效及選擇治療方案提供臨床參考意義.

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本入選標(biāo)準(zhǔn): 觀察組: 萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院2013-01-01/2018-01-30日食管鱗狀細(xì)胞癌患者病理蠟塊. 食管癌患者符合2018年版食管癌診斷標(biāo)準(zhǔn), 符合以下要求: (1)病理確診為食管鱗狀細(xì)胞癌患者; (2)年齡為18歲-75歲;(3)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅰ、Ⅱ期, 行手術(shù)治療、術(shù)前未行放化療治療而術(shù)后行化療的患者; (4)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期, 行手術(shù)治療、術(shù)前未行放化療治療而術(shù)后行化療的患者; (5)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期, 接受三維適行放療及化療而不手術(shù)治療的患者; (6)病理確診為食管不典型增生的患者”. [納入患者符合條件(1)和(2)和(3)或(4)或(5)或(6)其中一項(xiàng)]; 對(duì)照組: 病理確診為食管炎癥患者.

1.1.2 標(biāo)本排除標(biāo)準(zhǔn): (1)病理類型是非食管鱗狀細(xì)胞癌患者; (2)接受手術(shù)治療, 術(shù)前行放化療治療或術(shù)后未行化療治療的食管鱗狀細(xì)胞癌患者; (3)確診食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅰ、Ⅱ期而未行手術(shù)治療患者; (4)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期, 接受三維適行放療及化療后手術(shù)治療的患者; (5)確診為食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期,接受非三維適行放療患者; (6)有影響患者壽命的基礎(chǔ)疾病, 如心衰、肺心病、腎衰、肝硬化、腦梗死等;(7)不是因?yàn)槭彻馨┧劳龅氖彻荀[狀細(xì)胞癌患者.

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè)[8]: 操作步驟: (1)抗原/切片的準(zhǔn)備: 切片厚度3 um, 60-65 ℃烤片4 h, 備用; (2)切片脫蠟, 水化: 依次為二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ→無水乙醇Ⅰ→無水乙醇Ⅱ→95%乙醇→90%乙醇→85%乙醇→75%乙醇各10 min; (3)1×PBS緩沖液(pH7.2)洗滌切片3×5 min; (4)石蠟切片組織抗原修復(fù), 高壓修復(fù)方式, 在高壓鍋噴氣后開始記時(shí), 時(shí)間2 min; (5)每張切片加1滴(50 μL)過氧化物酶阻斷溶液, 以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性, 室溫下孵育10 min; (6)PBS沖洗3×3 min;(7)甩去PBS液, 每張切片加1滴(50 μL)的非免疫性動(dòng)物血清, 室溫下孵育10 min; (8)甩去血清, 每張切片加1滴第一抗體(sp9000, 羊抗鼠/兔, 兔抗稀釋1:250, ab52757,Abcam), 4 ℃過夜; (9)PBS沖洗3×5 min; (10)甩去PBS液, 每張切片加1滴或50 μL生物素標(biāo)記的第二抗體(DAB顯色試劑: 試劑B底物H2O2(20x) 15 mL), 室溫下孵育10 min; (11)PBS沖洗3×3 min; (12)甩去PBS液,每張切片加1滴或50 μL鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液(DAB顯色試劑: 試劑底物C: DAB顯色劑(20x) 15 mL), 室溫下孵育10 min; (13)PBS沖洗3×3 min; (14)甩去PBS液, 每張切片加1-2滴新鮮配制的DAB, 顯微鏡下觀察3-10 min, 陽性顯色為棕色或黃色; (15)自來水沖洗, 蘇木素復(fù)染, 自來水沖洗10-15 min; (16)切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥, 中性樹膠封固; (17)每張片子在200倍鏡下和400倍鏡下各采一張圖; (18)染色結(jié)果: 細(xì)胞漿呈現(xiàn)黃色或棕色部位是陽性結(jié)果. (DAB顯色試劑資料: 產(chǎn)品編號(hào)Cat.No: DAB-0031/1031, 適用范圍: 本試劑盒適用于辣根過氧化酶(HRP)系統(tǒng)的免疫組化染色如PAP、ABC和SP等. 產(chǎn)品形式: 液體. 含A: 緩沖液(20x) 15 mL; B: 底物H2O2(20x) 15 mL; C: DAB顯色劑(20x) 15 mL.

1.2.2 HSF1表達(dá)程度判讀方法: (1)HSF1定性分析: 以染色陽性細(xì)胞率及強(qiáng)度判斷HSF1表達(dá)程度[9]. 兩名對(duì)臨床病理學(xué)信息不了解的獨(dú)立觀察員通過評(píng)估: a: 陽性染色細(xì)胞的比例(0分, <5%; 1分, 6%-25%; 2分, 26%-50%; 3分, 51%-75%; 4分, >75%). b: 染色強(qiáng)度(0分,陰性染色; 1分, 僅細(xì)胞質(zhì)染色; 2分, 低核染色; 3分, 強(qiáng)核染色). 分?jǐn)?shù)是a×b的乘積. HSF1高表達(dá)組: 腫瘤細(xì)胞中a×b≥7分; HSF1低表達(dá)組: 腫瘤細(xì)胞中a×b<7分.(2)HSF1半定量分析: 平均光密度值及平均灰度值[10].通過軟件(motic 1.0)對(duì)圖片的總區(qū)域亮度進(jìn)行數(shù)據(jù)分析, 測(cè)得每張圖片平均光密度值及平均灰度值. 光密度是染色圖片中所有黃色像素點(diǎn)的強(qiáng)度值全部累加起來得到的值, 用得到的光密度值除以圖片面積則是平均光密度值; 灰度是用來表示數(shù)字圖像中像素顏色深淺的程度. 從最黑到最亮共分為256個(gè)灰度級(jí), 最小值為0, 在圖像顯示屏上為最黑點(diǎn);最大值為255, 在圖像顯示屏上為最亮點(diǎn). 灰度值越小物體顏色越深. 平均灰度值是多次測(cè)得同張圖片灰度值后求平均值. 光密度與平均灰度都能通過目標(biāo)顏色的深淺程度而測(cè)量物質(zhì)的含量.

1.2.3 三維適形放射治療[11]: (1)三維適形放射治療過程及方法: 患者實(shí)施仰臥位真空負(fù)壓袋固定, 做好體表標(biāo)記. 口服鋇粥, 通過螺旋CT掃描, 層厚為3-5 mm, 對(duì)患者的全肺以及腫瘤部位加掃10層. 由2位資深腫瘤臨床醫(yī)師及1名影像學(xué)技師共同勾畫腫瘤靶區(qū)、臨床靶區(qū)、計(jì)劃靶區(qū)以及危及器官. 腫瘤靶區(qū)總劑量為63 Gy, 2.1 Gy/次, 臨床靶區(qū)總劑量為54 Gy, 1.8 Gy/次5次/周, 通常需要6 wk左右完成; (2)判斷標(biāo)準(zhǔn): 完全緩解、部分緩解、無變化、進(jìn)展, 有效率 = (完全緩解例數(shù)+部分緩解例數(shù))/總例數(shù)×100%.

RECIST(2000版)療效判斷標(biāo)準(zhǔn): 靶病灶評(píng)價(jià): (1)完全緩解: 所有靶病灶消失; (2)部分緩解: 靶病灶最長徑之和與基線狀態(tài)病灶比較, 至少較少30%; (3)病變穩(wěn)定:介于部分緩解及疾病進(jìn)展之間; (4)病變進(jìn)展: 靶病灶最長徑之和與治療開始之后所記錄的最小靶病灶最長徑之和比較, 增加20%, 或出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)新病灶. 非靶病灶評(píng)價(jià): (1)完全緩解: 所有非靶病灶消失和腫瘤標(biāo)志物恢復(fù)正常; (2)未完全緩解/穩(wěn)定: 存在一個(gè)或多個(gè)非靶病灶和/或腫瘤標(biāo)志物持續(xù)高于正常值; (3)病變進(jìn)展: 出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)新病灶或已有的非靶病灶明確進(jìn)展.

1.2.4 隨訪: 采用電話和門診途徑隨訪, 隨訪時(shí)間截止2021-01-30, 失訪病例15例. 放療后隨訪: 所有患者行同步放化療治療6 wk. 完成放化療治療療程后第30 d復(fù)查CT、消化道鋇餐造影、超聲、胃鏡、腫瘤標(biāo)志物, 評(píng)估食管鱗狀細(xì)胞癌患者腫瘤直徑大小、非靶病灶變化(淋巴結(jié)大小及數(shù)量變化、轉(zhuǎn)移病灶大小和病灶數(shù)量變化)及腫瘤標(biāo)志物如癌胚抗原(CEA)數(shù)值的變化.

統(tǒng)計(jì)患者生存時(shí)間: 從確診為食管鱗狀細(xì)胞癌的日期到死亡或是最后一次隨訪的時(shí)間.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 22進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, 數(shù)據(jù)均數(shù)以mean±SD表示; 組間比較: 經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后,若方差齊, 兩組間用t檢驗(yàn), 兩組間以上比較用單因素方差分析; 若方差不齊, 則使用非參數(shù)檢驗(yàn); 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法驗(yàn)證兩組間的差異; 等級(jí)資料采用非參數(shù)檢驗(yàn); 使用Kaplan-Meier法統(tǒng)計(jì)食管鱗狀細(xì)胞癌患者總體生存期, 并用Log-rank法檢驗(yàn)不同組間生存率的差異; 統(tǒng)計(jì)值P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 食管鱗狀細(xì)胞癌與HSF1的表達(dá)

2.1.1 各組HSF1的表達(dá)情況: 于病理科獲取食管炎癥組織組、食管不典型增生組、食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅰ、Ⅱ期手術(shù)切除組、食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期手術(shù)切除組及食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療組的病理蠟塊, 通過免疫組化技術(shù), 檢測(cè)各組HSF1的表達(dá)情況.

5組間HSF1表達(dá)存在差異,χ2= 19.07,P= 0.001,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 詳見表1; 其中, 食管炎癥組HSF1的表達(dá)與食管不典型增生組HSF1的表達(dá)無差異,P= 1.0,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 各食管鱗狀細(xì)胞癌組間HSF1的表達(dá)無差異,P>0.05, 均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 食管炎癥組及食管不典型增生組HSF1的表達(dá)分別與各食管鱗狀細(xì)胞癌組HSF1的表達(dá)有差異,P<0.05, 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 食管鱗狀細(xì)胞癌HSF1低表達(dá)及病理見圖1與圖2; 食管鱗狀細(xì)胞癌HSF1高表達(dá)及病理見圖3與圖4.

表1 不同組熱休克轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)情況

圖1 食管鱗狀細(xì)胞癌組織中熱休克轉(zhuǎn)錄因子1低表達(dá).

圖2 食管鱗狀細(xì)胞癌組織熱休克轉(zhuǎn)錄因子1低表達(dá)病理.

圖3 食管鱗狀細(xì)胞癌組織中熱休克轉(zhuǎn)錄因子1高表達(dá).

圖4 食管鱗狀細(xì)胞癌組織熱休克轉(zhuǎn)錄因子1高表達(dá)病理.

2.1.2 不同組平均光密度值及平均灰度值: 通過平均光密度值及平均灰度值半定量分析所有組的HSF1表達(dá)情況, 得出結(jié)果如下: 不同組平均光密度值有差異, F =13.092,P<0.001, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 不同組平均灰度值有差異,F= 16.977,P<0.001, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 在不同組間,食管炎癥組織組與食管不典型增生組平均光密度值及平均灰度值無差異,P>0.05, 均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 各食管鱗狀細(xì)胞癌組間平均光密度值及平均灰度值無差異,P>0.05, 均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 食管炎癥組織組及食管不典型增生組分別與各食管鱗狀細(xì)胞癌組平均光密度值及平均灰度值有差異,P<0.05, 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. HSF1高表達(dá)組平均光密度值及平均灰度值與HSF1低表達(dá)組有差異,P<0.001, 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 具體詳見表2

表2 不同組平均光密度值及平均灰度值

2.1.3 HSF1表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者臨床特征的關(guān)系: 在食管鱗狀細(xì)胞癌患者中, HSF1表達(dá)情況與年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程、T分期、N分期、M分期無關(guān), 所有P>0.05, 均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.HSF1高表達(dá)組平均年齡為64.7歲±9.0歲, HSF1低表達(dá)組平均年齡為64.5歲±8.7歲; HSF1高表達(dá)組平均腫瘤直徑大小為5.02 cm±1.53 cm, HSF1低表達(dá)組平均腫瘤直徑大小為5.27 cm±1.32 cm; 具體詳見表3.

表3 食管鱗狀細(xì)胞癌患者臨床特征與熱休克轉(zhuǎn)錄因子1表達(dá)的關(guān)系

2.2 HSF1與食管鱗狀細(xì)胞癌放化療敏感度的關(guān)系

2.2.1 放化療前后腫瘤直徑及腫瘤標(biāo)志物CEA數(shù)值變化: 統(tǒng)計(jì)食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療組中HSF1低表達(dá)組及HSF1高表達(dá)組放化療前后腫瘤直徑及腫瘤標(biāo)志物CEA數(shù)值變化, 結(jié)果顯示: (1)放化療前, HSF1低表達(dá)組及HSF1高表達(dá)組腫瘤直徑無明顯差異,t=0.148,P= 0.883, 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 放化療后, HSF1低表達(dá)組腫瘤直徑比HSF1高表達(dá)組減小更明顯,t= 3.095,P= 0.003, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. HSF1低表達(dá)組及HSF1高表達(dá)組放化療前后腫瘤直徑大小均存在明顯差異,P<0.05, 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; (2)放化療前, HSF1高表達(dá)組CEA值比HSF1低表達(dá)組高,t= 3.794,P<0.001, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 放化療后, HSF1低表達(dá)組CEA值比HSF1高表達(dá)組下降更明顯,t= 3.787,P<0.001, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. HSF1低表達(dá)組放化療前后CEA數(shù)值明顯下降,t=3.324,P= 0.006, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. HSF1高表達(dá)組放化療前后CEA數(shù)值不下降,t= 0.808,P= 0.426, 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 具體詳見表4.

表4 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期患者放化療前后腫瘤直徑及CEA數(shù)值變化

2.2.2 放化療后, Ⅲ、Ⅳ期食管鱗狀細(xì)胞癌患者獲益情況: 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療組中分成HSF1低表達(dá)組及HSF1高表達(dá)組, 統(tǒng)計(jì)兩組中患者放化療后非腫瘤病灶(淋巴節(jié)大小及數(shù)量, 轉(zhuǎn)移灶大小及數(shù)量)的變化情況, 以評(píng)估患者接受放化療后獲益情況. 患者獲益分為緩解(完全緩解及部分緩解)及穩(wěn)定, 進(jìn)展則視為不受益. 在放化療后, HSF1低表達(dá)組的患者獲益比HSF1高表達(dá)組的更明顯,χ2= 6.946,P= 0.031, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 具體詳見表5.

表5 放化療后Ⅲ、Ⅳ期食管鱗狀細(xì)胞癌患者獲益情況

2.2.3 HSF1表達(dá)程度與食管鱗狀細(xì)胞癌放化療的敏感度關(guān)系: 統(tǒng)計(jì)食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療組中HSF1低表達(dá)組及HSF1高表達(dá)組放化療敏感度關(guān)系,結(jié)果顯示: HSF1低表達(dá)組比HSF1高表達(dá)組對(duì)放化療更敏感, Fisher’值:P= 0.005, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 具體詳見表6.

表6 熱休克轉(zhuǎn)錄因子1與Ⅲ、Ⅳ期食管鱗狀細(xì)胞癌放化療敏感度的關(guān)系

2.3 食管鱗狀細(xì)胞癌患者3年生存期

2.3.1 食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除患者3年生存期與各臨床特征的關(guān)系: 統(tǒng)計(jì)食管癌手術(shù)切除(即第3組及第4組)患者臨床相關(guān)特征, 結(jié)果顯示: 食管癌手術(shù)切除患者3年生存期與年齡、HSF1表達(dá)程度、N分期及T分期有關(guān), 所有P<0.05,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 且年齡越大、HSF1表達(dá)程度越高、N分期及T分期越高, 患者3年生存期越低. 患者3年生存期與性別、腫瘤部位、腫瘤大小及分化程度無關(guān), 所有P>0.05,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 具體詳見表7.

表7 食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除患者3年存期與各臨床特征的關(guān)系

2.3.2 食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除組患者3年總體生存率:通過kaplan-meier法及Log-rank法檢驗(yàn)食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除組患者中HSF1低表達(dá)組與HSF1高表達(dá)組3年總體生存率的差異. 結(jié)果顯示: (1)所有食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除組患者3年總體生存率為33.3%, 平均生存時(shí)間為38.0 mo±2.7 mo, 95%可信區(qū)間[32.6, 43.3],中位生存時(shí)間為31.0 mo±3.9 mo, 95%可信區(qū)間[23.5,38.6]; (2)食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除組患者中HSF1低表達(dá)組3年總體生存率比HSF1高表達(dá)組3年總體生存率高χ2= 5.851,P= 0.016,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 具體見圖5及圖6.

圖5 食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除組患者3年總體生存曲線.

圖6 食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除組患者熱休克轉(zhuǎn)錄因子1低表達(dá)組及高表達(dá)組3年總體生存曲線(χ2 = 5.851, P = 0.016).

2.3.3 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者3年總體生存率: 通過kaplan-meier法對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者進(jìn)行3年總體生存率分析, 結(jié)果顯示:(1)食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者1年生存率為67.7%、2年生存率為27.4%、3年生存率為6.5%; 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者平均生存時(shí)間為17.9 mo±1.1 mo, 95%可信區(qū)間[15.7, 20.1]; 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者中位生存時(shí)間為16.0 mo±0.7 mo, 95%可信區(qū)間[14.6, 17.4].

通過kaplan-meier法及Log-rank法檢驗(yàn)食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者中HSF1低表達(dá)組與HSF1高表達(dá)組之間3年總體生存率的差異. 結(jié)果顯示: (1)在食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者中, HSF1低表達(dá)組1年、2年及3年的總體生存率比HSF1高表達(dá)組高,P<0.05, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 具體詳見表8; (2)食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者中HSF1低表達(dá)組3年總體生存率比HSF1高表達(dá)組3年總體生存率高,χ2= 4.692,P= 0.03,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 具體詳見圖7、圖8.

圖7 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者3年總體生存曲線.

圖8 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者熱休克轉(zhuǎn)錄因子1低表達(dá)組及高表達(dá)組3年總體生存曲線(χ2 = 4.692, P = 0.03).

表8 食管鱗狀細(xì)胞癌Ⅲ、Ⅳ期放化療患者3年總體生存率、平均生存期及中位生存期

3 討論

3.1 食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制與HSF1的關(guān)系 目前研究發(fā)現(xiàn)miRNA (微小RNA)、lncRNA (長非編碼RNA)與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生密切相關(guān), 而HSF1卻可調(diào)控miRNA及l(fā)ncRNA, 說明HSF1與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生有著某種聯(lián)系. miRNA由20-24個(gè)核苷酸組成, 在許多與癌癥相關(guān)的生物學(xué)過程中起著至關(guān)重要的作用, 例如分化, 增殖, 遷移和凋亡[12]. miRNA通常通過與靶mRNA的3’-非翻譯區(qū)(3’-UTR)中存在的互補(bǔ)區(qū)段結(jié)合并在通過調(diào)節(jié)癌基因和抑癌基因參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[13]. 目前研究發(fā)現(xiàn)miR-671-5p、miR-495、miR-143等miRNA與食管鱗狀細(xì)胞癌密切相關(guān)[14-16]. lncRNA是一組長度超過200個(gè)核苷酸的RNA, 很少參與蛋白質(zhì)編碼,但以各種形式調(diào)節(jié)基因表達(dá), 包括表觀遺傳調(diào)控, 衍生調(diào)控和轉(zhuǎn)錄后控制[17]. lncRNA還參與了胚胎干細(xì)胞多能性、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控等過程[18]. 多種報(bào)道顯示, lncRNA與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān). 根據(jù)許多研究表明, HSF1可通過調(diào)節(jié)miRNAs及l(fā)ncRNAs, 從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長[19].這表明HSF1與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生有密切關(guān)系.

3.2 HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá) 通過免疫組化技術(shù)檢測(cè)各組食管鱗狀細(xì)胞癌HSF1的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn), 各組食管鱗狀細(xì)胞癌HSF1的表達(dá)均比正常組織及食管不典型增生組織中HSF1表達(dá)高. 而食管不典型增生為食管鱗狀細(xì)胞癌的癌前病變, 其HSF1表達(dá)程度與正常組織相似, 未呈現(xiàn)有高表達(dá)趨勢(shì). 說明暫時(shí)未有證據(jù)能證明HSF1可作為食管鱗狀細(xì)胞癌早期篩查的指標(biāo). 因?yàn)橹型砥谑彻馨╊A(yù)后較差, 嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量, 未來更應(yīng)關(guān)注于發(fā)展食管癌早期的篩查技術(shù)及指標(biāo). 在許多研究中已發(fā)現(xiàn): HSF1在胃癌[9]、肝細(xì)胞癌[20]、胰腺癌[21]、乳腺癌[22]、結(jié)腸癌[23]、肺小細(xì)胞癌[24]、骨肉瘤[25]、食管鱗狀細(xì)胞癌[26]中呈高表達(dá), 且其表達(dá)程度與患者預(yù)后不良有密切關(guān)系. 在肝細(xì)胞癌[20]中, HSF1通過激活BAG3-NFκB信號(hào)通路及MAPK信號(hào)通路通過抗凋亡及促進(jìn)細(xì)胞增殖而促進(jìn)肝細(xì)胞癌的生長. 在胰腺癌[21,27]中, AMPK激活的缺失介導(dǎo)了HSF1的異常激活, 從而促進(jìn)胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移. 在乳腺癌[28,22]中, 蛋白激酶B(AKT)直接與HSF1相互作用, 并在Ser326處通過磷酸化激活HSF1. 這種活化的HSF1促進(jìn)HER2過表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT). 同時(shí)HSF1高表達(dá)使得HSP70, HSP90,抗凋亡Bcl-2蛋白和巨噬細(xì)胞遷移抑制因子的水平顯著上升, 這些都有助于HER2陽性乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展. 在結(jié)腸癌[23]中, HSF1通過調(diào)節(jié)BAG3-Mcl-1信號(hào)通道而抗凋亡以此促進(jìn)結(jié)腸癌發(fā)展. 由此可見, HSF1在各種腫瘤中通過調(diào)節(jié)不同通路而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展. 目前HSF1在促進(jìn)腫瘤發(fā)展的具體作用通路在不斷被發(fā)掘與探究,這將為臨床治療腫瘤提供一種選擇. 本研究及其它研究也發(fā)現(xiàn): HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中也呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài), 但HSF1如何促進(jìn)食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、遷移與抗凋亡, 其具體通路仍然不清晰, 如若要研究HSF1作為食管鱗狀細(xì)胞癌的特異性靶向治療, 未來需要的更多基礎(chǔ)研究進(jìn)行探索. 由上述可知, HSF1在促進(jìn)腫瘤的發(fā)展中至關(guān)重要, 未來它有望成為腫瘤生物治療的關(guān)鍵靶點(diǎn).

3.3 HSF1高表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者臨床特征無關(guān) 本研究顯示, HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中高表達(dá),而HSF1的表示卻與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位、腫瘤分化程度、腫瘤T分期、腫瘤N期、腫瘤M分期無關(guān). 在Tsukao等[26]研究中, 發(fā)現(xiàn)在食管鱗狀細(xì)胞癌中, HSF1也與患者臨床特征無關(guān). 但是在Liao等[29]研究中, 發(fā)現(xiàn)在食管鱗狀細(xì)胞癌中, HSF1表達(dá)與腫瘤分期,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān). 在Dai等[9]研究中, 發(fā)現(xiàn)在胃癌中, HSF1表達(dá)與腫瘤大小、晚期Bornmann分類、晚期浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān). 在Cui等[24]研究中, 發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌中, HSF1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān).在Santagatas等[22]研究中, 發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中, HSF1的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí), 腫瘤大小和診斷時(shí)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān). 在Liang等[21]研究中, 發(fā)現(xiàn)在胰腺癌中, HSF1的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移及血管浸潤有關(guān). 在Tao等[30]薈萃分析中也的到相同結(jié)果. 而本研究中卻發(fā)現(xiàn)HSF1表達(dá)與各臨床特征無關(guān), 可能是病例數(shù)偏少, 使結(jié)果存在偏差, 為能進(jìn)一步明確HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)是否與各臨床特征有關(guān), 未來還需要收集更大量、多中心的標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證.

3.4 HSF1高表達(dá)可降低食管鱗狀細(xì)胞癌放化療療效 研究結(jié)果顯示: HSF1高表達(dá), 降低了食管鱗狀細(xì)胞癌對(duì)放化療的敏感度, 削弱了放化療的療效. HSF1可通過控制細(xì)胞代謝、促進(jìn)增殖、浸潤、遷移及抗細(xì)胞凋亡從而控制腫瘤的發(fā)生發(fā)展. 放射治療主要是通過輻射破壞DNA, 促進(jìn)細(xì)胞凋亡, 從而達(dá)到殺滅腫瘤的目的. 但由于食管鱗狀細(xì)胞癌中HSF1高表達(dá), 通過各方面增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡能力, 增加了細(xì)胞對(duì)外界惡性環(huán)境的耐受性, 從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞在接受放射治療時(shí), 表現(xiàn)出抵抗輻射的毒副作用, 而繼續(xù)存活[31]. 化療是通過化療藥物控制DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)合成等生物過程, 抑制細(xì)胞增殖, 而遏制腫瘤細(xì)胞生長以達(dá)到抗腫瘤作用[32]. 同樣,HSF1可通過各種信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞增殖, 而降低腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感度. 在Zhang等[33]研究中顯示: HSF1和自噬均可降低肝細(xì)胞癌細(xì)胞對(duì)化學(xué)治療劑的敏感性.而HSF1通過增強(qiáng)表柔比星誘導(dǎo)的保護(hù)性自噬, 顯著減弱了表柔比星對(duì)HCC細(xì)胞的殺傷作用. HSF1是通過促進(jìn)ATG4B基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性而升高表達(dá), 從而增強(qiáng)保護(hù)性自噬,減輕了肝細(xì)胞癌細(xì)胞對(duì)表柔比星的敏感性. 食管鱗狀細(xì)胞癌中HSF1高表達(dá)患者能夠降低化療藥物的療效, 是否食管鱗狀細(xì)胞癌中也存在HSF1增強(qiáng)保護(hù)性自噬的作用機(jī)制呢？這值得未來進(jìn)一步探討. 本研究證明HSF1可降低食管鱗狀細(xì)胞癌放化療的療效, 這可為臨床評(píng)估放化療療效及選擇食管鱗狀細(xì)胞癌治療方案提供參考.

（二）研究主要問題：本研究主要以殯葬業(yè)從業(yè)青年為研究對(duì)象，以他們?cè)跉浽嵝袠I(yè)單位享受到的“薪酬福利、工作條件、成長機(jī)制”，他們?cè)诼殬I(yè)中感受到的“社會(huì)認(rèn)同、職業(yè)價(jià)值、職業(yè)壓力”為研究問題，通過研究對(duì)象在職業(yè)感受中的個(gè)人體會(huì)，反映出殯葬業(yè)從業(yè)青年的典型職業(yè)感受。本研究的深度訪談提綱和訪談問卷均按照以上研究問題來設(shè)計(jì)實(shí)施。

4 結(jié)論

(1)HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá), HSF1表達(dá)越高, 提示患者預(yù)后不良; HSF1高表達(dá)與患者臨床特征無關(guān); (2)在ESCC Ⅲ、Ⅳ期放化療組中, HSF1表達(dá)越高, 患者對(duì)放化療敏感性越差; (3)在ESCC手術(shù)切除組及ESCC Ⅲ、Ⅳ期放化療組患者中, HSF1低表達(dá)組3年總體生存率比HSF1高表達(dá)組高.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

食管癌發(fā)病率及死亡率在全世界都極高, 且治療效果不佳. 由于目前對(duì)食管癌發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚, 這不利于食管癌特異性治療藥物的研究. 通過閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn), 熱休克轉(zhuǎn)錄因子1 (heat shock transcription fact 1,HSF1)與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān), 那么HSF1是否也與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)呢？在不同中晚期食管鱗狀細(xì)胞癌患者中, 不同患者對(duì)放化療敏感度不一樣, 已有研究證明, 在肝細(xì)胞癌中, HSF1會(huì)削弱放化療對(duì)腫瘤的毒性作用從而降低療效, 那么HSF1是否會(huì)影響食管鱗狀細(xì)胞癌對(duì)放化療的敏感性呢？

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

本文主要是研究HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)情況及其是否可成為治療食管鱗狀細(xì)胞癌的生物靶標(biāo); 研究HSF1表達(dá)對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌患者放化療敏感性的影響.探究HSF1是否可成為評(píng)估食管鱗狀細(xì)胞癌放化療敏感性的指標(biāo).

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

本研究目的是驗(yàn)證HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)情況及HSF1表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后關(guān)系; 分析HSF1表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌患者對(duì)放化療敏感性的關(guān)系及HSF1表達(dá)對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌患者3年總體生存率的影響.

實(shí)驗(yàn)方法

本文通過收集各組患者病理蠟塊, 通過免疫組化方法檢測(cè)各組中HSF1表達(dá)情況; 分析HSF1與食管鱗狀細(xì)胞癌患者預(yù)后的關(guān)系; 分析放化療組食管鱗狀細(xì)胞癌患者在放化療后非腫瘤病灶變化、腫瘤直徑變化及CEA值變化的關(guān)從而探究HSF1對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌患者放化療敏感性的影響; 通過采用電話和門診途徑隨訪, 分析HSF1對(duì)患者3年總體生存率的影響; 所有數(shù)據(jù)使用SPSS 22進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析; 統(tǒng)計(jì)值P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為: (1)HSF1在各食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)組中高表達(dá), 在食管炎癥組及食管不典型增生組中低表達(dá), 且各ESCC組與食管炎癥組及食管不典型增生組的HSF1表達(dá)情況存在差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; (2)放化療后, ESCC Ⅲ、Ⅳ期放化療組中HSF1低表達(dá)組與HSF1高表達(dá)組相比, 非腫瘤病灶減少更多, 腫瘤直徑減小更大, CEA值下降更明顯, 均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; (3)在ESCC手術(shù)切除組中, HSF1低表達(dá)組3年總體生存率比HSF1高表達(dá)組高, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; (4)在ESCCⅢ、Ⅳ期放化療組中, HSF1低表達(dá)組1年、2年及3年生存率均比HSF1高表達(dá)組高, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; HSF1低表達(dá)組3年總體生存率比HSF1高表達(dá)組高, 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義. 這表明HSF1可能成為潛在治療食管鱗狀細(xì)胞癌的生物靶標(biāo), 也表明HSF1可成為評(píng)估食管鱗狀細(xì)胞癌患者放化療效果的指標(biāo).

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本研究結(jié)論: (1)HSF1在食管鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá), HSF1表達(dá)越高, 提示患者預(yù)后不良; HSF1高表達(dá)與患者臨床特征無關(guān); (2)在ESCC Ⅲ、Ⅳ期放化療組中, HSF1表達(dá)越高, 患者對(duì)放化療敏感性越差; (3)在ESCC手術(shù)切除組及ESCC Ⅲ、Ⅳ期放化療組患者中, HSF1低表達(dá)組3年總體生存率比HSF1高表達(dá)組高. 這為臨床醫(yī)生治療食管鱗狀細(xì)胞癌提供一定指導(dǎo)作用, 但未來仍需更多實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步驗(yàn)證此實(shí)驗(yàn)結(jié)論.

展望前景

眾多研究已證明: HSF1在促進(jìn)腫瘤的發(fā)展中至關(guān)重要,未來它有望成為腫瘤生物治療的關(guān)鍵靶點(diǎn). 為了驗(yàn)證HSF1可成為治療食管鱗狀細(xì)胞癌的生物靶標(biāo), 未來還需要收集更大量、多中心的標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證.