鮑巖巖　高英杰　周利潤(rùn)　耿子涵　姚榮妹　韓冰　葛一蒙　崔曉蘭　時(shí)宇靜

摘要 目的：考察復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒肺炎、呼吸道合胞病毒肺炎、腺病毒咽炎的藥效作用。方法：采用甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠肺炎模型，考察復(fù)方芩蘭口服液對(duì)模型小鼠的死亡率、死亡抑制率、平均存活天數(shù)及生命延長(zhǎng)率的影響，對(duì)肺組織及支氣管病變的影響，以及對(duì)血清免疫因子的影響;采用腺病毒感染ICR小鼠咽炎模型，考察復(fù)方芩蘭口服液對(duì)模型小鼠咽喉部黏膜組織病變的影響;采用呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠肺炎模型，考察復(fù)方芩蘭口服液對(duì)模型小鼠肺指數(shù)、肺組織及支氣管病變、血清免疫因子及肺組織免疫因子的影響。結(jié)果：復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒感染有一定的死亡保護(hù)作用，治療給藥可以改善肺組織及肺支氣管病變、降低血清免疫因子水平;復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染有良好的預(yù)防作用，治療給藥可以改善肺組織及肺支氣管病變、降低血清及肺組織免疫因子水平;復(fù)方芩蘭口服液對(duì)腺病毒引起的咽炎有良好的治療作用，可以改善咽部病變。結(jié)論：復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒肺炎、呼吸道合胞病毒肺炎、腺病毒咽炎均有良好的療效。

關(guān)鍵詞 復(fù)方芩蘭口服液;甲型流感病毒;呼吸道合胞病毒;腺病毒;藥效作用;肺炎;咽炎;免疫因子

Study on the Effect of Compound Qinlan Oral Liquid on Respiratory Viral Infection

BAO Yanyan1，GAO Yingjie1，ZHOU Lirun1，GENG Zihan1，YAO Rongmei1，HAN Bing2，GE Yimeng2，CUI Xiaolan1，SHI Yujing1

（1 Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China; 2 Heilongjiang ZBD Pharmaceutical Co.，Ltd.，Hulin 158400，China）

Abstract Objective：To investigate the efficacy of compound Qinlan oral liquid on influenza A virus pneumonia，respiratory syncytial virus pneumonia，and adenovirus pharyngitis.Methods：In this study，influenza A virus （A/FM/1/47（H1N1） was used to infect ICR mouse pneumonia models to investigate the mortality，death inhibition rate，average survival days and the average survival time of compound Qinlan oral liquid on model mice，the effect of life extension rate，the effect on lung tissue and bronchial lesions，and the effect on serum immune factors; adenovirus infection ICR mouse pharyngitis model was used to investigate the effect of compound Qinlan oral liquid on the mucosal tissue lesions of the throat of the model mice; Using respiratory syncytial virus infection ICR mouse pneumonia model to investigate the effects of compound Qinlan Oral Liquid on lung index，lung tissue and bronchial disease，serum immune factors and lung tissue immune factors in model mice.Results：The results of the study indicated that compound Qinlan Oral Liquid had a certain death protection effect against influenza A virus infection.Therapeutic administration can improve lung tissue and lung bronchial diseases，and reduce serum immune factor content; compound Qinlan Oral Liquid had a beneficial effect on the respiratory tract.Cytovirus infection has a good preventive effect.Therapeutic administration can improve lung tissue and lung bronchial disease，reduce serum and lung tissue immune factor content; compound Qinlan Oral Liquid had a good therapeutic effect on adenovirus-induced pharyngitis，and can improve the pharynx Department of disease.Conclusion：Compound Qinlan Oral Liquid has a good effect on influenza A virus pneumonia，respiratory syncytial virus pneumonia，and adenovirus pharyngitis.

Keywords Compound Qinlan Oral Liquid; Influenza A virus; Respiratory syncytial virus; Adenovirus; Efficacy; Pneumonia; Pharyngitis; Immune factor

中圖分類號(hào)：R283;R56文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.12.007

復(fù)方芩蘭口服液由金銀花、黃芩、連翹、板藍(lán)根4味中藥組成，金銀花為君藥，清熱解毒，疏風(fēng)解表;黃芩為臣藥，助君藥清熱解毒，清熱燥濕，瀉火解毒，用于外部熱邪入肺引起肺熱咳嗽，高熱煩渴;板藍(lán)根、連翹協(xié)助臣藥清熱解毒，散結(jié)消腫，對(duì)外毒內(nèi)侵造成的肺部病變有較好的消腫抗炎和修復(fù)作用。四藥合用，共湊辛涼解表，清熱解毒之功效。臨床報(bào)道其治療急性上呼吸道感染的整體療效較好，且具有較好的安全性[1-4]。為了進(jìn)一步研究復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道病毒感染的藥效作用，本研究采用甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠模型、呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠模型、腺病毒（3型）感染ICR小鼠咽炎模型，考察了復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒感染性肺炎以及腺病毒感染咽炎的藥效作用，為該藥的臨床合理使用提供實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 ICR小鼠（SPF級(jí)），13～15 g、12～14 g，雌雄各半，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。飼養(yǎng)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所ABSL-2生物安全實(shí)驗(yàn)室，溫度18～29 ℃，日溫差≤3 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，新鮮空氣換氣10次/h，噪聲≤60 dB，照度150～300 Lux。本研究所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得到中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)：2019D025。

1.1.2 病毒株 甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））、腺病毒（3型）購(gòu)自美國(guó)典型菌種保藏中心（ATCC），由本ABSL-2生物安全實(shí)驗(yàn)室常規(guī)傳代，-80 ℃保存。

呼吸道合胞病毒購(gòu)自中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒所，由本ABSL-2生物安全實(shí)驗(yàn)室常規(guī)傳代，-80 ℃保存。

1.1.3 藥品 復(fù)方芩蘭口服液（黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：B14190506）;磷酸奧司他韋膠囊（宜昌東陽(yáng)光長(zhǎng)江藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：0221903034）;雙黃連口服液（哈藥集團(tuán)三精制藥有限公司，批號(hào)：19031121）;利巴韋林顆粒（四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：190106）;疏風(fēng)解毒膠囊（安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司，批號(hào)：2190504）。

1.1.4 試劑與儀器 甲醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20180825）;裂解液（Solarbio公司，批號(hào)20191211）;Mouse Chemokine Panel 1（9 plex）多因子檢測(cè)試劑盒（Luminex公司，美國(guó)，批號(hào)：183656017、218355-001）。

A2型生物安全柜（Thermo公司，美國(guó)，型號(hào)：Thermo MSC1.8）;電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：YP1002）;電子天平（梅特勒-托利多儀器公司，型號(hào)：AL204）;IVC小鼠飼養(yǎng)籠（蘇州馮氏股份有限公司，型號(hào)：ZJ-4）;低溫高速離心機(jī)（Eppendorf公司，德國(guó)，型號(hào)：5810R）。

1.2 方法

1.2.1 劑量設(shè)計(jì) 復(fù)方芩蘭口服液成人臨床常規(guī)用量為60 mL/（60 kg·d），換算為小鼠高、中、低等效劑量為22 mL/（kg·d）、11 mL/（kg·d）、5.5 mL/（kg·d），分別相當(dāng)于人臨床用量的2倍、等倍、1/2倍，小鼠灌胃給藥，20 mL/（kg·d），1次/d。磷酸奧司他韋膠囊成人臨床常規(guī)用量為150 mg/（60 kg·d），換算為小鼠等效劑量為27.5 mg/（kg·d），小鼠灌胃給藥，20 mL/（kg·d），1次/d。雙黃連口服液成人臨床常規(guī)用量為60 mL/（60 kg·d），換算為小鼠等效劑量為11 mL/（kg·d），小鼠灌胃給藥，20 mL/（kg·d），1次/d。利巴韋林顆粒成人臨床常規(guī)用量為450 mg/（60 kg·d），換算為小鼠等效劑量為82.5 mg/（kg·d），小鼠灌胃給藥，20 mL/（kg·d），1次/d。疏風(fēng)解毒膠囊成人臨床常規(guī)用量為6.24 g/（60 kg·d），換算為小鼠等效劑量為1.144 g/（kg·d），小鼠灌胃給藥，20 mL/（kg·d），1次/d。

1.2.2 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠的死亡保護(hù)作用 120只ICR小鼠（SPF級(jí)，13～15 g），隨機(jī)分為6組：模型對(duì)照組（Model）、磷酸奧司他韋組（Oseltamivir）、雙黃連口服液組（SHL）、復(fù)方芩蘭口服液高（QL-H）、中（QL-M）、低（QL-L）劑量組，每組20只，雌雄各半。小鼠乙醚輕度麻醉后，滴鼻感染病毒液2×LD50，每只35 μL。各組小鼠于感染后給予相應(yīng)的藥物，模型對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水。連續(xù)給藥5 d，同時(shí)記錄小鼠死亡數(shù)量，連續(xù)觀察14 d。計(jì)算死亡率、死亡抑制率、平均存活天數(shù)及生命延長(zhǎng)率。死亡率=死亡總數(shù)/動(dòng)物總數(shù);死亡抑制率=（模型對(duì)照組死亡率-給藥組死亡率）/模型對(duì)照組死亡率;平均存活天數(shù)=總存活天數(shù)/動(dòng)物總數(shù);生命延長(zhǎng)率=（給藥組平均存活天數(shù)-模型組平均存活天數(shù)）/模型組平均存活天數(shù)×100%。

1.2.3 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠的治療作用 70只ICR小鼠（SPF級(jí)，13～15 g），隨機(jī)分為7組：正常對(duì)照組（Normal）、模型對(duì)照組（Model）、磷酸奧司他韋組（Oseltamivir）、雙黃連口服液組（SHL）、復(fù)方芩蘭口服液高（QL-H）、中（QL-M）、低（QL-L）劑量組，每組10只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外，其他各組小鼠乙醚輕度麻醉后，滴鼻感染病毒液15×LD50，每只35 μL。各組小鼠于感染后給予相應(yīng)的藥物，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水，連續(xù)給藥4 d。第5天，小鼠稱重后眼眶取血并分離血清，采用Mouse Chemokine Panel 1（9 plex）多因子檢測(cè)試劑盒檢測(cè)小鼠血清中的免疫因子水平。

分離肺組織后用10%甲醛溶液固定，48 h后取出流水沖洗，乙醇脫水，二甲苯透明處理，浸蠟包埋，切片;切片分別進(jìn)行HE染色及原位雜交，顯微鏡下觀察（觀察標(biāo)準(zhǔn)見表1）、照相，以下同此方法。

1.2.4 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)腺病毒（3型）致小鼠咽炎模型的治療作用 70只ICR小鼠（SPF級(jí)，13～15 g），隨機(jī)分為7組：正常對(duì)照組（Normal）、模型對(duì)照組（Model）、利巴韋林組（Ribavirin）、疏風(fēng)解毒膠囊組（SFJD）、復(fù)方芩蘭口服液高（QL-H）、中（QL-M）、低（QL-L）劑量組，每組10只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外，其他各組小鼠咽部注射100TCID50腺病毒3型，每只50 μL;正常對(duì)照組小鼠咽部注射生理鹽水，每只50 μL;連續(xù)2 d。各組小鼠于感染第1天給予相應(yīng)的藥物，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水，連續(xù)給藥2 d。第4天，小鼠稱重后斷頸處死，分離咽部組織，用10%甲醛溶液固定后進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)，觀察標(biāo)準(zhǔn)見表2。

1.2.5 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠模型的預(yù)防作用 70只ICR小鼠（SPF級(jí)，12～14 g），隨機(jī)分為7組：正常對(duì)照組（Normal）、模型對(duì)照組（Model）、利巴韋林組（Ribavirin）、疏風(fēng)解毒膠囊組（SFJD）、復(fù)方芩蘭口服液高（QL-H）、中（QL-M）、低（QL-L）劑量組，每組10只，雌雄各半。各組小鼠于分組后給予相應(yīng)的藥物，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水，連續(xù)給藥3 d。第4天，除正常對(duì)照組外，其他各組小鼠乙醚輕度麻醉后，滴鼻感染100TCID50呼吸道合胞病毒，每只45 μL。第8天，小鼠稱重后斷頸處死，分離肺組織、稱量肺重。

計(jì)算肺指數(shù)及抑制率。肺指數(shù)=肺濕重/體質(zhì)量×100%;抑制率=（模型組肺指數(shù)-給藥組肺指數(shù)）/（模型組肺指數(shù)-正常組肺指數(shù)）×100%。

1.2.6 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠的治療作用 70只ICR小鼠（SPF級(jí)），12～14 g，隨機(jī)分為7組：正常對(duì)照組（Normal）、模型對(duì)照組（Model）、利巴韋林組（Ribavirin）、疏風(fēng)解毒膠囊組（SFJD）、復(fù)方芩蘭口服液高（QL-H）、中（QL-M）、低（QL-L）劑量組，每組10只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外，其他各組小鼠乙醚輕度麻醉后，滴鼻感染副流感病毒（仙臺(tái)株）100×TCID50，每只45 μL。各組小鼠于感染后給予相應(yīng)的藥物，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組在同等條件下給予蒸餾水，連續(xù)給藥4 d。第5天，小鼠稱重后眼眶取血并分離血清，采用Mouse Chemokine Panel 1（9 plex）多因子檢測(cè)試劑盒檢測(cè)小鼠血清免疫因子水平。分離肺組織后稱量肺重，計(jì)算肺指數(shù)及抑制率。一部分肺組織用10%甲醛溶液固定后進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè)，觀察標(biāo)準(zhǔn)見表3。

稱量30 mg肺組織，剪碎，加入1 mL裂解液，超聲裂解，4 ℃，10 000×g離心30 min，上清液采用Mouse Chemokine Panel 1（9 plex）多因子檢測(cè)試劑盒檢測(cè)免疫因子水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料用百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)。病理形態(tài)學(xué)改變采用RANK值表示，采用非常參數(shù)秩和檢驗(yàn)方法;以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠的死亡保護(hù)作用 模型對(duì)照組小鼠死亡率為100%，復(fù)方芩蘭口服液高劑量組死亡率明顯降低，死亡率、死亡抑制率分別為55%、45%，與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;復(fù)方芩蘭口服液高、中劑量組平均存活天數(shù)與模型對(duì)照組比較顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），高、中、低劑量生命延長(zhǎng)率分別為43.24%、25.00%、12.16%。見表4。

2.2 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠病理改變的影響 正常對(duì)照組肺組織內(nèi)未見肺泡融合，肺間質(zhì)未見明顯炎癥，血管內(nèi)未見淤血，細(xì)支氣管周圍及腔內(nèi)未見炎癥滲出，氣管黏膜未見脫落，組織結(jié)構(gòu)正常。模型對(duì)照組肺泡有節(jié)段性大面積融合，肺間質(zhì)有明顯腫脹，大面積炎癥細(xì)胞滲出，滲出細(xì)胞大小不等，以淋巴細(xì)胞、粒中性分葉核、多核細(xì)胞等浸潤(rùn)為主;血管內(nèi)出現(xiàn)明顯淤血，血管平滑肌細(xì)胞有明顯增殖、增大。細(xì)支氣管周圍有明顯炎癥，細(xì)支氣管內(nèi)膜細(xì)胞脫落，腔內(nèi)有少量脫落細(xì)胞;與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肺部及細(xì)支氣管病變顯著（P<0.01）。復(fù)方芩蘭口服液高、中劑量組肺組織肺泡融合，肺間質(zhì)炎癥滲出、水腫，細(xì)支氣管周圍出現(xiàn)炎癥浸潤(rùn)、內(nèi)膜細(xì)胞脫落等病變;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高、中劑量組肺部及支氣管病變顯著改善（P<0.05，P<0.01）。見表5、圖1。

2.3 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒[A/FM/1/47（H1N1）]感染ICR小鼠血清免疫因子的影響

模型對(duì)照組血清免疫因子GRO-α、IP-10、MCP-1、MCP-3、MIP-1α、MIP-1β、RANTES水平與正常對(duì)照組比較顯著增加（P<0.01）;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高劑量組血清免疫因子GRO-α、MIP-1β、MIP-2水平顯著降低（P<0.05，P<0.01），中劑量組血清免疫因子GRO-α、IP-10、MCP-1、MCP-3、MIP-1α、MIP-2、RANTES水平顯著降低（P<0.05，P<0.01），低劑量組血清免疫因子GRO-α、MCP-3、RANTES、Eotaxin水平顯著降低（P<0.05，P<0.01）。見表6。

2.4 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)腺病毒（3型）致小鼠咽炎模型的影響 肉眼觀察，正常對(duì)照組小鼠咽喉黏膜淡色，黏膜未見有增厚，表面有少量淡色黏液，組織結(jié)構(gòu)正常。模型對(duì)照組小鼠咽喉黏膜組織有明顯紅腫，黏膜較厚，表面有不同程度黃色黏液滲出，未見有膿性液體;與正常對(duì)照組比較肉眼觀察病變顯著（P<0.01）。復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組小鼠咽喉黏膜紅腫、黏膜增厚，表面黃色液體滲出等病變;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組肉眼觀察病變顯著改善（P<0.01，P<0.05）。見表7。

鏡下觀察，正常對(duì)照組小鼠咽喉部黏膜組織未見紅、腫，表面有淡色黏液，皮下未見有腫脹，未見有炎癥滲出，結(jié)構(gòu)正常。模型對(duì)照組小鼠咽部上皮黏膜組織有明顯的增生、增厚，上皮細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞大小不規(guī)則，角質(zhì)層明顯過(guò)度增厚，上皮下組織有大面積節(jié)段性腫脹及炎癥滲出，滲出細(xì)胞以中性粒細(xì)胞分葉核為主，有少量淋巴細(xì)胞，并有大的梭形細(xì)胞，滲出以黏液為主;與正常對(duì)照組比較鏡下觀察病變顯著（P<0.01）。復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組小鼠咽部黏膜組織上皮增厚、細(xì)胞增多，角質(zhì)層過(guò)度，上皮下炎癥滲出，組織腫脹;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組鏡下觀察病變顯著改善（P<0.01）。見表8、圖2。

2.5 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠模型的預(yù)防作用 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肺指數(shù)顯著增加（P<0.05）;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組肺指數(shù)顯著降低（P<0.01，P<0.05），高、中、低劑量組肺指數(shù)抑制率分別為161.16%、191.89%、124.17%。見表9。

2.6 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠模型肺指數(shù)的影響 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肺指數(shù)顯著增加（P<0.05）;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組肺指數(shù)顯著降低（P<0.01，P<0.05），高、中、低劑量組肺指數(shù)抑制率分別為107.83%、102.61%、70.92%，且各劑量組顯示出良好的量效關(guān)系。見表10。

2.7 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠病理改變的影響 正常對(duì)照組小鼠肺組織肺泡間質(zhì)未見有炎癥滲出，肺組織未見有水腫，肺泡未見有融合，細(xì)支氣管黏膜未見有脫落，周圍組織細(xì)胞未見腫脹、增殖，結(jié)構(gòu)正常。模型對(duì)照組小鼠肺組織間質(zhì)有大面積出血性滲出液，組織間質(zhì)淤血、水腫，有相互融合的大的病灶，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，以中性分葉核為主，并有嗜酸性細(xì)胞及B細(xì)胞增殖。細(xì)支氣管底部細(xì)胞有增大、腫脹，細(xì)支氣管周圍肌組織細(xì)胞有肥大，支氣管黏膜周圍未見有組織脫落，腔內(nèi)有黏液多見，被染成紫紅色。與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肺部及支氣管病變顯著（P<0.01）。復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量組小鼠肺組織炎癥滲出、水腫，間質(zhì)及細(xì)胞的病變，細(xì)支氣管病變;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高、中劑量組肺部及支氣管病變顯著改善（P<0.01，P<0.05），復(fù)方芩蘭口服液低劑量組支氣管病變顯著改善（P<0.05）。見表11、圖3。

2.8 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠血清免疫因子的影響 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清免疫因子IP-10水平顯著增加（P<0.05）;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高劑量組血清免疫因子IP-10、MCP-3、MIP-2、RANTES、MIP-1α水平顯著降低（P<0.05，P<0.01），中劑量組血清免疫因子MCP-1水平顯著降低（P<0.01），低劑量組血清免疫因子IP-10、MCP-3、MIP-2、RANTES水平顯著降低（P<0.05，P<0.01）。見表12。

2.9 復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠肺組織免疫因子的影響 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肺組織免疫因子IP-10、MCP-3水平顯著增加（P<0.05，P<0.01）;與模型對(duì)照組比較，復(fù)方芩蘭口服液高劑量組肺組織免疫因子IP-10、RANTES水平顯著降低（P<0.01），中劑量組肺組織免疫因子IP-10、RANTES、MIP-1α水平顯著降低（P<0.05，P<0.01）。見表13。

3 討論

引起兒童呼吸道感染疾病的病毒主要是流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒等，甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒為北京地區(qū)冬春季急性呼吸道感染主要病原體，不同月份呼吸道病毒流行有一定規(guī)律性，并且不同年齡組易感的病毒也不同[5-6]。

中藥治療疫病有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，中藥在防治呼吸道病毒感染方面有良好的作用[7-15]。為了評(píng)價(jià)復(fù)方芩蘭口服液在防治呼吸道病毒感染中的藥效作用，本課題組設(shè)計(jì)了相關(guān)藥效試驗(yàn)，我們利用甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））感染ICR小鼠制備小鼠死亡模型[16]，本研究中模型組小鼠100%死亡，復(fù)方芩蘭口服液高劑量組死亡率與模型組比較顯著降低，高、中劑量組平均存活時(shí)間與模型組比較顯著延長(zhǎng)，高、中、低劑量組死亡抑制率、生命延長(zhǎng)率顯示了良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系。我們利用呼吸道合胞病毒感染ICR小鼠模型考察復(fù)方芩蘭口服液的預(yù)防作用，結(jié)果顯示，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量均顯示了良好的預(yù)防作用。同時(shí)，我們利用甲型流感病毒（A/FM/1/47（H1N1））、呼吸道合胞病毒分別感染ICR小鼠制備小鼠肺炎模型[17]，評(píng)價(jià)復(fù)方芩蘭口服液在治療甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒感染中的藥效作用，結(jié)果顯示，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠肺指數(shù);復(fù)方芩蘭口服液高、中劑量可以顯著改善甲型流感病毒感染引起的肺組織病變及肺支氣管病變，高、中劑量可以顯著改善呼吸道合胞病毒感染引起的肺組織病變，高、中、低劑量可以顯著改善呼吸道合胞病毒感染引起的肺支氣管病變。我們還利用腺病毒（3型）感染ICR小鼠制備咽炎模型，結(jié)果顯示，復(fù)方芩蘭口服液高、中、低劑量均可顯著改善小鼠咽部病變。

病毒感染會(huì)使免疫因子表達(dá)發(fā)生變化，甚至引起免疫因子風(fēng)暴，中醫(yī)藥通過(guò)調(diào)節(jié)免疫因子表達(dá)防治病毒感染性疾病有其特有的優(yōu)勢(shì)[18-19]。本研究中，我們采用多因子檢測(cè)試劑盒高通量檢測(cè)小鼠血清及肺組織勻漿中的免疫因子水平，評(píng)價(jià)復(fù)方芩蘭口服液對(duì)免疫因子的影響。本研究結(jié)果顯示，復(fù)方芩蘭口服液高劑量可以顯著降低甲型流感病毒感染小鼠血清免疫因子GRO-α、MIP-1β、MIP-2水平，中劑量可以顯著降低甲型流感病毒感染小鼠血清免疫因子GRO-α、IP-10、MCP-1、MCP-3、MIP-1α、MIP-2、RANTES水平，低劑量可以顯著降低甲型流感病毒感染血清免疫因子GRO-α、MCP-3、RANTES、Eotaxin水平。復(fù)方芩蘭口服液高劑量可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠血清免疫因子IP-10、MCP-3、MIP-2、RANTES、MIP-1α水平，中劑量可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠血清免疫因子MCP-1水平，低劑量可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠血清免疫因子IP-10、MCP-3、MIP-2、RANTES水平。復(fù)方芩蘭口服液高劑量可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠肺組織免疫因子IP-10、RANTES水平，中劑量可以顯著降低呼吸道合胞病毒感染小鼠肺組織免疫因子IP-10、RANTES、MIP-1α水平。

綜上所述，本研究考察了復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒性肺炎、呼吸道合胞病毒性肺炎、腺病毒性咽炎的藥效作用，研究結(jié)果提示，復(fù)方芩蘭口服液對(duì)甲型流感病毒感染有一定的死亡保護(hù)作用，治療給藥可以改善肺組織及肺支氣管病變、降低血清免疫因子水平。復(fù)方芩蘭口服液對(duì)呼吸道合胞病毒感染有良好的預(yù)防作用，治療給藥可以改善肺組織及肺支氣管病變、降低血清及肺組織免疫因子水平。復(fù)方芩蘭口服液對(duì)腺病毒引起的咽炎有良好的治療作用，可以改善咽部病變。本研究結(jié)果為臨床用藥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（2020-09-16收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81873072）;中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥防治流感技術(shù)體系項(xiàng)目（ZZ13-035-09）;中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院育苗基金培育專項(xiàng)（ZZ11-093）;中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院自主課題項(xiàng)目（ZXKT17037）

作者簡(jiǎn)介：鮑巖巖（1979.12—），女，博士，助理研究員，研究方向：中藥抗病毒藥理及藥效，E-mail：baoyanyan885@163.com

通信作者：時(shí)宇靜（1979.02—），女，博士，副研究員，研究方向：中藥抗病毒藥理及藥效，E-mail：yjshi@icmm.ac.cn