劉桔 陳澤鵬 林壁潤(rùn) 楊明明 沈會(huì)芳

摘 要：采用浸泡消毒法、噴霧消毒法和熏蒸消毒法進(jìn)行防控TMV、CMV的測(cè)試，采用抗原破壞性檢測(cè)法來評(píng)價(jià)8種制劑的防控效果;采用枯斑測(cè)定法，進(jìn)一步開發(fā)出對(duì)TMV、CMV的防控效果好的制劑。結(jié)果發(fā)現(xiàn)消毒劑GDCLO2（500 mg/L）對(duì)TMV、CMV的抗原破壞效果均為100%;復(fù)合酚（消毒靈）（2%）消毒液對(duì)CMV的抗原破壞效果為100%，對(duì)TMV的抗原破壞也有較強(qiáng)的效果;永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、聚維酮碘溶液（400 mg/L）、2%戊二醛消毒液和三氯異氰尿酸鈉粉（800 mg/L）對(duì)CMV有良好的抗原破壞效果。消毒劑GDCLO2可以完全殺滅TMV、CMV，其防控效果優(yōu)于煙草苗棚常用的次氯酸鈉溶液、復(fù)合型過氧乙酸消毒液、高錳酸鉀和福爾馬林。在國(guó)內(nèi)外首次建立應(yīng)用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并在廣東省所有煙區(qū)推廣應(yīng)用3年，累計(jì)推廣應(yīng)用面積達(dá)到34400 hm2，應(yīng)用效果明顯，全省煙區(qū)沒有病毒病發(fā)生流行。本項(xiàng)目研發(fā)出來的GDCLO2消毒制劑，能夠較好防控TMV、CMV。使用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程已經(jīng)在廣東省所有煙區(qū)推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：TMV CMV GDCLO2 防控制劑

中圖分類號(hào)：S491? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Development and Application of Preparation for Tobacco Virus Disease Control

LIU Ju1， CHEN Zepeng1， LIN Birun2， YANG Mingming3，

SHEN Huifang2，DENG Haibin1， YANG Qiyun2，

PU Xiaoming2， RUAN Xiaolei3*

（1Guangdong Tobacco Shaoguan Co.， Ltd.， Shaoguan，Guangdong 512000， China;

2 Plant Protection Research Institute ， Guangdong Academy of Agricultural Sciences /Guangdong Provincial Key Laboratory of New Technology for Plant Protection， Guangzhou，Guangdong 510640， China; 3 College of Plant Protection， South China Agricultural University / Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Signals and Crop Disease Control， Guangzhou， Guangdong 510642， China.）

Abstract： Eight preparations were used to control TMV and CMV by soaking， spray and fumigation disinfection method，and the control effects were evaluated by antigen detection method. The lesion test was used to further develop more effective drugs to control TMV and CMV. Results showed that GDCLO2 （500 mg/ L） had 100% antigen destructive effect on TMV and CMV; 2% compound phenol had 100% antigen destructive effect on CMV， and also had stronger effect on TMV. Yongjiekang disinfectant II （100 mg/ L）， polyvidone iodine solution （400 mg/ L）， 2% glutaraldehyde disinfectant and trichloroisocyanurate powder （800 mg/ L） had good antigen destructive effect on CMV. GDCLO2 could completely kill TMV and CMV， and its control effect was better than that of sodium hypochlorite， composite peroxyacetic acid， potassium permanganate and formalin. The technical process of using GDCLO2 to cultivate non-toxic tobacco seedlings was first established in the world， and has been popularized and applied in all tobacco areas in Guangdong Province for three years， with a cumulative application area of 34400 hm2 and obvious application effect， and no viral disease occurred during the promotion period.

Key words： TMV; CMV; GDCLO2; control preparation

煙草病毒病是我國(guó)煙草生產(chǎn)上的重要病害，每年造成重大經(jīng)濟(jì)損失 [1]。侵染煙草的病毒主要有煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus， TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）和馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）[2] 等，其中TMV和CMV是煙草苗期最常見病毒。煙草無毒苗生產(chǎn)過程中，煙苗病毒的主要來源是帶毒漂盤、剪葉工具及育苗人員的雙手等，病毒可通過修剪、間苗等操作進(jìn)行傳播[3-6]。在苗期減少毒源、切斷病毒傳播途徑是煙草病毒病綜合防控措施中最重要的一環(huán)[5]。具體做法是：在育苗前期對(duì)育苗池和育苗盤，整個(gè)育苗過程中對(duì)剪葉機(jī)、操作人員自身乃至育苗棚內(nèi)、外空間進(jìn)行高效消毒[4]。采用綠色高效的制劑在育苗過程中的各個(gè)相關(guān)環(huán)節(jié)進(jìn)行有效消殺是減少苗期病毒感染的重要保障。

生產(chǎn)中煙草育苗棚常用0.1%高錳酸鉀、10%漂白粉或者2%福爾馬林等制劑殺滅TMV和CMV[2]。劉勇研究表明質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%有效氯漂白粉15～30 mg/L或高錳酸鉀20～30 mg/L進(jìn)行消毒，對(duì)TMV的抑制率高于80%[7]，可見傳統(tǒng)制劑對(duì)病毒的殺滅活性不理想。劉勇等也評(píng)價(jià)了常用剪葉機(jī)制劑，表明30%有效氯漂白粉10倍液、98%磷酸三鈉·12H2O 的10倍液、7%有效氯次氯酸鈉150倍液、美國(guó)制劑125倍液和75%酒精，在3 min內(nèi)抑制率可達(dá)100%，但除0.6%菌毒凈較安全外，供試制劑在標(biāo)簽（常用）濃度下接觸煙草葉片，產(chǎn)生較嚴(yán)重藥害，產(chǎn)生的癥狀主要有褪綠斑點(diǎn)、壞死斑點(diǎn)或畸形[8]，與制劑種類有關(guān)，可見傳統(tǒng)制劑在使用中存在一些問題，學(xué)者一直致力新型制劑的篩選和評(píng)價(jià)工作。尹利方等報(bào)道二氧化氯、育寶、毒消三種制劑消毒帶毒剪刀后，防效依次為93.87%、67.03%、27.32%，3種制劑存在顯著的防效差異，其中用16%二氧化氯200～600倍液浸泡污染了TMV的剪刀，均能有效控制TMV的傳播;其中16%綠先鋒牌二氧化氯800倍液浸泡消毒10 s即可有效防止TMV的傳播，相對(duì)防效可達(dá)98%以上[9]。曹毅等用兆冠50 倍處理20 min、錦鈺50 倍處理5 min和金百萬20 倍處理20 min 可完全鈍化病葉汁液中的病毒，常用濃度下金百萬基本不產(chǎn)生藥害;錦鈺和兆冠易產(chǎn)生藥害，癥狀主要表現(xiàn)為退綠斑點(diǎn)、壞死和葉片畸形[10]。吳德喜等用16%二氧化氯200～600倍液浸泡污染了TMV的剪刀，均能有效控制TMV的傳播;其中16%綠先鋒牌二氧化氯800倍液浸泡消毒10 s即可有效防止TMV的傳播，相對(duì)防效可達(dá)98%以上[11]。另外，烤煙育苗生產(chǎn)中實(shí)際情況復(fù)雜多變，操作過程中缺乏規(guī)范的應(yīng)用技術(shù)，防控效果并不理想。目前檢測(cè)病毒是否被制劑滅活的主要方法有：細(xì)胞侵染活性檢測(cè)、抗原破壞性檢測(cè) [7]等。本研究采用8種制劑進(jìn)行測(cè)試和開發(fā)，并將之與煙草苗棚常用制劑的消殺效果進(jìn)行了比較，研發(fā)出對(duì)TMV、CMV防控效果最好的制劑，更好地服務(wù)煙草產(chǎn)業(yè)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試制劑

八種供試制劑：永潔康牌消毒粉Ⅰ、永潔康牌消毒粉Ⅱ（購(gòu)于連云港永榮生物科技有限公司）;聚維酮碘溶液（聚福安）、復(fù)合酚（消毒靈）（購(gòu)于廣東省前沿動(dòng)物保健有限公司）;戊二醛消毒液、鄰苯二甲醛消毒液（購(gòu)于衡水康益醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司）;三氯異氰尿酸鈉粉（煙霧彈）（購(gòu)于鳳舞集團(tuán)奧福斯貿(mào)易有限公司）;消毒劑GDCLO2（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所研發(fā)）。

四種常用制劑：次氯酸鈉溶液（科密歐牌，有效氯含量大于等于6.5%）、復(fù)合型過氧乙酸消毒液（三橋牌，有效含量為150～180 g/L）、0.1%的高錳酸鉀、2%的福爾馬林均購(gòu)自廣東省精科生物有限公司。所有中和劑均購(gòu)自汕頭化學(xué)試劑廠。制劑相應(yīng)的中和劑見表1。

1.1.2 供試毒源及抗血清

供試病毒：TMV（普通株系）、CMV（普通株系）分別保存在普通煙草（Nicotiana tabacum）上，由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病毒研究室提供。取1g 癥狀明顯的葉片，加去離子水和 600 目金剛砂充分研磨并稀釋，制成1g/50mL的病毒液。

TMV、CMV特異性抗血清和辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病毒研究室提供。

1.1.3 枯斑寄主

心葉煙（Nicotiana glutinosa）、豇豆（Vigna sinensis）由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病毒研究室提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 八種制劑對(duì)TMV和CMV防控效果測(cè)定

采用抗原破壞性檢測(cè)來評(píng)價(jià)消毒效果。選取永潔康牌消毒粉Ⅰ（100 mg/L）、永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、聚維酮碘溶液（聚福安）（400 mg/L）、復(fù)合酚（消毒靈）（2%）、戊二醛消毒液（2%）、鄰苯二甲醛消毒液（直接使用）、三氯異氰尿酸鈉粉（強(qiáng)氯精）（800 mg/L）和消毒劑GDCLO2（500 mg/L）進(jìn)行器具浸泡消毒實(shí)驗(yàn)（所有使用濃度均為產(chǎn)品推薦使用濃度）。

選取永潔康牌消毒粉Ⅰ（100 mg/L）、永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、復(fù)合酚（消毒靈）（1%）、消毒劑GDCLO2（500 mg/L）做噴霧消毒實(shí)驗(yàn)測(cè)試。

選取三氯異氰尿酸鈉粉（強(qiáng)氯精，100 mg/m3）做空間熏蒸消毒實(shí)驗(yàn)測(cè)試。

1.2.1.1 器具浸泡消毒實(shí)驗(yàn)

對(duì)供試的帶毒育苗盤、器具采用浸泡法消毒，檢測(cè)供試制劑對(duì)器具表面的消毒效果。漂浮育苗盤、器具的帶毒處理：分別取漂浮育苗盤、剪刀、鑷子浸沒于病毒液中30 min。取出放到溫箱烘干，得到帶毒育苗盤和器具。

參照趙祖國(guó)[12]和戴青等 [13]的操作方法進(jìn)行。將帶毒育苗盤和器具分別放入不同消毒液里浸泡30 min，取出放入1 L 中和劑里中和10～20 min。取出器具，用滅菌水沖洗幾遍。用棉簽擦拭器具表面。然后，將之放入裝有1 mL 包被緩沖液的離心管里，蓋好蓋子。震蕩20 min。取200 μL震蕩液，做酶聯(lián)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)。每種制劑測(cè)試6個(gè)樣品，每個(gè)樣品重復(fù)3次，取平均值。以制劑與中和劑反應(yīng)的中和產(chǎn)物作為陰性對(duì)照;以中和產(chǎn)物加毒源作為陽性對(duì)照;清水作為空白對(duì)照。

1.2.1.2 室內(nèi)空間噴霧消毒實(shí)驗(yàn)

對(duì)密閉空間采用噴霧法消毒，檢測(cè)供試制劑對(duì)帶毒空氣的消毒效果。參照孔利群等[14]的操作方法進(jìn)行。在密閉空間里（房間面積：13 m2;體積：47 m3），用噴霧器噴灑毒液（噴液量：150～250 mL）?？臻g四個(gè)角放置打開蓋子的空培養(yǎng)皿。靜置30 min。用噴霧器噴灑相應(yīng)濃度的消毒液。靜置30 min。用噴霧器噴灑相應(yīng)濃度的中和劑，用量同上。中和10 min。取出培養(yǎng)皿，用滅菌雙蒸水沖洗幾遍。用棉簽擦拭器具表面。然后，將之放入裝有1mL 包被緩沖液的離心管里，蓋好蓋子。陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、清水對(duì)照同1.2.1.1。

1.2.1.3 室內(nèi)熏蒸消毒實(shí)驗(yàn)

對(duì)密閉空間采用熏蒸法消毒，檢測(cè)供試制劑對(duì)帶毒空氣的消毒效果。參照毛又玲等[15]的操作方法進(jìn)行。在密閉空間里（房間面積：13 m2;體積：47 m3），用噴霧器噴灑毒液（噴液量：150～250 mL）?？臻g四個(gè)角放置打開蓋子的空培養(yǎng)皿。靜置30 min。按1 g/m3用量將熏蒸劑分放于3個(gè)小碗中，點(diǎn)火進(jìn)行煙熏，完畢后密閉門窗10 h。噴灑中和劑作用10 min，終止反應(yīng)。將培養(yǎng)皿用蘸有抗原包被液的棉簽充分擦拭，放入抗原包被液中震蕩15 min，用ELISA檢測(cè)TMV和CMV抗原破壞程度。陽性對(duì)照：不接觸熏蒸劑的帶毒培養(yǎng)皿。陰性對(duì)照：以PBS代替制劑進(jìn)行試驗(yàn)。陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、清水對(duì)照同1.2.1.1。

1.2.1.4 間接ELISA檢測(cè)

ELISA結(jié)果判斷方法：用BIO-RAD酶標(biāo)儀（美國(guó)）檢測(cè)在450 nm波長(zhǎng)下各樣品的吸光度值（OD值）。以實(shí)驗(yàn)組OD （S）值與陰性對(duì)照OD （N）值的比值判斷TMV和CMV抗原破壞性檢測(cè)結(jié)果。當(dāng)S/N≥2.1時(shí)，結(jié)果判為陽性，小于2.1判為陰性。

1.2.2 GDCLO2與苗棚常用制劑防控效果對(duì)比

取煙草苗棚常用4種制劑：次氯酸鈉溶液（科密歐牌，有效氯含量大于等于6.5%）、復(fù)合型過氧乙酸消毒液（三橋牌，有效含量為150～180 g/L）、0.1%的高錳酸鉀、2%的福爾馬林和GDCLO2（500 mg/L），采用細(xì)胞侵染活性檢測(cè)（枯斑測(cè)定）評(píng)價(jià)其對(duì)TMV、CMV、PVY的防控效果。其中消毒劑GDCLO2設(shè)三個(gè)濃度梯度：400 mg/L、500 mg/L、600 mg/L。次氯酸鈉設(shè)三個(gè)濃度梯度：0.5%、1.0%、2%。過氧乙酸設(shè)三個(gè)濃度梯度：0.5%、1.0%、2%。

分別取TMV、CMV、PVY的病毒液，用滅菌紗布過濾后取上清做接種液。 將一定濃度的制劑稀釋液與 TMV/CMV/PVY病毒液等量混合，室溫分別處理 30 min 后分別摩擦接種枯斑寄主心葉煙、豇豆、莧色藜。接種前噴灑適量金剛砂于葉片表面。 接種葉左半葉接種去離子水處理的 TMV/CMV/PVY 病毒液（對(duì)照），接種葉右半葉接種經(jīng)制劑處理的 TMV/CMV/PVY 病毒液。 每半片葉接種 200 μL。接種后清水噴霧沖洗葉面，重復(fù) 3 次。接種 5～7 d 后統(tǒng)計(jì)枯斑數(shù)（取6 個(gè)半葉的平均值），計(jì)算抑制率。

抑制率（%）=[1-（處理平均枯斑數(shù)/對(duì)照平均枯斑數(shù)）]×100。

1.2.3 采用RT-PCR方法對(duì)處理后煙苗進(jìn)行病毒檢測(cè)

2018年、2019年、2020年在韶關(guān)、梅州、清遠(yuǎn)煙區(qū)使用消毒劑GDCLO2，用于無毒苗生產(chǎn)過程中苗棚、育苗盆、各種器具的消毒。要求各產(chǎn)區(qū)所有煙棚在煙苗移栽前10 d前，在苗棚內(nèi)隨機(jī)取樣10株，寄送項(xiàng)目組進(jìn)行病毒檢測(cè)，病毒檢測(cè)采用RT-PCR方法進(jìn)行。

感染病毒的煙草植物組織總RNA的抽提：根據(jù)Takara公司植物組織 RNA 抽提試劑盒提取。

引物的設(shè)計(jì)與合成 ：根據(jù)已報(bào)道的TMV Longlin-2（GENBANK：HE818434.1）、CMV strain CTL segment RNA1（GENBANK：EF213023.1）的基因序列，采用引物設(shè)計(jì)軟件Vector NT1 explorer設(shè)計(jì)普通RT-PCR擴(kuò)增引物，具體序列如表2，由寶生物工程大連有限公司合成。

一步法RT-PCR反應(yīng)：以抽提的待測(cè)植物組織樣品的總RNA為模板，采用上述設(shè)計(jì)引物進(jìn)行一步法RT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系如下：RNase free ddH2O 27.5 μL;2 × One Step Mix 25μL;One Step Enzyme Mix 2.5 μL;Forward Primer （10 μM） 2 μL;Reverse Primer （10 μM） 2 μL;模板RNA 1 μL;共50 μL。反應(yīng)程序如下：逆轉(zhuǎn)錄50 ℃，30 min;預(yù)變性94 ℃，5 min;變性94 ℃，30 sec;延伸55 ℃，30 sec;退火72 ℃，30 sec;終止72 ℃，10 min;4 ℃。RT-PCR 反應(yīng)結(jié)束后，每個(gè)樣品取 5 L 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行 1 %瓊脂糖凝膠上電泳。在UVP 凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 防控?zé)煵莶《静「咝е苿┑难邪l(fā)

采用浸泡消毒法（8種制劑）、噴霧消毒法（4種制劑）和熏蒸消毒法（1種制劑）初步測(cè)試了供試8種制劑對(duì)TMV和CMV的殺滅效果。結(jié)果見表3。按照推薦濃度，8種制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)室污染剪刀上的TMV和CMV處理30 min均有消毒效果。其中消毒劑GDCLO2（500 mg/L）對(duì)TMV、CMV的防控效果最優(yōu)，兩種方法均為100%;復(fù)合酚（消毒靈）（2%）兩種方對(duì)CMV的抗原破壞率均為100%，噴霧法對(duì)TMV的抗原破壞率為80%;永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、聚維酮碘溶液（400 mg/L）、2%戊二醛消毒液和三氯異氰尿酸鈉粉（800 mg/L）對(duì)CMV的有較好的防控效果。永潔康牌消毒粉Ⅱ（100 mg/L）、鄰苯二甲醛消毒液對(duì)TMV的防控效果較差。

2.2 GDCLO2與常用制劑防控效果對(duì)比

表4展示了4種煙草苗棚常用制劑和GDCLO2分別處理TMV、CMV，接種枯斑寄主7天后對(duì)葉片上的枯斑進(jìn)行統(tǒng)計(jì)的結(jié)果。結(jié)果顯示400～600 mg/mL的消毒劑GDCLO2可完全滅活TMV、CMV病毒。其對(duì)TMV、CMV病毒病的防控效果要優(yōu)于供試的其他四種常用制劑。

試驗(yàn)結(jié)果表明：消毒劑GDCLO2在濃度為400～600 mg/mL范圍內(nèi)，可將兩種病毒百分之百殺滅。而2%福爾馬林和1.5%過氧乙酸只能完全滅活TMV，對(duì)CMV不能完全殺滅。2%次氯酸鈉只能完全滅活CMV，對(duì)TMV不能完全殺滅。

2.3 消毒劑GDCLO2大面積推廣應(yīng)用效果

2018年開始，全省100%的煙草種植區(qū)推廣應(yīng)用消毒劑GDCLO2，累計(jì)推廣面積達(dá)到34400 hm2。技術(shù)操作規(guī)程是采用消毒劑GDCLO? 400～600 mg/mL濃度溶液，對(duì)煙苗培育大棚和周圍環(huán)境進(jìn)行噴霧，對(duì)煙苗培育盆進(jìn)行浸泡，在煙苗剪葉當(dāng)天用藥液噴霧煙苗，完成整個(gè)流程后，在煙苗移栽前10 d，隨機(jī)抽樣采樣，送樣到實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行病毒檢測(cè)。

2018年、2019年和2020年所有育苗棚煙苗樣本病毒檢測(cè)結(jié)果見表5和圖1。結(jié)果表明，2018年首次將消毒劑GDCLO2在煙草育苗過程中進(jìn)行推廣應(yīng)用，在煙苗移栽前10 d，采樣進(jìn)行病毒檢測(cè)，2018年梅州、韶關(guān)、清遠(yuǎn)煙區(qū)TMV陽性檢出率分別為5.68%、1.15%和1.45%;梅州CMV陽性檢出率為2.84%，其它煙區(qū)的陽性檢出率為0。

2019年、2020年在三個(gè)煙區(qū)開展消毒劑GDCLO2使用技術(shù)培訓(xùn)，要求育苗人員嚴(yán)格按技術(shù)規(guī)程進(jìn)行消毒。2019年煙苗TMV與CMV的檢出率比2018年的檢出率大幅度降低，梅州煙區(qū)在送檢樣本數(shù)從2018年的176包至2019年的704包，大幅度增加的前提下，其病毒檢出率明顯降低，TMV陽性樣本率從2018年的5.68%，下降到2019年的0.99%;CMV從2018年的2.84%下降至2019年的0。到2020年，三個(gè)煙區(qū)所有育苗棚樣本均無病毒檢出，可見消毒劑GDCLO2對(duì)TMV、CMV病毒病的防控效果在生產(chǎn)上得到驗(yàn)證。

3 討論

3.1 消毒劑GDCLO2是一種新型的防控?zé)煵莶《静≈苿?/p>

本研究首次將消毒劑GDCLO2應(yīng)用于煙草病毒的防控工作，證明其有良好的TMV、CMV殺滅作用。GDCLO2制劑是本項(xiàng)目研發(fā)的制劑。其具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，污染小，使用方便;價(jià)格低廉。該制劑有效成分為二氧化氯，冷淑珍等[16-18]研究發(fā)現(xiàn)二氧化氯粉劑熏蒸劑（力保安）對(duì)雞沙門氏菌熏蒸處理有顯著的殺菌效果，殺菌率可達(dá)99.995%。無論應(yīng)用于獸類病毒還是植物病毒方面，都展現(xiàn)了顯著的殺滅作用。因此，GDCLO2制劑是一種新型煙草病毒病防控制劑。

3.2 消毒劑GDCLO2是一種高效、廣譜的煙草病毒病防控制劑

煙草苗期病毒病是煙草生產(chǎn)上的一大難題。使用高效、環(huán)保的防控制劑是解決這個(gè)難題的主要方法。在防控過程中，制劑的防控效果受到制劑種類、使用濃度及劑量、環(huán)境條件、施用方式等因素的影響[19]。有研究認(rèn)為不同種類的制劑對(duì)不同病毒的殺滅效果也各有差別，對(duì)部分病毒的差異十分顯著[20]。尤其是TMV在環(huán)境中穩(wěn)定性強(qiáng)，難以完全殺滅[2]。

選取適合的制劑，合理的施用方式，對(duì)殺滅煙草苗時(shí)期常見的TMV和CMV至關(guān)重要。本研究研發(fā)的消毒劑GDCLO2與其他植物病毒的常用制劑相比，防控效果顯著，殺毒范圍廣泛，一次使用，可以殺滅兩種病毒;使用方便，既可以浸泡，也可以噴霧。

3.3 建立培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并大面積推廣應(yīng)用

在國(guó)內(nèi)外首次建立應(yīng)用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并在廣東省所有煙區(qū)推廣應(yīng)用3年，累計(jì)推廣應(yīng)用面積達(dá)到34400 hm2，TMV陽性樣本率從2018年的5.68%，下降到2019年的0.99%;CMV從2018年的2.84%下降至2019年的0，到2020年，三個(gè)煙區(qū)所有育苗棚樣本均無病毒檢出。田間調(diào)查結(jié)果表明，2018-2020年全省煙區(qū)沒有病毒病發(fā)生流行。

4 結(jié)論

本文研發(fā)的消毒劑GDCLO2針對(duì)TMV、CMV是一種新型防控制劑。500 mg/L的消毒劑GDCLO2在30分鐘內(nèi)即可全部殺滅兩種病毒，這種制劑可以直接噴霧在煙苗葉子上有效地防控TMV、CMV病毒病，還可以廣泛推廣應(yīng)用于煙草苗棚、苗池、苗盤、器具的消毒工作中。在國(guó)內(nèi)外首次建立應(yīng)用消毒劑GDCLO2培育無毒煙苗的操作規(guī)程，并在廣東省所有煙區(qū)推廣應(yīng)用3年，累計(jì)推廣應(yīng)用面積達(dá)到34400 hm2，應(yīng)用效果明顯，全省煙區(qū)沒有病毒病發(fā)生流行。

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