王惠臨 張立平

摘要 目的：本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法探討四逆散治療功能性消化不良的作用機(jī)制。方法：利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）搜索四逆散中中藥的活性成分與作用靶點(diǎn)，利用GeenCard、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)搜索功能性消化不良的疾病靶點(diǎn)，利用R語(yǔ)言取得藥物與疾病的共同靶點(diǎn)，通過(guò)Cytoscape3.7.2構(gòu)建藥物-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，利用STRING平臺(tái)構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖，通過(guò)DAVID進(jìn)行基因本體（GO）富集分析和京都基因和基因組百科全書（KEGG）富集分析。通過(guò)Autodock Tools 1.5.6對(duì)核心靶點(diǎn)和核心成分進(jìn)行對(duì)接驗(yàn)證。結(jié)果：共篩選出四逆散活性成分144個(gè)，有效作用靶點(diǎn)223個(gè)，藥物疾病共同靶點(diǎn)152個(gè)。PPI網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)AKT1、IL-6、MARK、JUN、STAT3等可能是四逆散治療功能性消化不良的關(guān)鍵靶點(diǎn)。GO功能富集發(fā)現(xiàn)了795個(gè)GO條目，KEGG通路富集分析共篩選出作用通路127條，主要富集基因數(shù)量較大的通路有PI3K-AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等。分子對(duì)接驗(yàn)證顯示核心靶點(diǎn)和核心成分有較強(qiáng)的結(jié)合活性。結(jié)論：四逆散中的有效成分主要通過(guò)AKT1、IL-6、MARK、JUN、STAT3等靶點(diǎn)調(diào)節(jié)多條信號(hào)通路從而發(fā)揮治療功能性消化不良的作用。

關(guān)鍵詞 四逆散;功能性消化不良;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);作用機(jī)制;分子對(duì)接

Abstract Objective：To explore the mechanism of Sini powder in the treatment of functional dyspepsia based on network pharmacology and molecular docking method.Methods：The effective components and corresponding target proteins of Sini Powder were screened by TCMSP，and the target of functional dyspepsia were screened by the GeenCards and OMIM data base.R software was used to obtain the common targets of drugs and diseases，and the “component-target-disease”network diagram was constructed by Cytoscape3.7.2 software.The STRING datebase was used to draw the protein interaction（PPI）network，and the DAVID was used to perform GO function and KEGG pathway enrichment analysis on effective targets.AutodockTools1.5.6 was used for docking verification of core targets and core components.Results：The result showed that 144 components were screened and 233 effective targets were screened.The 152 common targets were obtained.The PPI network found that AKT1，IL-6，MARK，JUN，STAT3，etc.may be the key targets for Sini Powder in treatment of functional dyspepsia.The GO function analysis found 795 items.The KEGG parhway analysis found 127 items，including enriched pathways with a large number of genes PI3K-Akt signaling pathway，MAPK signaling pathway，TNF signaling pathway and other pathways.The molecular docking shows that the core target and the core components have strong binding activity.Conclusion：The active components in Sini Powder mainly regulate multiple signaling pathways through targets such as AKT1，IL-6，MARK，JUN and STAT3，thus playing a role in the treatment of functional dyspepsia.

Keywords Sini powder; Functional dyspepsia; Network pharmacology; Mechanism of action; Molecular docking

中圖分類號(hào)：R289.4;R574文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.10.002

功能性消化不良是最常見(jiàn)的胃腸道疾病之一，流行病學(xué)調(diào)查顯示，亞洲國(guó)家功能性消化不良發(fā)病率高達(dá)8%～23%[1]。該病的發(fā)病率逐年升高，發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療大多應(yīng)用促胃腸動(dòng)力藥、抑酸劑、胃黏膜保護(hù)劑、消化酶、抗抑郁藥等[2]。但上述藥物缺乏廣泛療效，長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)產(chǎn)生不良反應(yīng)，在治療過(guò)程中患者自我用藥及應(yīng)用非處方藥物是非常常見(jiàn)的，也因此帶來(lái)一定的直接和間接成本。

功能性消化不良在中醫(yī)學(xué)中屬于“胃痞”“胃痛”的范疇，其病機(jī)認(rèn)識(shí)圍繞肝、脾二臟。隨著精神心理因素在功能性胃腸病發(fā)病機(jī)制中的重要性以及功能性胃腸病與精神心理疾患并發(fā)的現(xiàn)狀被逐漸認(rèn)識(shí)，這與中醫(yī)理論中肝氣的疏泄功能調(diào)控脾臟的運(yùn)化功能的認(rèn)識(shí)不謀而合。四逆散出自張仲景《傷寒論·辨少陰病脈證并治》，原方由柴胡、枳實(shí)、芍藥、甘草4味藥物組成，方中柴胡-枳實(shí)協(xié)同，疏肝理氣，柴胡-芍藥2藥，兼顧肝臟體用，甘草調(diào)和諸藥，4藥合用，治療少陰樞機(jī)不利，陽(yáng)氣不得宣達(dá)的四肢逆冷證?，F(xiàn)代醫(yī)家在古方古義上進(jìn)行發(fā)展，常用四逆散來(lái)治療肝脾不和的脾胃疾患，且已有臨床研究證實(shí)了其治療功能性消化不良的有效性[3]。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，探討其治療功能性消化不良的作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 四逆散活性成分及作用靶點(diǎn)的篩選 通過(guò)對(duì)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）檢索柴胡、枳實(shí)、白芍、甘草的有效成分，以口服生物利用度（OB）≥30%和類藥性（DL）≥0.18作為篩選條件，并利用此平臺(tái)得到相關(guān)有效成分的蛋白作用靶點(diǎn)。篩選結(jié)束后，在Uniprot蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)將化合物作用的蛋白質(zhì)名稱進(jìn)行規(guī)范，剔除重復(fù)的蛋白作用靶點(diǎn)及沒(méi)有作用靶點(diǎn)的活性成分，在Cytoscape3.7.2軟件中建立“中藥成分-作用靶點(diǎn)”關(guān)系圖。

1.2 功能性消化不良相關(guān)靶點(diǎn)的篩選 通過(guò)對(duì)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索關(guān)鍵詞“functional dyspepsia”，得到功能性消化不良的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 藥物-疾病靶點(diǎn)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用R軟件取得藥物與疾病靶點(diǎn)交集，用韋恩圖的形式展現(xiàn)。將篩選得到的共同作用靶點(diǎn)上傳至String在線平臺(tái)數(shù)據(jù)庫(kù)，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)模型，將生物物種設(shè)定為“Homo sapiens”，最小互相作用閾值設(shè)定為>0.7，其余設(shè)置均為默認(rèn)設(shè)置，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，并通過(guò)CytoScape3.7.2軟件進(jìn)行加工。運(yùn)用CytoScape3.7.2內(nèi)置工具分析PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括連接度（Degree）、介度（Betweenness）及緊密度（Closeness），并根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)判斷核心靶點(diǎn)。

1.4 功能富集分析與通路分析 將篩選得到共同靶點(diǎn)上傳至DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，將物種設(shè)置為“Homo sapiens”，進(jìn)行GO功能分析和KEGG通路分析，以P<0.05進(jìn)行富集通路篩選，并進(jìn)一步篩選與功能性消化不良相關(guān)的內(nèi)容，探討四逆散治療功能性消化不良可能的生物學(xué)過(guò)程及信號(hào)通路。

1.5 四逆散成分-核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

運(yùn)用CytoScape3.7.2構(gòu)建“四逆散成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，內(nèi)置工具分析藥物成分的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，包括連接度（Degree）、介度（Betweenness）及緊密度（Closeness），并根據(jù)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)判斷核心成分。

1.6 核心成分-靶點(diǎn)分子對(duì)接驗(yàn)證

根據(jù)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)獲得核心藥物成分，從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)下載化合物結(jié)構(gòu)，使用AutodockTools1.5.6在PMV中打開配體小分子，并加氫、加電荷、檢測(cè)配體的root、進(jìn)行可旋轉(zhuǎn)鍵的搜尋與定義，并保存為pdbqt文件。將關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白的三維結(jié)構(gòu)從RCSB Protein Data Bank（www.rcsb.org）下載得到，在AutodockTools 1.5.6 PMV中打開通過(guò)添加所有的氫原子、計(jì)算Gasteiger電荷、合并非極性氫后，將其定義為受體并保存成pdbqt文件。根據(jù)配體的位置，最終確定Vina分子對(duì)接的坐標(biāo)和盒子大小，為了增加計(jì)算的準(zhǔn)確度，將參數(shù)Exhaustiveness設(shè)置為20。除了特別說(shuō)明，其他參數(shù)均采用默認(rèn)值。采用Autodock vina 1.1.2進(jìn)行半柔性對(duì)接，選取對(duì)接結(jié)合能量最低的構(gòu)象用于對(duì)接結(jié)合模式分析，并使用Pymol進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果

2.1 四逆散的有效成分

從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)以O(shè)B≥30%，DL≥0.18為篩選條件，共獲得144個(gè)化學(xué)成分，其中柴胡17個(gè)，枳實(shí)22個(gè)，白芍13個(gè)，甘草92個(gè)。獲得上述化學(xué)成分的有效靶點(diǎn)223個(gè)，將藥物成分-有效靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集導(dǎo)入CytoScape3.7.2，得到中藥成分-作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。見(jiàn)圖1。

2.2 功能性消化不良靶點(diǎn)的篩選

分別通過(guò)GeenCards數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)獲得功能性消化不良相關(guān)靶點(diǎn)2 336個(gè)和23個(gè)，篩重后共獲得靶點(diǎn)2 358個(gè)。

2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及可視化分析

利用R軟件將四逆散的活性成分對(duì)應(yīng)的223個(gè)藥物靶點(diǎn)與功能性消化不良的2 358個(gè)疾病靶點(diǎn)取交集，通過(guò)韋恩圖的形式得到152個(gè)共同靶點(diǎn)。見(jiàn)圖2。將152個(gè)共同靶點(diǎn)上傳至STRING在線數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)，得到PPI網(wǎng)絡(luò)，將該網(wǎng)絡(luò)通過(guò)Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化。見(jiàn)圖3。圖中152個(gè)節(jié)點(diǎn)為關(guān)鍵蛋白靶點(diǎn)，1 252條線條代表蛋白間的相互作用，圖中節(jié)點(diǎn)的大小與Degree值正相關(guān)，度值越大，節(jié)點(diǎn)越大;邊的粗細(xì)與Combined-score有關(guān)，分值越高，邊越粗。

對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行拓?fù)浞治?，網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的介度、緊密度和連接度的中位數(shù)分別為53.046 184 54、0.440 476 19、13，以≥1倍介度和緊密度的中位數(shù)及≥2倍連接度的中位數(shù)為篩選條件，得到核心靶點(diǎn)30個(gè)，分別為AKT1、IL6、MAPK8、MAPK1、JUN、VEGFA、STAT3、EGF、EGFR、MYC、MAPK3、CXCL8、IL1B、CASP3、CCND1、MMP9、PTGS2、RELA、MAPK14、FOS、CCL2、ESR1、ICAM1、IL10、STAT1、APP、MMP2、HMOX1、AR、IL2，認(rèn)為這些核心作用靶點(diǎn)相互作用緊密，在網(wǎng)絡(luò)中起到關(guān)鍵作用，拓?fù)浞治鼍唧w見(jiàn)表1。

2.4 四逆散治療功能性消化不良的GO功能和KEGG通路的富集分析

通過(guò)David數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)上述獲得的152個(gè)生物靶點(diǎn)進(jìn)行生物過(guò)程富集分析，研究四逆散治療功能性消化不良的可能作用機(jī)制。

2.4.1 GO功能富集分析

通過(guò)GO分析，四逆散治療功能性消化不良共得到了795個(gè)富集條目（P<0.05），其中生物過(guò)程（BP）、細(xì)胞成分（CC）、分子功能（MF）各為615個(gè)、65個(gè)、115個(gè)，每類按富集程度排序最高的15條。見(jiàn)圖4。

2.4.2 KEGG通路富集分析 通過(guò)KEGG通路富集分析，以P<0.05為條件共篩選出作用通路127條，主要富集基因數(shù)量較大的通路見(jiàn)表2。

2.5 四逆散成分-核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

構(gòu)建四逆散成分-核心靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖。通過(guò)分析網(wǎng)絡(luò)，藥物成分中MOL000422（山柰酚）連接度為48，介度為0.068 003 06，緊密度為0.526 490 07，預(yù)測(cè)山柰酚為四逆散治療功能性消化不良的主要成分，其次為MOL000098（槲皮素）（連接度為30，介度為0.016 291 06，緊密度為0.478 915 66）、MOL000006（木犀草素）（連接度為18，介度為0.054 284 63，緊密度為0.506 369 43）和MOL004328（柚皮素）（連接度為14，介度為0.011 099 56，緊密度為0.473 214 29）。其中山柰酚為柴胡、白芍和甘草共有成分，槲皮素為柴胡和甘草共有成分，木犀草素為枳實(shí)成分，柚皮素為枳實(shí)和甘草共有成分，揭示了中藥復(fù)方多成分協(xié)同作用的特點(diǎn)。見(jiàn)圖5。

2.6 分子對(duì)接結(jié)果 將度值排名前4的化合物和排名前6的靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示結(jié)合能（Affinity）均為負(fù)值，說(shuō)明受體與配體可以自發(fā)結(jié)合，且均小于-5 kcal/mol，提示有較強(qiáng)的結(jié)合活性，分子對(duì)接結(jié)果見(jiàn)圖6。根據(jù)結(jié)果可知結(jié)合能力最強(qiáng)的是MAPK8和山柰酚，利用PyMOL制作其模式圖。見(jiàn)圖7。分析表明山柰酚和MAPK8共形成3個(gè)氫鍵（圖中為黃色）。

3 討論

中醫(yī)學(xué)異病同治的本質(zhì)為辨證論治，將經(jīng)方四逆散用于治療功能性消化不良，屬于根據(jù)經(jīng)方的內(nèi)在方義進(jìn)行延伸以適應(yīng)現(xiàn)代。現(xiàn)代社會(huì)節(jié)奏加快，患者多由情志失調(diào)或脾胃虛弱而致功能性消化不良。中醫(yī)理論中的情志失調(diào)導(dǎo)致肝氣郁滯，肝木乘脾或憂思多慮傷脾，可類比于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中應(yīng)激后的系列反應(yīng)。應(yīng)激發(fā)生后，由于環(huán)境因素變化而引起心理變化，進(jìn)而腦腸互動(dòng)異常，腦腸肽分泌紊亂，產(chǎn)生痞滿等功能性消化不良相關(guān)癥狀，這是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和中醫(yī)學(xué)理論對(duì)功能性消化不良病機(jī)解釋的不同，但肝脾不和與腦腸軸理論有相通之處[4]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病發(fā)病機(jī)制與胃腸道運(yùn)動(dòng)障礙、內(nèi)臟高敏、胃酸、Hp感染、精神心理因素、腦腸肽等相關(guān)[5]。對(duì)于胃腸道動(dòng)力障礙的機(jī)制的認(rèn)識(shí)，主要集中在胃腸激素的調(diào)節(jié)機(jī)制障礙以及胃腸道運(yùn)動(dòng)的電起搏細(xì)胞-Cajal間質(zhì)細(xì)胞（Interstitial Cells of Cajal，ICC）異常2方面。另外，近期研究認(rèn)為十二指腸微炎癥與本病關(guān)系密切，尤其是十二指腸炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、局部炎癥介質(zhì)水平升高及屏障功能-緊密連接蛋白受損等[6-7]。本研究基于中藥君臣佐使共同作用的特點(diǎn)，初步研究四逆散治療功能性消化不良的生物學(xué)過(guò)程，以揭示其作用機(jī)制。

本研究顯示，四逆散與功能性消化不良相關(guān)的作用靶點(diǎn)152個(gè)。從“藥物成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖來(lái)看，連接靶點(diǎn)較多的化合物有山柰酚（Kaempferol）、槲皮素（Quercetin）、木犀草素（Luteolin）、柚皮素（Naringenin）和川陳皮素（Nobiletin）等。據(jù)報(bào)道，槲皮素能促進(jìn)功能性便秘大鼠的胃腸動(dòng)力[8]，也被實(shí)驗(yàn)證實(shí)了具有雙相調(diào)節(jié)胃腸平滑肌的作用[9]。柚皮素在何娟[10]的實(shí)驗(yàn)中被證實(shí)，是功能性消化不良患者口服四逆散湯劑后吸收入血液的成分，且具有促進(jìn)正常大鼠胃腸動(dòng)力的作用。木犀草素可以抑制模型鼠神經(jīng)元的氧化應(yīng)激損傷，具有抗抑郁作用[11]。川陳皮素是促進(jìn)胃腸動(dòng)力的活性物質(zhì)[12]。

四逆散治療功能性消化不良的關(guān)鍵靶點(diǎn)為AKT1、IL6、MARK8、MARK1、JUN、STAT3等。AKT1是蘇氨酸蛋白激酶家族的成員，是位于PI3K-AKT信號(hào)通路中的重要調(diào)節(jié)分子，位于其上游的PI3K能夠在受到體內(nèi)細(xì)胞因子和內(nèi)環(huán)境各種理化因素的刺激后被激活，產(chǎn)生肌醇，肌醇作為第二信使，調(diào)控磷酸化的AKT進(jìn)而調(diào)控下游相關(guān)因子，調(diào)節(jié)許多細(xì)胞周期過(guò)程，包括新陳代謝、增殖、成活、生長(zhǎng)等。位于其下游的eNOS是NO的調(diào)節(jié)酶，NO作為信號(hào)通路末端及其重要的信使分子，具有抑制胃腸道肌肉收縮和抑制胃腸蠕動(dòng)的作用[13-14]。功能性消化不良大鼠胃竇NO水平明顯增高[15-16]。另有研究發(fā)現(xiàn)，NO不僅是重要的胃腸道抑制性遞質(zhì)，還是維持ICC成活的因子之一，神經(jīng)源性的NO有助于ICC的成活和增殖[17-18]。

IL-6是細(xì)胞免疫因子，局部免疫因子的釋放可刺激位于胃腸黏膜中的神經(jīng)元，其高表達(dá)可通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，激活或擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，影響腎上腺應(yīng)激反應(yīng)以及胃腸蠕動(dòng)，導(dǎo)致胃腸功能紊亂[19-20]。FD患者血清IL-6水平明顯升高，IL-6與抑郁的發(fā)生相關(guān)，IL-6與抑郁癥有明顯劑量-反應(yīng)關(guān)系，而抑郁是功能性消化不良的危險(xiǎn)因素，IL-6水平或與患者功能性消化不良反復(fù)發(fā)作相關(guān)[21-22]。

MARK是絲裂原活化蛋白激酶，可以使肌動(dòng)蛋白細(xì)肌絲相關(guān)蛋白磷酸化，引起肌絲滑行，最終平滑肌收縮[23]。此外，MARK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可激活下游靶基因c-fos。c-fos是公認(rèn)的傷害性刺激神經(jīng)元激活的標(biāo)志物，當(dāng)表達(dá)c-fos的神經(jīng)元增加時(shí)，可促進(jìn)痛覺(jué)敏感的形成，使痛閾降低[24]，導(dǎo)致功能性胃腸病內(nèi)臟高敏感性的發(fā)生[25]，進(jìn)而引起胃痛、胃脹等癥狀。同時(shí)MARK通路可激活下游的核因子κB，導(dǎo)致十二指腸微炎癥的發(fā)生[26]。

JUN也是MARK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游效應(yīng)因子，是信號(hào)從細(xì)胞表明轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部的重要傳遞者，活化的JUN可和多基因啟動(dòng)子上的激活蛋白結(jié)合，使c-jun磷酸化，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性并促進(jìn)c-jun、c-fos的表達(dá)，此二者與疼痛、抑郁等有密切關(guān)系[27]。

STAT3是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子，對(duì)神經(jīng)肽陽(yáng)性神經(jīng)元的能量表達(dá)非常重要，研究指出下丘腦中STAT3下調(diào)，可調(diào)節(jié)胃腸激素從而增強(qiáng)胃腸運(yùn)動(dòng)[28-29]。

GO功能富集分析結(jié)果中，生物過(guò)程主要有藥物反應(yīng)、RNA聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控，細(xì)胞成分主要有細(xì)胞外隙、細(xì)胞溶質(zhì)，分子功能主要有酶結(jié)合和蛋白質(zhì)結(jié)合等。在靶點(diǎn)基因的KEGG富集分析中，可以發(fā)現(xiàn)PI3K-AKT信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路和Toll樣受體信號(hào)富集程度較高，與功能性消化不良關(guān)系密切。其中，PI3K-AKT信號(hào)通路和MAPK信號(hào)通路與上述分析中的關(guān)鍵靶點(diǎn)相吻合，證實(shí)上述靶點(diǎn)蛋白通過(guò)此信號(hào)通路發(fā)揮作用。PI3K-AKT-eNOS信號(hào)通路介導(dǎo)了胃腸激素NO的分泌，并進(jìn)一步影響ICC的增殖與成活，從多方面調(diào)控胃腸動(dòng)力。MARK信號(hào)通路是調(diào)控炎癥、疼痛、抑郁等的經(jīng)典信號(hào)通路，可通過(guò)多種機(jī)制參與功能性胃腸病內(nèi)臟痛敏的形成與發(fā)展[30]。TNF信號(hào)通路也被證實(shí)參與功能性消化不良的發(fā)生，研究表明四逆散可以通過(guò)降低腫瘤壞死因子（Tumor Nucrosis Factor，TNF），改善功能性消化不良大鼠緊密連接完整性，減輕十二指腸輕度炎癥[6]。Toll樣受體信號(hào)通路是經(jīng)典炎癥通路，在機(jī)體應(yīng)激條件下，通路中受體異常激活，使下游核因子κB等信號(hào)分子激活，炎性細(xì)胞和炎癥介質(zhì)的釋放增加產(chǎn)生多種炎癥反應(yīng)。

利用Autodock軟件對(duì)4個(gè)藥物成分及6個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，提示篩選出的藥物成分和靶點(diǎn)結(jié)合性較高，驗(yàn)證了運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)四逆散治療功能性消化不良進(jìn)行探討結(jié)果的可靠性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)四逆散中山柰酚、槲皮素、木犀草素等成分直接作用于AKT1、IL6、MAPK8、MAPK1、JUN、STAT3等相關(guān)靶點(diǎn)起作用，并通過(guò)PI3K-AKT、MARK和TNF等信號(hào)通路，改善胃腸動(dòng)力、降低內(nèi)臟高敏感性、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)減輕炎癥及緩解抑郁等負(fù)面情緒，抑制功能性消化不良的病理發(fā)展機(jī)制，體現(xiàn)了中藥復(fù)方君臣佐使，多靶點(diǎn)協(xié)作的調(diào)節(jié)作用，為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的進(jìn)一步研究提供了理論基礎(chǔ)。同時(shí)結(jié)果中大量炎癥反應(yīng)相關(guān)通路揭示了十二指腸微炎癥可能在功能性消化不良發(fā)病機(jī)制中非常重要，是未來(lái)治療功能性消化不良研究的一大方向。本研究?jī)H從理論及網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)的角度進(jìn)行分析，具體的作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

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（2020-08-01收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）