□ 馬杰華 平南縣公共檢驗檢測中心

酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）是以酶標記抗體技術(shù)為基礎(chǔ)，在實際應用中，可通過酶標抗體及待測標本的未標記抗原進行檢驗，并分離游離的已經(jīng)結(jié)合的標記抗原進行酶活性測定與分析，從而得到待測抗原的含量。ELISA具有選擇性好、靈敏度高、檢測結(jié)果比較準確、實用性強等優(yōu)點，被廣泛應用于臨床醫(yī)學、生物學及化學分析等領(lǐng)域中?；诖耍芯考胺治鯡LISA在食品安全檢測中的應用，對進一步實現(xiàn)食品安全檢驗水平提升有積極作用[1]。

1 酶聯(lián)免疫吸附的基本原理

ELISA是將抗原或抗體以不損壞免疫活性的條件，結(jié)合到固相載體的表面。在進行測定的過程中，可根據(jù)檢驗標準對抗原、抗體的反應過程、復合物等進行檢測分析。在反應過程中，固相載體上酶標抗原或抗體被結(jié)合量等進行統(tǒng)計與分析，洗滌處理后，去除反應液中的其他物質(zhì)，在加入酶反應底物后，底物可通過酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物，最后，采用定性或定量分析的方式，對有色產(chǎn)物量進行檢驗與分析[2]。ELISA在實際應用中，其基本應用原理如圖1所示。

圖1 操作步驟

ELISA在實際應用中，其可以采用直接法、間接法兩種方式進行檢驗分析。其中，直接法則是酶標記抗體與待檢測樣本中固相抗原直接產(chǎn)生作用，并在加入底物后，出現(xiàn)顏色變化。間接法則是以已知抗原為基礎(chǔ)，吸附在固相載體上，與待檢測樣本中的抗體作用為主，加入酶標記抗同種動物抗體的免疫球蛋白，并加入酶底物，顯色。ELISA在實際應用中，可通過直接、間接的方式進行檢驗與分析，并結(jié)合最終的顯色，從而判定最終的檢驗結(jié)果。

2 ELISA操作的影響因素分析

ELISA的實際應用中，需對ELISA測定結(jié)果的影響因素進行分析。①抗原包液的質(zhì)量對ELISA的測定結(jié)果會產(chǎn)生直接的影響。將抗原固定在聚苯乙烯微量反應板中，其效果對抗原-抗體反應等會產(chǎn)生直接的影響。②非特異性反應的干擾。在設置稀釋液空白、陽性及陰性參比血清的基礎(chǔ)上，需采用包埋、封閉等方式進行預處理。如在抗原包液中加入牛血清白蛋白、明膠和吐溫-20等，從而達到減少非特異性反應的目的。③高選擇性的單克隆抗體可代替多克隆抗體，這對提高ELISA特異性方面有積極作用。④在實際操作中，選擇表面積相對較大的固相載體，可提高ELISA的敏感性以及操作性。⑤酶合交聯(lián)劑對ELISA的操作會產(chǎn)生直接的影響。在利用免疫法或化學法的過程中，HRP與抗體的交聯(lián)可采用高碘酸鈉氧化法進行處理，從而達到檢驗與操作的目的。酶底物本身要求無色，在反應后可出現(xiàn)顏色變化。大多HRP是以鄰苯二胺為酶底物，AKP則是以硝基苯磷酸鹽為ELISA檢驗的酶底物[3]。

3 酶聯(lián)免疫吸附在食品安全檢測中的應用分析

3.1 細菌檢測

沙門氏菌是食品安全檢測中的關(guān)鍵指標，可采用制備單克隆抗體的ELISA方法對沙門氏菌進行檢測，最低檢測量可達到500 cfu/g，時間為22 h，可實現(xiàn)全自動檢測。在利用BADot-ELISA對食品中的李氏桿菌進行檢驗的過程中，其檢驗的敏感性可達到104個/mL，而且節(jié)省時間。以蘇丹紅1號為研究對象，在對其抗原序列進行分析時，通過抗原可實現(xiàn)溶解劑的制備。在對食品中的病原微生物進行檢驗時，強化ELISA檢測程序，可提高吸附的靈敏性。單核細胞的檢驗，可采用細菌分離的方式，但檢驗周期較長，所以，可建立重組單細胞ELISA檢測方法，提升單細胞細菌的檢驗 效果[4]。

3.2 生物毒素檢驗

真菌毒素對人體健康產(chǎn)生直接的影響，毒性相對較強，有致癌作用，如黃曲霉毒素的毒性較強，對人體的傷害性較大，具有一定的免疫抑制性，較低的含量就會導致各類疾病?？衫肊LISA對真菌毒素進行檢驗與分析，如在利用ELISA檢驗黃曲霉毒素B+G標準品的過程中，檢驗的最低濃度為0.13 ng/mL，最低的檢出量為 50 μg/kg，利用校正曲線分析，線性范圍為0.25～20 ng/mL?？赏ㄟ^ELISA檢驗，對生物毒素含量及吸附敏感性等方面進行檢驗與分析，從而滿足食品安全檢驗的實際需求。ELISA對真菌毒素的檢驗與分析，包括黃曲霉素、抗原體及特異性抗體等方面，ELISA的應用穩(wěn)定性較高，測量結(jié)果較準確。

3.3 藥物材料檢測

利用ELISA可對食品中的藥物殘留進行檢測與分析，如有害殘留成分、禁用獸用殘留成分等。以肉制品為研究對象，利用ELISA可對生鮮肉的血清蛋白和熟食肉制品的肌肉抗原進行檢測。在檢測瘦肉精時，可對食品的可食用性、安全性等進行檢驗與分析，如果食用的肉制品瘦肉精含量超標，易導致人們出現(xiàn)頭疼、四肢麻木等癥狀。而且，ELISA可對動物脂肪中的孕激素殘留量進行檢驗，如果殘留量超標，則說明食品質(zhì)量不達標[5]。

3.4 轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)測

在對轉(zhuǎn)基因食品的研發(fā)、食用等方面進行綜合分析時，可通過ELISA技術(shù)對基因序列、目的蛋白質(zhì)等進行檢驗與分析，通過雙夾心ELISA法的應用，可對轉(zhuǎn)基因成分進行評估與分析，有助于提高食品安全質(zhì)量。以轉(zhuǎn)基因大豆為例，通過ELISA的應用，可對抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆中的CP4EPSPS蛋白進行檢驗，而且，在檢驗的過程中，可檢測出不同轉(zhuǎn)基因大豆中的蛋白含量，這對提高轉(zhuǎn)基因食品安全檢驗水平有積極作用。

4 結(jié)語

綜上所述，探究酶聯(lián)免疫吸附分析法的實際應用，對酶聯(lián)免疫吸附在轉(zhuǎn)基因食品、藥物材料、生物毒素等檢測中的應用進行研究，酶聯(lián)免疫吸附的應用方式不同，食品檢驗與分析效果方面也存在一定的差異。但是，在酶聯(lián)免疫吸附的實際應用中，強化自動檢測儀器的開發(fā)與應用對提高酶聯(lián)免疫吸附分析法在食品安全檢測中的實際應用效果有積極作用。