馮 濤 阮世勇 羅苑銘 許貞侃 陶 森

（陽(yáng)江市檢測(cè)檢驗(yàn)中心，廣東陽(yáng)江 529500）

農(nóng)藥具有除草、防治病蟲(chóng)害、提高作物產(chǎn)量等作用，農(nóng)藥的不規(guī)范使用，會(huì)使農(nóng)產(chǎn)品存在農(nóng)藥殘留超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)人體和環(huán)境造成危害。為規(guī)范農(nóng)藥的使用，國(guó)家衛(wèi)健委等部門(mén)頒布了農(nóng)藥殘留安全標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)業(yè)等部門(mén)一直在加強(qiáng)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。因此研究農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)，對(duì)環(huán)境和人體的健康與安全具有重要意義。本試驗(yàn)以苯醚甲環(huán)唑?yàn)檠芯繉?duì)象，大白菜為試驗(yàn)樣品，采用試驗(yàn)室經(jīng)典的提取凈化方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，通過(guò)對(duì)比回收率以選取出最優(yōu)的前處理方法，研究結(jié)果可為蔬菜中苯醚甲環(huán)唑的檢測(cè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑、耗材與儀器

苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)品，SB05-170-2008，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研所；乙腈、丙酮、正己烷、甲酸、甲醇、二氯甲烷，均為色譜純，德國(guó)默克公司；乙酸銨，色譜純，上海安普；氯化鈉，分析純，廣州試劑；QuEChERS 凈化柱、氨基凈化柱、弗羅里硅凈化柱、C18凈化柱，上海安普科學(xué)儀器有限公司；0.22 μm 微孔濾膜，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

LCMS－8050 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，日本島津公司；31-8KS 離心機(jī)，美國(guó)Sigma 公司；MFV-24 氮吹儀，廣州得泰儀器科技有限公司；KS130 振蕩器，德國(guó)IKA 公司；KQ2200DE 超聲儀，昆山超聲儀器有限公司；T25 均質(zhì)機(jī)，德國(guó)IKA 公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 儀器參數(shù)

1.2.1.1 液相色譜參數(shù)

色譜柱：C18（75 mm×3.0 mm，2.7 μm）；流動(dòng)相：A 相為2 mmol 乙酸銨-0.1%甲酸水溶液，B 相為乙腈；流速：0.4 mL/min；柱溫：40 ℃；采用梯度洗脫，洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2.1.2 質(zhì)譜參數(shù)

離子源：ESI；離子化方式：ESI+；離子源溫度：300 ℃；加熱氣：10 L/min；霧化氣：3.0 L/min；干燥氣：10 L/min；DL 管溫度；250 ℃；定量離子對(duì)；405.90>251.00 CE -21V；定性離子對(duì)405.90 >337.00 CE-21V。

1.2.2 方法學(xué)驗(yàn)證

配制質(zhì)量濃度為0 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L 的系列苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，驗(yàn)證其線性，對(duì)50 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)測(cè)定6 次，記錄峰面積計(jì)算RSD 表示精密度，記錄10 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液儀器測(cè)定的信噪比，評(píng)價(jià)儀器檢出限；在提取凈化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)和加標(biāo)回收試驗(yàn)，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法的精密度和準(zhǔn)確度。

1.2.3 提取凈化方法篩選

選取QuEChERS 凈化柱、氨基凈化柱（NH2）、弗羅里硅凈化柱（Florisil）、C18凈化柱4 種試驗(yàn)室常用凈化小柱，向陰性樣品基質(zhì)溶液加入10 mg/L苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.04 mL 定容至10 mL，制備成40 μg/L 的基標(biāo)準(zhǔn)溶液，取2.0 mL 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液分別過(guò)4 種凈化柱，測(cè)定基質(zhì)凈化液濃度，計(jì)算回收率，通過(guò)回收率評(píng)價(jià)凈化效果。

在凈化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取振蕩、超聲、均質(zhì)3 種常見(jiàn)的提取方法，對(duì)基質(zhì)加標(biāo)樣品分別提取，經(jīng)凈化后上機(jī)測(cè)定，通過(guò)對(duì)比回收率評(píng)價(jià)提取效率。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

以苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行一次線性回歸擬合，線性方程為y=27 679x -17 320，R2=0.999，表明苯醚甲環(huán)唑在質(zhì)量濃度為0 μg/L～200 μg/L 范圍內(nèi)線性良好，10 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液信噪比S/N=2 876，遠(yuǎn)大于3，儀器檢出限低于10 μg/L，滿(mǎn)足分析要求。

儀器測(cè)定的穩(wěn)定性是檢測(cè)方法穩(wěn)定有效使用的重要方面，影響液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定穩(wěn)定性的因素主要有液相端的色譜條件，包括柱溫、柱壓、流動(dòng)相pH、流動(dòng)相比例等，通過(guò)影響分離度和出峰時(shí)間影響測(cè)定穩(wěn)定性；質(zhì)譜端離子化條件，包括霧化氣溫度、離子源溫度、加熱氣溫度等。本試驗(yàn)采用重復(fù)測(cè)定的方法評(píng)價(jià)儀器測(cè)定的穩(wěn)定性，對(duì)50 μg/L 苯醚甲環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)測(cè)定6 次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 儀器測(cè)定穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

由表2 可知，峰面積RSD=1.01%，表明儀器檢測(cè)穩(wěn)定性良好。

2.2 凈化柱篩選

不同凈化柱處理試樣的回收率如圖1 所示。

由圖1 可知，QuEChERS 凈化效果最好，QuEChERS 小柱中包含Mg2SO4、PSA、GCB、C18等多種凈化填料，對(duì)色素、脂肪、蛋白質(zhì)、纖維等均具有良好的凈化效果；C18凈化柱凈化效果最差，回收率僅為19.08%，可能的原因?yàn)楸矫鸭篆h(huán)唑在C18凈化小柱上保留能力差，凈化過(guò)程中流失嚴(yán)重。因此本試驗(yàn)選用QuEChERS 凈化小柱，該凈化方法回收率高、操作簡(jiǎn)單、高效，適用于苯醚甲環(huán)唑檢測(cè)中的凈化。

2.3 提取方法的選擇

在凈化試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用振蕩、超聲、均質(zhì)3 種提取方法進(jìn)行試驗(yàn)，基質(zhì)加標(biāo)樣品分別采用3種方法提取后，均使用QuEChERS 凈化上機(jī)，通過(guò)對(duì)比回收率選取最佳提取方法，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2 可知，3 種提取方法的回收率在77.30%～91.26%之間，均滿(mǎn)足農(nóng)殘檢測(cè)回收率應(yīng)在70%～120%的要求。其中振蕩提取效率最高，但所需時(shí)間一般為30 min，比超聲和均質(zhì)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)于回收率要求高的檢測(cè)任務(wù)可采取該方法。均質(zhì)提取回收率最低，但時(shí)間最短，2 min 內(nèi)即可完成提取操作，適用于食物中毒應(yīng)急檢測(cè)等對(duì)時(shí)效性要求高的檢測(cè)任務(wù)。

圖2 不同提取方法回收率

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性試驗(yàn)是評(píng)價(jià)檢測(cè)方法穩(wěn)定性的有效方式，取大白菜陰性樣品6 份，每份10 g，加入10 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1 mL，制備0.1 mg/kg 的加標(biāo)樣品，向加標(biāo)樣品中加入10 mL 乙腈，5 g 氯化鈉，采用振蕩提取，QuEChERS 凈化方法對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行前處理，上機(jī)測(cè)定，樣品溶液理論值為100 μg/L，重復(fù)試驗(yàn)6 次，記錄測(cè)定濃度和峰面積，計(jì)算測(cè)定結(jié)果RSD，衡量檢測(cè)方法精確度，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

由表3 可知，測(cè)定結(jié)果中過(guò)半數(shù)據(jù)結(jié)果大于理論值，回收率高于100%，可能是基質(zhì)效應(yīng)引起的，即使用該方法測(cè)定大白菜中的苯醚甲環(huán)唑時(shí)基質(zhì)會(huì)增大苯醚甲環(huán)唑在儀器上的響應(yīng)值，但基質(zhì)效用小于10%，影響不顯著，通過(guò)使用空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方式可以控制基質(zhì)效用。

2.5 回收率試驗(yàn)

取陰性樣品7 份，其中1 份為空白對(duì)照，其余6 份分成2 組，每組3 份，按低、中、高三水平加標(biāo)，加標(biāo)樣品4 ℃冷藏過(guò)夜使農(nóng)藥同基質(zhì)充分接觸。取出樣品使之恢復(fù)至室溫，加20 mL 乙腈，5 g氯化鈉，10 000 r/min 均質(zhì)提取30 s，離心取上清液至QuEChERS 凈化小柱中，振搖1 min，8 000 r/min離心10 min，取上清過(guò)孔徑0.22 μm 微孔濾膜上機(jī)測(cè)定。加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果如表4 所示。

表4 加標(biāo)回收試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

由表4 可知，低、中、高三水平回收率為77.59%～96.63%，回收率表現(xiàn)出隨加標(biāo)濃度增大而增大的趨勢(shì)，組內(nèi)平行樣品平行性良好，可滿(mǎn)足農(nóng)殘檢測(cè)要求。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，蔬菜中苯醚甲環(huán)唑的測(cè)定中QuEChERS 凈化效果好、效率高，3 種提取方法沒(méi)有顯著差異，振蕩提取方法的回收率略高于其他2種，對(duì)于大白菜中的苯醚甲環(huán)唑最優(yōu)的前處理方式為振蕩提取、QuEChERS 凈化。通過(guò)重復(fù)性試驗(yàn)和加標(biāo)回收試驗(yàn)可知，運(yùn)用LC-MS/MS 法測(cè)定蔬菜中的苯醚甲環(huán)唑，具有靈敏度高、精密度良好，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確高效的優(yōu)點(diǎn)，能夠滿(mǎn)足國(guó)家規(guī)定的要求。