史紀(jì)元 姬樂 易智 劉時(shí)璋 劉慧通 王雄勛

(1.陜西省人民醫(yī)院骨科，陜西 西安 710068；2.西安市國(guó)際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院骨科，陜西 西安 710100)

脊髓損傷(SCI)是脊柱損傷中最常見的并發(fā)癥，常引起嚴(yán)重的中樞神經(jīng)功能缺損并伴有進(jìn)行性神經(jīng)退行性病變，該病致殘率高、手術(shù)費(fèi)用高，給患者造成巨大的心理影響和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管針對(duì)SCI患者的治療手段方面已經(jīng)取得較大的進(jìn)展，其中包括傳統(tǒng)的藥物治療、手術(shù)治療、細(xì)胞治療、基因治療和組織工程支架，但仍缺乏有效的治療方法。因此，尋找新的、有效的治療方法迫在眉睫。MicroRNAs (miRNAs)是一種高度保守的非編碼RNA，約有19～25個(gè)核苷酸，能夠特異性結(jié)合靶基因mRNA的3’-UTR，進(jìn)而抑制或阻斷靶基因mRNA的翻譯過程。研究發(fā)現(xiàn)多種miRNAs參與中樞神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化、凋亡和損傷修復(fù)，其中miR-301a的異常表達(dá)不僅與腫瘤的惡性程度和患者預(yù)后有一定的相關(guān)性，而且還參與癲癇等神經(jīng)性疾病的發(fā)生。然而，miR-301a-3p在SCI中的作用仍不清楚。分選連接蛋白27(SNX27)參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)展和病理過程。已有研究證明，SNX27與阿爾茲海默病、唐氏綜合癥、小兒肌陣攣性癲癇、腦積水等神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)，但關(guān)于miR-301a-3p靶向SNX27并參與SCI后神經(jīng)功能修復(fù)的研究則較少。因此，本研究旨在探討miR-301a-3p靶向SNX27在SCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡和功能恢復(fù)中的調(diào)控作用及其潛在機(jī)制，為SCI治療提供新的治療策略。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年雄性Sprague-Dawley大鼠(8周齡，體質(zhì)量200～220 g)購(gòu)買于上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司。將大鼠置于特定的無病原體屏障系統(tǒng)中恒溫7 d，控制條件：溫度(23±0.5)℃，相對(duì)濕度70±10%，人工12 h明暗循環(huán)，自由取水取食。

1.1.2主要試劑 miR-301a-3p模擬物(miR-301a-3p mimic)、miR-301a-3p 抑制物(miR-301a-3p inhibitor)及各自陰性對(duì)照(NC mimic和NC inhibitor)，SNX27干擾RNA(SNX27 siRNA)，SNX27過表達(dá)載體(Ad-SNX27)均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；HEK-293細(xì)胞和未分化的PC12細(xì)胞株(上海細(xì)胞生物學(xué)研究所)；Lipofectamine?2000和Trizol試劑均購(gòu)于美國(guó)Invitrogen公司；TaqMan MicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于大連Takara生物科技公司； SYBR Green PCR Master Mix 均購(gòu)于美國(guó)Applied Biosystems公司；兔抗大鼠SNX 27、Cleaved-caspase 3、NF-200抗體購(gòu)于大連Takara生物科技公司；兔抗小鼠Bcl-2和Gap-43抗體購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒、PBS 緩沖液均購(gòu)于上海凱基生物。

1.1.3主要儀器 Western blot系統(tǒng)(北京六一儀器廠 DYY-7C)，Bio-Rad 680酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司)，臺(tái)式低溫高速離心機(jī)(日本KUBOTA公司)，細(xì)胞培養(yǎng)箱(上海力申科學(xué)儀器公司)，流式細(xì)胞儀(Beckman CytoFLEX)。

1.2方法

1.2.1分組及脊髓損傷(SCI)大鼠模型建立 按照Allen背側(cè)打擊法建立大鼠脊髓撞擊損傷模型：首先對(duì)大鼠腹腔注射10%水合氯醛(30 mg/kg)進(jìn)行麻醉。在小鼠背側(cè)縱行切開以脊柱T10為中心的背部皮膚和皮下組織，暴露硬脊膜，然后將質(zhì)量為10 g、直徑為2 mm的打擊砝碼從大鼠垂直上方5 cm處自由下落，對(duì)大鼠T10節(jié)段脊柱進(jìn)行打擊。在砝碼撞擊于脊髓時(shí)，大鼠軀體快速抽動(dòng)，雙下肢迅速回縮及彈動(dòng)，尾巴痙攣性擺動(dòng)，大鼠出現(xiàn)暫時(shí)性排尿功能障礙。假手術(shù)組(Sham)進(jìn)行了除脊髓打擊損傷過程以外的其他所有處理。將大鼠隨機(jī)分為12組：假手術(shù)組(1 d、3 d、7 d、14 d、21 d和28 d)和SCI組(1 d、3 d、7 d、14 d、21 d和28 d)，每組5只。最后，取擊打部位的組織進(jìn)行qPCR分析。所有實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物處理均嚴(yán)格按照陜西省人民醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的規(guī)定進(jìn)行。

1.2.2PC12細(xì)胞培養(yǎng)和H2O2損傷模型的建立 用含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)PC12細(xì)胞，并置于37℃，5% CO2孵育箱中培養(yǎng)。建立H2O2損傷PC12細(xì)胞模型，將濃度為1×105個(gè)細(xì)胞/孔的PC12細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，待培養(yǎng)至第3天后，棄去原培養(yǎng)液，加入含有150 μmol/L H2O2的無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染 當(dāng)受損PC12細(xì)胞密度達(dá)到70%匯合時(shí)，將其接種于6孔板(1×105個(gè)細(xì)胞/孔)中培養(yǎng)。培養(yǎng)3 h后，使用Lipofectamine?2 000將miR-301a-3p mimic(100 nM)，miR-301a-3p inhibitor(100 nM)，SNX27 siRNA(30 nM)或陰性對(duì)照(NC mimic，NC inhibitor)轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。為了在受損PC12細(xì)胞中過表達(dá)SNX27，使用Lipofectamine 2 000(Invitrogen)將構(gòu)建的腺病毒介導(dǎo)的SNX27過表達(dá)載體(Ad-SNX27，2 μM)和陰性對(duì)照空白腺病毒載體轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。

1.2.4脊髓運(yùn)動(dòng)功能評(píng)價(jià) 分別在SCI后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d和28 d對(duì)大鼠脊髓損傷模型組(SCI)和假手術(shù)組(Sham)采用0～21分的BBB (Basso-Beattie-Bresnahan)評(píng)分法評(píng)定大鼠的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況，每項(xiàng)指標(biāo)共評(píng)定3次。分?jǐn)?shù)越高表明大鼠的運(yùn)動(dòng)功能越正常。由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的研究人員對(duì)各組大鼠進(jìn)行獨(dú)立觀察。在進(jìn)行評(píng)分實(shí)驗(yàn)前做好檢查，防止因其他因素影響行動(dòng)而引起實(shí)驗(yàn)誤差。

1.2.5實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)脊髓組織和受損PC12細(xì)胞中miR-301a-3p和SNX27 mRNA的表達(dá)水平 使用Trizol試劑從受損脊髓組織或PC12細(xì)胞中提取總RNA樣本，并用紫外分光光度計(jì)(260 nm)檢測(cè)RNA的含量和純度。為了檢測(cè)miR-301a-3p的表達(dá)，用TaqMan MicroRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，并用SYBR Green PCR Master Mix進(jìn)行PCR擴(kuò)增，U6用作miRNA的內(nèi)參。為了檢測(cè)SNX27的mRNA表達(dá)，使用Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，并使用SYBR Green PCR Master Mix擴(kuò)增反轉(zhuǎn)錄后的產(chǎn)物。然后采用Applied Biosystems 7900HT qPCR系統(tǒng)按照以下熱循環(huán)參數(shù)進(jìn)行qPCR：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)。通過2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。GAPDH用作mRNA的內(nèi)參。

1.2.6Western blot 檢測(cè)SNX27、凋亡相關(guān)蛋白(Cleaved-caspase 3和Bcl-2)以及軸突相關(guān)蛋白(Gap-43和NF-200)的相對(duì)表達(dá)量 收集受損PC12細(xì)胞裂解物，然后加入RIPA裂解液和蛋白酶抑制劑提取PC12細(xì)胞中的總蛋白質(zhì)，使用BCA試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。將30 μg/孔蛋白質(zhì)通過10%的SDS-PAGE 凝膠進(jìn)行電泳，然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上(電壓100 V，時(shí)間2 h)。轉(zhuǎn)膜后，在室溫下用5%脫脂牛奶將膜封閉1 h，并與一抗[SNX 27(1：800)、Cleaved-caspase 3和Bcl-2(1：500)、NF-200和Gap-43(1：1 000)以及GAPDH(1：3 000)抗體]結(jié)合，4 ℃下孵育過夜，然后用TBST洗PVDF膜3次。最后，在室溫下與IgG (1：1 000)孵育2 h后，用ECL化學(xué)發(fā)光劑盒進(jìn)行染色和凝膠圖像分析。用GAPDH為作為內(nèi)參。

1.2.7流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)受損PC12神經(jīng)細(xì)胞凋亡率 采用FITC凋亡試劑盒檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡水平。轉(zhuǎn)染后48 h，將PC12細(xì)胞(1×105)懸浮于300 μL1×Binding buffer緩沖液中，再加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI，然后在室溫下避光放置約15 min，最后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率。

1.2.8雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-301a-3p和SNX27之間的靶向調(diào)控關(guān)系 利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)工具TargetScan (http://www.targetscan.org/vert_71/) 和miRBase (http://www.mirbase.org) 預(yù)測(cè)miR-301a-3p和SNX27的結(jié)合位點(diǎn)，合成SNX27基因片段。將具有結(jié)合位點(diǎn)的野生型(WT)和突變型(MUT)SNX27 mRNA 3’-UTR序列與pmiR-GLO雙熒光素酶載體質(zhì)粒連接以獲得pmi RGLO-SNX27 3’-UTR重組報(bào)告質(zhì)粒，然后在24孔板上使用Lipofectamine?2 000將pmi RGLO-SNX 27 3’-UTR重組報(bào)告質(zhì)粒和NC mimic (陰性對(duì)照)、miR-301a-3p模擬物(miR-301a-3p mimic)共轉(zhuǎn)染到HEK-293細(xì)胞中。共轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，然后采用酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞的熒光素酶活性。

2 結(jié) 果

2.1SCI組和Sham組的BBB評(píng)分比較 與Sham組相比，SCI后大鼠在1 d、3 d、7 d、14 d、21 d和28 d的BBB評(píng)分明顯較低，這說明SCI后大鼠的脊髓運(yùn)動(dòng)功能明顯減退(*P<0.05，**P<0.01)，同時(shí)也表明大鼠脊髓損傷模型構(gòu)建成功。此外，隨著時(shí)間的增加，SCI后大鼠的運(yùn)動(dòng)功能逐漸得到恢復(fù)，并趨于正常。見圖1。

2.2SCI大鼠受損脊髓組織中miR-301a-3p和SNX27 mRNA的表達(dá)情況 從qPCR檢測(cè)結(jié)果可以看出，與Sham組相比，SCI后大鼠脊髓組織中miR-301a-3p的相對(duì)表達(dá)水平在7～21 d時(shí)明顯降低，并在21 d達(dá)到最小值(圖2A)；而SNX27在各時(shí)間點(diǎn)的mRNA水平則均明顯高于Sham組，并且隨著時(shí)間的增加而增高(圖2B)。總之，大鼠SCI模型中miR-301a-3p的表達(dá)下調(diào)，而SNX27呈現(xiàn)與之相反的表達(dá)模式。

2.3過表達(dá)miR-301a-3p對(duì)受損PC12細(xì)胞凋亡和軸突再生相關(guān)蛋白(Gap-43和NF-200)的影響 qPCR檢測(cè)miR-301a-3p mimic轉(zhuǎn)染效率顯示，Control組(1.00±0.080)、H2O2組(0.40±0.070)、H2O2+NC mimic組(0.42±0.130)、H2O2+miR-301a-3p mimic組(2.10±0.090)，表明受損PC12細(xì)胞中miR-301a-3p的表達(dá)水平明顯下調(diào)(P<0.05)；而在受損PC12細(xì)胞中過表達(dá)miR-301a-3p后，其表達(dá)水平則顯著上調(diào)(P<0.01)。流式細(xì)胞術(shù)和Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，受損PC12細(xì)胞的凋亡率明顯增加，并且Cleaved-caspase 3和Bcl-2的表達(dá)水平也顯著上調(diào)和下調(diào)；而在受損PC12細(xì)胞中過表達(dá)miR-301a-3p可明顯降低細(xì)胞的凋亡效果(圖3A和3B)；此外，受損PC12中軸突再生相關(guān)蛋白Gap-43和NF-200的表達(dá)量顯著下調(diào)，而過表達(dá)miR-301a-3p則改變了這一結(jié)果(圖3C)。這些數(shù)據(jù)表明，miR-301a-3p能夠抑制受損PC12細(xì)胞的凋亡，并促進(jìn)軸突再生。

2.4抑制miR-301a-3p表達(dá)對(duì)受損PC12細(xì)胞凋亡和軸突再生相關(guān)蛋白(Gap-43和NF-200)的影響 受損PC12細(xì)胞中miR-301a-3p的表達(dá)水平顯示，Control組(1.00±0.070)、H2O2組(0.59±0.060)、H2O2+NC inhibitor組(0.60±0.078)、H2O2+miR-301a-3p inhibitor組(0.21±0.069)，結(jié)果表明在受損PC12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-301a-3p inhibitor后，miR-301a-3p表達(dá)水平明顯下調(diào)(P<0.01)。流式細(xì)胞術(shù)和Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在受損PC12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-301a-3p inhibitor能夠進(jìn)一步增強(qiáng)受損PC12細(xì)胞的凋亡效果(圖4A和4B)。同時(shí)，在受損細(xì)胞中抑制miR-301a-3p表達(dá)可進(jìn)一步抑制Gap-43和NF-200的表達(dá)(圖4C)。因此，抑制miR‐301a‐3p表達(dá)能夠促進(jìn)受損PC12細(xì)胞的凋亡，抑制軸突再生能力。

2.5miR-301a-3p對(duì)SNX27 的靶向調(diào)控作用 利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)工具對(duì)miR-301a-3p的靶基因分析發(fā)現(xiàn)，SNX27是miR-301a-3p的靶點(diǎn)(圖5A)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，miR-301a-3p顯著降低了含有野生型SNX27結(jié)合位點(diǎn)的熒光素酶活性(P<0.01)，但不影響突變型SNX27的熒光素酶活性(圖5B)。為了驗(yàn)證上面的結(jié)果，我們進(jìn)一步探究了miR-301a-3p對(duì)SNX27表達(dá)水平的調(diào)控作用，Control組(1.00±0.081)、H2O2組(2.10±0.070)、H2O2+NC mimic組(2.10±0.091)、H2O2+miR-301a-3p mimic組(0.40±0.020)、H2O2+NC inhibitor組(2.01±0.069)、H2O2+miR-301a-3p inhibitor組(3.10±0.078)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在受損PC12細(xì)胞中過表達(dá)miR-301a-3p后，SNX27的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低(P<0.01)，而抑制miR-301a-3p表達(dá)則顯著上調(diào)了SNX27的mRNA和蛋白表達(dá)水平(P<0.05)(圖5C)。這些結(jié)果表明miR-301a-3p能夠直接靶定SNX27 mRNA的3’-UTR，并與SNX27呈相反的表達(dá)模式。

2.6miR-301a-3p靶向調(diào)控SNX27對(duì)受損PC12細(xì)胞凋亡和軸突再生相關(guān)蛋白(Gap-43和NF-200)的影響 在受損PC12細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Ad-SNX27可顯著上調(diào)SNX27蛋白水平的表達(dá)，而轉(zhuǎn)染SNX27 siRNA則下調(diào)SNX27的蛋白表達(dá)(圖6A)。受損PC12細(xì)胞中SNX27影響miR-301a-3p對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用顯示Control組(5.0±0.40)、H2O2組(25.0±0.65)、H2O2+miR-301a-3p mimic組(11.0±0.78)、H2O2+SNX27 siRNA組(10.5±0.49)、H2O2+miR-301a-3p mimic+Ad-SNX27組(24.0±0.58)，結(jié)果表明在受損PC12細(xì)胞中過表達(dá)miR-301a-3p和干擾SNX27均可減弱細(xì)胞凋亡效果，促進(jìn)軸突相關(guān)蛋白Gap-43和NF-200的表達(dá)，再次驗(yàn)證了miR-301a-3p與SNX27呈相反表達(dá)模式的結(jié)論；此外，過表達(dá)SNX27后能夠減弱miR-301a-3p對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用，以及對(duì)軸突相關(guān)蛋白Gap-43和NF-200表達(dá)的促進(jìn)作用(圖6B)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明miR-301a-3p能夠通過下調(diào)SNX27進(jìn)而抑制SCI后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和促進(jìn)神經(jīng)軸突的生長(zhǎng)。

3 討 論

SCI是脊柱外科常見的疾病之一，它可導(dǎo)致脊髓周圍長(zhǎng)期細(xì)胞損傷和局部炎癥的發(fā)生，甚至可能導(dǎo)致相關(guān)神經(jīng)通路的損傷，最終造成患者肢體麻木甚至癱瘓。引發(fā)SCI的發(fā)病機(jī)制主要有脊髓原發(fā)性損傷和脊髓繼發(fā)性損傷。近年來，隨著深度測(cè)序的發(fā)展，出現(xiàn)了一些針對(duì)SCI患者的新治療手段，其中包括miRNAs。本文探究SCI后miR-301a-3p對(duì)神經(jīng)細(xì)胞功能的作用及其在神經(jīng)損傷修復(fù)過程中的分子機(jī)制。結(jié)果表明在損傷脊髓組織中miR-301a-3p的表達(dá)下調(diào)，SNX27呈現(xiàn)相反的表達(dá)模式。體外實(shí)驗(yàn)證明miR-301a-3p過表達(dá)能夠抑制SCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡，并促進(jìn)神經(jīng)軸突相關(guān)蛋白Gap-43和NF-200的表達(dá)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)表明miR-301a-3p通過直接靶定SNX27對(duì)SCI后神經(jīng)細(xì)胞功能恢復(fù)進(jìn)行調(diào)節(jié)。此外，過表達(dá)SNX27基因能夠拮抗miR-301a-3p對(duì)細(xì)胞凋亡和神經(jīng)軸突再生能力的影響。

研究表明，miRNAs在SCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡過程發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果表明，在大鼠SCI模型中miR-301a-3p的表達(dá)量下調(diào)，當(dāng)在損傷細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-301a-3p mimic或miR-301a-3p inhibitor時(shí)，細(xì)胞凋亡水平受到減弱或增強(qiáng)，這與上述的miRNAs對(duì)SCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡效果的影響一致。此外，miRNAs的特異性表達(dá)可通過調(diào)節(jié)SCI后的蛋白表達(dá)而參與SCI后神經(jīng)功能恢復(fù)過程[5-6]。我們的研究結(jié)果也證明了miR-301a-3p可上調(diào)神經(jīng)軸突相關(guān)蛋白Gap-43和NF-200的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。SNX27作為SNXs蛋白家族成員之一，是一種重要的分選蛋白，可以將包括受體在內(nèi)被內(nèi)吞的膜表面蛋白重新送回細(xì)胞膜。SNX27的缺失會(huì)造成神經(jīng)病理改變，導(dǎo)致多種神經(jīng)性疾病的發(fā)生。有研究表明，SNX27缺失會(huì)影響突觸受體循環(huán)過程，而過表達(dá)SNX27能夠提高小鼠的突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶能力，且未出現(xiàn)癲癇表型。SNX27表達(dá)下調(diào)會(huì)造成唐氏綜合征疾病，導(dǎo)致患者的認(rèn)知功能發(fā)生障礙。SNX27缺失可促進(jìn)神經(jīng)毒性蛋白β-淀粉樣蛋白(Aβ)的產(chǎn)生，從而導(dǎo)致阿爾茲海默癥的發(fā)生。此外，在小鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)結(jié)扎損傷模型中，SNX27表達(dá)量上調(diào)影響mGluR5上膜，進(jìn)而調(diào)控SCI后的神經(jīng)性疼痛。SNX27缺失能夠降低神經(jīng)元的凋亡水平，并抑制小膠質(zhì)細(xì)胞增殖與募集以減輕局部炎癥反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)SCI后功能恢復(fù)[10]。而SNX27在SCI后神經(jīng)功能恢復(fù)的機(jī)制尚未清楚。通過qPCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在大鼠脊髓損傷模型中，SNX27的表達(dá)水平上調(diào)；而干擾SNX27表達(dá)可以減弱由細(xì)胞損傷引起的細(xì)胞凋亡，并提高Gap-43和NF-200蛋白表達(dá)水平。這再次證明了SNX27對(duì)SCI后的神經(jīng)功能恢復(fù)起抑制作用。此外，過表達(dá)SNX27能夠拮抗由miR-301a-3p上調(diào)而造成的細(xì)胞凋亡減弱和軸突再生能力。此結(jié)果表明miR-301a-3p可通過靶向SNX27，抑制SNX27的表達(dá)，最終調(diào)控?fù)p傷神經(jīng)細(xì)胞的凋亡水平和軸突再生能力。

綜上所述，在大鼠SCI模型中，miR-301a-3p可以通過靶向抑制SNX27的表達(dá)，降低神經(jīng)細(xì)胞的凋亡水平，增強(qiáng)軸突再生能力，進(jìn)而促進(jìn)SCI后神經(jīng)功能恢復(fù)。

(本文圖1～圖6見封三)