周 雄 ，楊 明，李 翔*，張 婧*，劉 駿

1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330004

2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心，江西 南昌 330004

腫瘤微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，其相關(guān)的發(fā)病率和死亡率構(gòu)成了世界范圍內(nèi)非常重要的健康問題。腫瘤微環(huán)境是腫瘤發(fā)展中的積極參與者，表現(xiàn)出癌癥的多種標(biāo)志性特性，促進(jìn)血管生成和增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、紊亂生長(zhǎng)抑制因子以及其他功能失調(diào)[1-4]。

腫瘤微環(huán)境中涉及多種細(xì)胞類型，如腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（tumor-associated fibroblast，TAFs）、血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cell，VEC）、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophages，TAMs）、樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）、髓源性抑制細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）以及免疫和炎癥細(xì)胞，均對(duì)腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有著重要影響[5]。天然來源的中藥單體成分通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中不同的細(xì)胞及因子轉(zhuǎn)化來抑制腫瘤細(xì)胞的活性[6]。引入天然來源中藥活性成分，是一種新的可靠的治療方法，可利用它們的選擇性分子靶標(biāo)來治療不同類型的腫瘤。

1 對(duì)TAFs的調(diào)節(jié)

在腫瘤微環(huán)境中，成纖維細(xì)胞含量最多[7]。正常情況下，成纖維細(xì)胞處于未激活狀態(tài)，受損時(shí)可被激活并分化為肌成纖維細(xì)胞[8]。與響應(yīng)傷口而激活的肌成纖維細(xì)胞不同，TAFs是不可逆且組成性激活，其位于生長(zhǎng)中的腫瘤擴(kuò)張邊界附近，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且不受程序性細(xì)胞死亡的影響而持續(xù)保持活性，與多種癌癥類型的不良預(yù)后有關(guān)[9-10]。

1.1 上調(diào)脂肪組織中的mRNA和蛋白質(zhì)水平

脂肪組織和脂肪細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中具有重要作用，人脂肪組織的干細(xì)胞是TAFs的來源。鹽酸小檗堿的降血糖和調(diào)血脂作用能表明脂肪組織或脂肪細(xì)胞與腫瘤發(fā)生之間的關(guān)系，即鹽酸小檗堿可以上調(diào)脂肪組織中的mRNA和蛋白質(zhì)水平，包括過氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferatorsactivated receptors，PPARs）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶9（cyclin-dependent kinase，CDK9）和細(xì)胞周期蛋白T1（Cyclin T1）[6]。還可防止附睪脂肪組織的消耗，并改善結(jié)腸癌colon 26/20細(xì)胞移植小鼠和colon 26/20細(xì)胞的癌性惡病質(zhì)，并體現(xiàn)了對(duì)腫瘤微環(huán)境中脂肪組織的有益作用[11-14]。

1.2 降低TAFs的生物標(biāo)志物

TAFs的亞型-肌成纖維細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中尤為重要，它釋放的基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）促進(jìn)纖維間質(zhì)形成，這是晚期腫瘤的特征之一。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）能促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞表型變化、細(xì)胞外基質(zhì)翻轉(zhuǎn)以及生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，含TGF-β的癌細(xì)胞衍生的細(xì)胞外小泡通過上調(diào)成纖維細(xì)胞中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表達(dá)將成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞[15-16]。攜帶TGF-β的人卵巢癌EVs細(xì)胞能增加成纖維細(xì)胞α-SMA的表達(dá)，同時(shí)減少基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-2（tissue inhibitor of metalloproteinase-2，TIMP-2）的產(chǎn)生，進(jìn)而激活成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為TAFs，并增強(qiáng)其增殖、遷移、合成和分泌功能[17]。

水飛薊賓能降低單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）和TAFs的生物標(biāo)志物（成纖維細(xì)胞活化蛋白、α-SMA、TGF-β2、波形蛋白等），并顯著調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的募集從而達(dá)到改善腫瘤微環(huán)境的目的[10]。白藜蘆醇能抑制Cyclin D1、原癌基因、MMP-2、MMP-9和胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白的上調(diào)。白藜蘆醇抑制TAFs促進(jìn)的蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/Akt）信號(hào)通路和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer andactivatorof transcription，STAT3）的激活，從而抑制與人乳腺癌T74D細(xì)胞增殖相關(guān)的下游分子（CD44和Sox2）的表達(dá)[18]。

1.3 抑制Wnt16信號(hào)通路的表達(dá)

Wnt16是無翅型整合位點(diǎn)Wnt家族的成員，參與有絲分裂信號(hào)通路。通過基因敲除Wnt16，可抑制腫瘤細(xì)胞和TAFs之間的相互促進(jìn)作用，最終抑制腫瘤細(xì)胞介導(dǎo)的化療抗性[19]。在成纖維NIH3T3細(xì)胞、乳腺癌4T1細(xì)胞和結(jié)腸癌SW480細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞中，槲皮素能夠顯著抑制活化的成纖維細(xì)胞中Wnt16的表達(dá)以及降低腫瘤細(xì)胞獲得抵抗力和重建基質(zhì)的活性[20]。

1.4 抑制活性氧（reactive oxygen species，ROS）的生成

ROS在促結(jié)締組織增生中起重要作用。少量的ROS具有免疫防御作用，而過量的ROS可導(dǎo)致氧化應(yīng)激、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2，ERK1/2）途徑的激活、肌成纖維細(xì)胞的分化和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的異常合成，從而導(dǎo)致纖維化和腫瘤的形成[21-22]。葛根素能顯著提高超氧化物歧化酶的活性，阻斷脂質(zhì)的自動(dòng)氧化，并有效清除氧自由基。由于3′-羥基的存在，葛根素能清除ONOO-和總ROS，從而抑制TGF-β誘導(dǎo)纖維化[23]。

2 對(duì)TAMs的調(diào)節(jié)

巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中的重要組成部分，可分為經(jīng)典活化的M1型巨噬細(xì)胞和替代性活化的M2型巨噬細(xì)胞?；罨腗1型巨噬細(xì)胞介導(dǎo)機(jī)體獲得性免疫和腫瘤細(xì)胞的凋亡；而M2型可通過刺激腫瘤細(xì)胞增殖，抑制腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)基質(zhì)重塑以及腫瘤血管和淋巴血管形成等多個(gè)環(huán)節(jié)，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[24]。

2.1 上調(diào)免疫因子

研究利用小鼠全基因組寡核苷酸微陣列分析杜仲葉中提取的綠原酸給藥后雌性BALB/c小鼠肉瘤EMT-6細(xì)胞的基因表達(dá)水平，通過時(shí)間序列（timeseries）分析、基因本體論（gene ontology，GO）功能分析和信號(hào)通路（pathway）分析篩選差異表達(dá)基因，并進(jìn)行定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，RTqPCR）驗(yàn)證，結(jié)果表明參與免疫通路的應(yīng)答基因CaN、NFATC2、NFATC2ip和NFATC3被顯著上調(diào)，免疫因子如白細(xì)胞介素2受體（interleukin-2 receptor，IL-2R）和γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）的表達(dá)可以得到改善，從而促進(jìn)T細(xì)胞、TAMs和自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK）細(xì)胞的活化和增殖，從而增強(qiáng)它們的監(jiān)視和殺傷能力，進(jìn)一步抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速率[25]。

2.2 抑制CD163

通過評(píng)估M2型巨噬細(xì)胞獨(dú)特標(biāo)記物CD163的表達(dá)，研究洋蔥素A對(duì)IL-10誘導(dǎo)的M2型TAMs活化的毒性作用，洋蔥素A 10、30 μmol/L顯著抑制CD163的表達(dá)，抑制TAMs的活性，從而抑制腫瘤的發(fā)展[26-27]。

2.3 降低STAT6磷酸化和轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ表達(dá)

STAT是一種能與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)家族。含有SH2和SH3結(jié)構(gòu)域，可與特定的含磷酸化酪氨酸的肽段結(jié)合。當(dāng)STAT被磷酸化，發(fā)生聚合成為同源或異源二聚體形式的活化的轉(zhuǎn)錄激活因子，進(jìn)入胞核內(nèi)與靶基因啟動(dòng)子序列的特定位點(diǎn)結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄。從大黃中提取的大黃素可能通過降低STAT6磷酸化和C/EBPβ表達(dá)來抑制肺中TAMs募集和M2極化，從而抑制4T1細(xì)胞、乳腺癌EO771細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移[28]。

木犀草素能阻斷STAT6的磷酸化，并降低M2相關(guān)基因的表達(dá)，并以趨化因子配體2（chemokine ligand 2，CCL2）依賴的方式減少了肺癌Lewis細(xì)胞的遷移，通過抑制巨噬細(xì)胞分泌的CCL2，實(shí)現(xiàn)對(duì)單核細(xì)胞募集和癌癥遷移的抑制作用，該機(jī)制可成為一種治療惡性腫瘤的新思路[29]，抑制巨噬細(xì)胞中的c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminal kinase，JNK）信號(hào)，同時(shí)激活癌細(xì)胞中的這種激酶，抑制TAMs的表達(dá)[30]。

2.4 降低趨化因子受體2（chemokine receptors 2，CCR2）的表達(dá)

CCR2是在穩(wěn)態(tài)和炎癥條件下參與調(diào)節(jié)單核細(xì)胞遷移的最重要的趨化因子受體。水飛薊賓可降低荷瘤動(dòng)物骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的CCR2表達(dá)，并通過對(duì)4T1荷瘤小鼠腫瘤微環(huán)境的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中IL-10的測(cè)定，證明水飛薊賓可導(dǎo)致巨噬細(xì)胞免疫極化偏離M1表型[31]。水飛薊賓能降低p65 NF-κB（ser276，38%；P＜0.01）和STAT-3（ser727，16%；P＜0.01）在腫瘤細(xì)胞中的磷酸化，并且減少肺巨噬細(xì)胞數(shù)量，同時(shí)在肺癌A549細(xì)胞中能減少巨噬細(xì)胞向荷瘤肺的浸潤(rùn)，抑制其新生血管生成[32]。

2.5 抑制IL-6的產(chǎn)生

IL-6是多功能的細(xì)胞因子，TAMs、T細(xì)胞、TAFs及若干腫瘤細(xì)胞等都可產(chǎn)生IL-6，它對(duì)生物體的分化、代謝、增殖和凋亡等各項(xiàng)生理活動(dòng)過程都具有調(diào)控作用。IL-6的高表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致正常的組織形態(tài)出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在氧化偶氮甲烷和葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)腸炎相關(guān)腫瘤發(fā)生的小鼠模型中研究發(fā)現(xiàn)，從甘草中提取的異甘草素可通過抑制巨噬細(xì)胞中前列腺素E2（prostaglandin E2，PEG2）和IL-6的產(chǎn)生來阻斷M2巨噬細(xì)胞極化來調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)展[33]。

2.6 上調(diào)一氧化氮（nitric oxide，NO）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（induced nitricoxide synthase，iNOS）表達(dá)

從地黃中提取的秦皮乙素通過上調(diào)鼠類的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中NO和iNOS表達(dá)，增加巨噬細(xì)胞體內(nèi)遷移及吞噬功能，誘導(dǎo)脾LAK細(xì)胞活性，從而調(diào)節(jié)小鼠的免疫功能[34]，亦可抑制STAT3磷酸化，降低M2巨噬細(xì)胞分化中IL-10、MCP-1和TGFβ1表達(dá)以增強(qiáng)抗骨肉瘤LM8細(xì)胞的活性，其機(jī)制與M2巨噬細(xì)胞分化對(duì)TAMs的調(diào)節(jié)激活有關(guān)[35]。

2.7 其他作用機(jī)制

白藜蘆醇通過降低人單核巨噬細(xì)胞的M2極化來促進(jìn)抗腫瘤作用。當(dāng)白藜蘆醇和腫瘤條件培養(yǎng)基聯(lián)合治療高遷移率族蛋白時(shí)，與僅用中藥治療組相比，作為M2表型標(biāo)記之一的IL-10的分泌、癌細(xì)胞中STAT3的活化和腫瘤生長(zhǎng)都顯著降低[36]。地榆皂苷I/II通過脾中的淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌增加和TAMAs吞噬能力的激活來刺激免疫系統(tǒng)[37]。

研究顯示，從柴胡中提取的柴胡皂苷A和柴胡皂苷D具有獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)功能，通過誘發(fā)巨噬細(xì)胞聚集、游走、吞噬，刺激B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[38-39]。柴胡皂苷D還可通過提高巨噬細(xì)胞的擴(kuò)散能力和酸性磷酸酶的活性，增強(qiáng)體內(nèi)免疫細(xì)胞的功能發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，還可促進(jìn)IL-2的產(chǎn)生及其受體的表達(dá)[40]。然而，研究顯示柴胡皂苷A 50 μmol/L可抑制磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/Akt，從而抑制T淋巴細(xì)胞的增殖與活化，最終抑制T細(xì)胞發(fā)揮免疫功能[41]，亦有研究表明柴胡皂苷A對(duì)動(dòng)物的胸腺有一定的抑制作用，可使機(jī)體的免疫功能下降[42]。

3 對(duì)T細(xì)胞和NK細(xì)胞的調(diào)節(jié)

T細(xì)胞主要分為CD8+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞又包括Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等。惡性腫瘤細(xì)胞能分泌免疫抑制因子，促使CD4+T淋巴細(xì)胞減少，CD8+T淋巴細(xì)胞增多，CD4+/CD8+下降[43]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，多種中藥都能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖與分化，改善CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例，提高機(jī)體抗腫瘤的能力。NK細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，不僅與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識(shí)別靶細(xì)胞、殺傷介質(zhì)。

3.1 抑制IL-12 p70的產(chǎn)生

IL-12 p70作用于NK細(xì)胞和T細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生、增殖和細(xì)胞毒活性的增加，并發(fā)揮重要的促炎功能。花旗松苷1～100 mmol/L能顯著抑制細(xì)胞因子IL-12 p70的分泌，并阻斷DCs對(duì)脂多糖和脂磷壁酸的作用，從而抑制DCs介導(dǎo)的免疫反應(yīng)[44]。

3.2 抑制MCP-1的表達(dá)

雖然腫瘤或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞含有高表達(dá)的趨化因子MCP-1，但在體外生長(zhǎng)活性并無明顯差異，而動(dòng)物體內(nèi)的成瘤實(shí)驗(yàn)卻證實(shí)成瘤能力明顯下降或消失，腫瘤生長(zhǎng)緩慢，而浸潤(rùn)細(xì)胞數(shù)量可增加2倍以上[45]。單核細(xì)胞的浸潤(rùn)過程可被中和MCP-1的抗體阻斷，這就導(dǎo)致了腫瘤的形成和生長(zhǎng)速度的加快。水飛薊賓治療的TRAMP小鼠藥效實(shí)驗(yàn)表明其能抑制前列腺腫瘤中MCP-1的表達(dá)，從而增強(qiáng)NK細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞的免疫監(jiān)視功能[10]，還能增加腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞，延緩腫瘤生長(zhǎng)和減少骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的積累，增加T細(xì)胞的含量[31]。

3.3 增強(qiáng)IL-2和IFN-γ的分泌

IL-2是重要的免疫調(diào)節(jié)因子之一，能誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖、分化；可激活NK細(xì)胞提高其活性；能增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性；能激活腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞，促進(jìn)其分泌細(xì)胞因子、表達(dá)對(duì)應(yīng)受體；此外IL-2還能誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）、IFN、細(xì)胞集落刺激因子，通過協(xié)同作用加強(qiáng)NK細(xì)胞活性[46]。IFN-γ為Ⅱ型干擾素，主要由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生。研究證明IFN-γ具有抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，尤其是對(duì)乳腺癌的治療有著良好的作用。在BALB/c小鼠中，從穿心蓮中提取的穿心蓮內(nèi)酯通過促進(jìn)T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖來增強(qiáng)IL-2和IFN-γ的分泌，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)[47]。

3.4 H2O2和Ca2+選擇性積累

一些研究已經(jīng)揭示了在惡性T細(xì)胞中用漢黃芩素治療后產(chǎn)生H2O2和Ca2+超載作為抗腫瘤機(jī)制，與正常細(xì)胞相比，惡性淋巴細(xì)胞產(chǎn)生更高水平的超氧自由基，而漢黃芩素具有將超氧自由基轉(zhuǎn)化為H2O2的能力，導(dǎo)致H2O2在惡性T細(xì)胞而不是正常T細(xì)胞中選擇性積累，從而在惡性細(xì)胞中選擇性誘導(dǎo)凋亡[48]。

3.5 其他作用機(jī)制

T細(xì)胞增殖：體外實(shí)驗(yàn)證明鹽酸小檗堿10～20 μg/mL可輕微增加T細(xì)胞對(duì)抗原的增殖反應(yīng)，而質(zhì)量濃度超過該水平會(huì)導(dǎo)致劑量相關(guān)性免疫抑制[49]；抑制免疫逃逸：兒茶素阻斷IFN-γ激活的兩面神激酶-蛋白激酶C-delta-STAT1通路，抑制吲哚胺2,3-雙加氧酶（indoleamine 2,3-dioxy-genase，IDO）表達(dá)，糾正癌細(xì)胞免疫逃逸；改善免疫抑制環(huán)境：槲皮素可顯著降低免疫抑制的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和MDSCs，并且增加DCs上共刺激信號(hào)（MHC Ⅱ類和CD86）的水平，表明這些DCs已成熟并被激活，可促進(jìn)抗腫瘤T細(xì)胞活性和誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌，如IL-12、IFN-γ[50]。

白藜蘆醇下調(diào)癌細(xì)胞的PI3K/Akt/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶通路（mammalian target of rapamycin，mTOR）[51-52]。抑制PI3K途徑可激活CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性，增強(qiáng)抗癌免疫[53]。白藜蘆醇能夠激活免疫細(xì)胞，選擇性地誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在實(shí)體瘤中大量存在，在調(diào)節(jié)免疫腫瘤微環(huán)境的穩(wěn)態(tài)中起著關(guān)鍵作用，腫瘤微環(huán)境中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量的增加與患者的生存結(jié)果呈負(fù)相關(guān)[54]。

4 對(duì)DCs的調(diào)節(jié)

腫瘤微環(huán)境中的腫瘤浸潤(rùn)性DCs為不成熟的DCs，可以誘導(dǎo)免疫抑制，具有抗原呈遞功能紊亂、抑制細(xì)胞的內(nèi)吞噬、異?；顒?dòng)等特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)中藥單體成分可通過不同機(jī)制促進(jìn)DCs成熟，調(diào)控DCs的抗原呈遞功能和抗腫瘤活性。

4.1 抑制IL-12和TNF-α

IL-12作用于NK細(xì)胞和T細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生、增殖和細(xì)胞毒活性的增加，并發(fā)揮重要的促炎功能。TNF-α在體內(nèi)外均可對(duì)一些腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞系起殺傷作用，大劑量TNF-α可引起惡病質(zhì)，患者呈進(jìn)行性消瘦，因而TNF-α又稱惡病質(zhì)素。從水飛薊中提取的花旗素苷能顯著抑制IL-12和TNFα的產(chǎn)生，從而對(duì)DCs介導(dǎo)的免疫反應(yīng)發(fā)揮抑制作用[44]。水飛薊賓通過抑制p38蛋白激酶、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶和JNK，對(duì)小鼠骨髓DCs的表型和功能成熟產(chǎn)生抑制作用，其介導(dǎo)的抑制脂多糖刺激的CD11c+DCs產(chǎn)生IL-12也可能有助于誘導(dǎo)免疫抑制狀態(tài)[55]。在體外和體內(nèi)條件下均證明水飛薊賓是DCs成熟的有效抑制劑。

4.2 增加共刺激信號(hào)水平

共刺激分子具有激活T細(xì)胞、賦予T細(xì)胞活化的第二信號(hào)，并且參與Th細(xì)胞極化的作用。槲皮素和丙氨酸內(nèi)酯聯(lián)合使用誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡釋放的高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1，HMGB1）和鈣網(wǎng)蛋白來激活DCs，并且極大地增加DCs上共刺激信號(hào)（MHC II類和CD86）的水平，從而促進(jìn)DCs成熟并激活，增加CD4+/CD8+T細(xì)胞數(shù)量[50]。

5 對(duì)MDSCs的調(diào)節(jié)

MDSCs是骨髓來源的異質(zhì)性細(xì)胞群，主要是由TAMs、中性粒細(xì)胞和DCs等不成熟的前體細(xì)胞構(gòu)成，具有很強(qiáng)的免疫抑制作用，其在腫瘤微環(huán)境中大量存在，是引起腫瘤免疫逃逸的重要細(xì)胞群體[56]。MDSCs在血液中增加，并在腫瘤攜帶動(dòng)物的腫瘤微環(huán)境中積累，導(dǎo)致癌癥中的免疫抑制。研究表明在小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞模型中，水飛薊賓能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，瘤內(nèi)細(xì)胞生化指標(biāo)測(cè)定顯示，水飛薊賓能降低CCR2在腫瘤浸潤(rùn)MDSCs中的表達(dá)，對(duì)脾MDSCs中的CCR2表達(dá)無影響，因此推測(cè)水飛薊賓通過減少M(fèi)DSCs的腫瘤趨向性，從而抑制4T1細(xì)胞的生長(zhǎng)[31]。

6 對(duì)VEC的調(diào)節(jié)

血管生成即新血管的形成，在腫瘤發(fā)展的早期是必需的，它對(duì)腫瘤的擴(kuò)張、發(fā)展和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要。血管生成是一個(gè)復(fù)雜的過程，涉及基底膜的降解、內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)基質(zhì)的侵入、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移并組織成毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)[57]。

6.1 減少血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的分泌

VEGF在血管的形成以及在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用。VEGF是癌癥血管生成的關(guān)鍵介質(zhì)，它刺激新血管的生長(zhǎng)，并使腫瘤獲得生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，是正常和異常血管生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[58-59]。兒茶素[60]、苦參堿[61]和氧化苦參堿[62]、白藜蘆醇[63]、水飛薊賓[64-65]、齊墩果酸[66]、熊果酸[67]、鞣花酸[68]、漢黃芩苷[69]、紫草素[70]、柴胡皂苷D[71]、秦皮乙素[35]和積雪草酸[72]等單體成分通過降低VEGFα的RNA和蛋白表達(dá)，以及抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體/c-Met基因等途徑抑制VEGF的表達(dá)，從而抑制多種腫瘤細(xì)胞的血管生成。

6.2 抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路

PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路參與多種細(xì)胞生物學(xué)過程，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、代謝和血管生成以及凋亡[73-74]。近來有研究表明綠原酸[75]、大黃素[76]、苦參堿[77]、漢黃芩素[48]和芹菜素[78]等單體成分能夠負(fù)向調(diào)節(jié)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，在多種水平上抑制VEC的增殖和遷移，并抑制血管的生成。

6.3 抑制MMP-1、MMP-2和MMP-9的表達(dá)

MMPs具有降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)的作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[79]。研究發(fā)現(xiàn)，鹽酸小檗堿[80]、大黃素[76,81]、水飛薊賓[65]、槲皮素[82]、木犀草素[30,83]、穿心蓮內(nèi)酯[47]和氧化苦參堿[62]等中藥單體成分能夠下調(diào)MMP-1、MMP-2和MMP-9的表達(dá)來抑制VEC的活性，降低微血管密度。

6.4 其他作用機(jī)制

癌細(xì)胞中IL-8的過表達(dá)會(huì)促進(jìn)血管生成，小檗堿通過抑制p38蛋白激酶、ERK1/2和JNK信號(hào)通路，在體外和體內(nèi)均顯著降低胃腺癌MGC 803細(xì)胞中IL-8的分泌，從而抑制新生血管的生成[84]。從桃兒七的根和根莖中提取的鬼臼毒素通過破壞細(xì)胞內(nèi)微管的穩(wěn)定性而顯著抑制各種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[85]。從黃連中提取的藥根堿在體內(nèi)和體外抑制了黑色素瘤C8161細(xì)胞中血管內(nèi)皮鈣黏蛋白基因的表達(dá)，從而抑制血管生成，血管內(nèi)皮鈣黏蛋白是腫瘤血管生成擬態(tài)和血管生成的關(guān)鍵蛋白[86]。

天然來源中藥單體成分對(duì)腫瘤微環(huán)境組成細(xì)胞的作用機(jī)制見表1。

表1 天然來源中藥單體成分對(duì)腫瘤微環(huán)境組成細(xì)胞的作用機(jī)制Table 1 Mechanism of natural Chinese medicine monomer components on tumor microenvironment cells

續(xù)表1

續(xù)表1

7 結(jié)語(yǔ)

目前通過中藥單體成分對(duì)腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)來抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展受到越來越多的關(guān)注。不同的中藥單體成分具有多種生物學(xué)功能，直接或間接地影響腫瘤微環(huán)境細(xì)胞，大量的體外實(shí)驗(yàn)證明中藥單體為改善腫瘤免疫及非免疫微環(huán)境提供了多種治療選擇，隨著中藥單體成分以及腫瘤免疫學(xué)等相關(guān)的研究越來越成熟，腫瘤微環(huán)境中的各種相關(guān)組分可能會(huì)成為未來中藥治療腫瘤的新靶點(diǎn)。

盡管如此，中藥單體成分在改善腫瘤微環(huán)境研究中仍處于初級(jí)起步階段，存在以下問題：（1）作用機(jī)制有待深入研究。有效單體組分抗腫瘤的作用機(jī)制需要更深入、全面的研究，特別是其在中藥成分結(jié)構(gòu)分類與藥理作用相關(guān)性、亞細(xì)胞水平的作用靶點(diǎn)、對(duì)免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)通路[50]等方面；（2）中藥配伍優(yōu)勢(shì)有待開發(fā)。中藥藥效的發(fā)揮，最大的優(yōu)勢(shì)在于多成分、多靶點(diǎn)的協(xié)同作用，然而目前中藥單體的研究大多針對(duì)一種成分或該成分與化療藥物聯(lián)用進(jìn)行研究，不能充分體現(xiàn)在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下的藥物配伍優(yōu)勢(shì)，因此不能充分體現(xiàn)單體成分相較于常規(guī)化療藥物的優(yōu)勢(shì)；（3）成藥性有待解決。中藥單體成分具有成藥性差（難溶性、膜滲透性低、治療窗窄、穩(wěn)定性差）、藥動(dòng)學(xué)行為不理想（生物利用度低、半衰期短、清除率高）等不足，以上問題嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用[88]；（4）靶向納米制劑有待開發(fā)。靶向納米制劑具有提高腫瘤部位藥物聚集、降低正常組織藥物分布，有效靶向至組織、細(xì)胞、細(xì)胞器的功能[89-90]，中藥單一或多成分協(xié)同包載的靶向納米制劑的開發(fā)有利于進(jìn)一步提高減毒增效的生物學(xué)效應(yīng)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突