張 寧，陸 安，田 勇，楊 威，趙志強(qiáng)，李 茜，魏忠華，李杰峰

（1.河北省畜牧獸醫(yī)研究所 071000；2.石家莊市金元康牧藥業(yè)有限公司 051130）

雞脂肪肝綜合征是產(chǎn)蛋雞比較容易發(fā)生的一種營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病，因?yàn)榇瞬“橛懈闻K出血癥狀，所以1972 年Wolford 等人又將其改為脂肪肝出血綜合征[1]。該病多數(shù)發(fā)生于籠養(yǎng)蛋雞，過肥的肉用雞也時(shí)有發(fā)生，雞的品種和飼料的組分不同發(fā)病率也不同。該病主要是由于飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過剩造成的，也可能是飼料中微量元素缺乏導(dǎo)致的。當(dāng)?shù)半u攝入的日糧為高能量低蛋白時(shí)，多余的能量就會(huì)轉(zhuǎn)化為脂肪貯存在體內(nèi)，特別是肝臟部位。這些脂肪如果不能被及時(shí)運(yùn)出就會(huì)導(dǎo)致肝臟內(nèi)脂肪堆積，使得雞出現(xiàn)脂肪肝[2]。此外，蛋雞飼料中缺乏營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也會(huì)引起脂肪肝。脂蛋白是將脂肪運(yùn)出肝臟的輔助物質(zhì)，日糧中缺乏合成脂蛋白的物質(zhì)，如：維生素E、B 族維生素、膽堿、蛋氨酸等，就會(huì)造成肝臟中脂肪無法被運(yùn)出，使其大量堆積于肝中，從而產(chǎn)生脂肪肝[3]。通常雞群發(fā)病率的1%～2%，有的高達(dá)5%～7%，甚至15%以上。死亡率一般低于5%，但有時(shí)高達(dá)20%[4]。雞脂肪肝綜合征還引起雞的產(chǎn)蛋率下降，從而給蛋雞養(yǎng)殖戶帶來極大經(jīng)濟(jì)損失。

2020 年4 月，河北某養(yǎng)殖場(chǎng)140 日齡蛋雞已進(jìn)入產(chǎn)蛋期，突然有少數(shù)雞出現(xiàn)死亡，隨后死亡雞數(shù)目逐漸增多，從體形上發(fā)現(xiàn)病雞腹部膨大、下垂，用手觸摸感覺到很柔軟，剖檢后可見整個(gè)腹腔被脂肪包圍，肝臟與胸腔粘連，肝臟腫大，肝臟內(nèi)還含有許多白色小結(jié)節(jié)，胸腔出現(xiàn)大量血凝塊，卵黃被膜充血。為進(jìn)一步確診，采取病死雞的肝臟組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診為脂肪肝綜合征。

1 材料與方法

1.1 病料來源

病料來源于河北某蛋雞場(chǎng)140 日齡蛋雞，無菌采集病死雞肝臟，放入10mL 環(huán)保組織固定液和30mL 95%乙醇混合液中備用，同時(shí)無菌采集心臟、肺臟、脾臟等組織凍存待病原學(xué)檢測(cè)。

1.2 主要試劑

血液/細(xì)胞/組織基因組DNA 提取試劑盒（離心柱型）購自北京天根生化科技有限公司；TRNzol Universal 試劑購自北京天根生化科技有限公司；氯仿、異丙醇、乙醇購自天津市鼎盛鑫化工有限公司；Fast Quant RT Kit（With gDNase）cDNA 第一鏈合成試劑盒購自北京天根生化科技有限公司；RNase-Free dd H2O 購自北京天根生化科技有限公司；TaqMan 熒光定量試劑盒，購自北京天根生化科技有限公司；油紅O 染色液，購自湖北百奧斯生物科技有限公司。

1.3 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

無菌剪開肝臟、肺臟等組織，做細(xì)菌涂片，革蘭氏染色后鏡檢，觀察細(xì)菌菌體。

1.4 油紅O 染色

將采集的放入10mL 環(huán)保組織固定液和30mL 95%乙醇混合液中的肝臟組織，制作成冰凍切片，取冰凍切片，先用蒸餾水洗；用玻璃鉤吧切片撈入60%異丙醇中漂洗20～30s；油紅O 貯備液6mL，加蒸餾水4mL，混合后靜置10min，即可用來染色，油紅O 染色時(shí)間5～10min；60%異丙醇稍洗去多余染液，蒸餾水洗；Mayer 蘇木素淺染核1min；1%鹽酸水稍分化；水漂洗10min，用濾紙將切片周圍水分抹干；阿拉伯糖膠封蓋，顯微鏡檢查。

1.5 病毒熒光定量PCR 檢測(cè)

將采集的肝臟、肺臟、脾臟等組織混合研磨，提取組織DNA 和RNA，檢測(cè)雞白血病病毒、雞傳染性貧血病毒、禽腺病毒4 型、禽呼腸孤病毒等病原。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床診斷及剖檢變化

病雞雞冠、肉髯變淡，腹部膨大、下垂，用手觸摸感覺很柔軟，剖開后發(fā)現(xiàn)整個(gè)腹腔被脂肪包圍，肝臟與胸腔粘連，肝臟腫大，邊緣鈍圓，質(zhì)地較脆，很容易破裂，表面有一種油膩感，且肝臟內(nèi)含有許多白色小結(jié)節(jié)，胸腔出現(xiàn)大量血凝塊，卵黃被膜充血。根據(jù)臨床癥狀和剖檢變化初步診斷為雞脂肪肝綜合征。

2.2 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

經(jīng)組織涂片和染色鏡檢，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌菌體。

2.3 油紅O 染色

病理學(xué)鏡檢下可見肝細(xì)胞的胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不等的脂滴，小的脂滴互相融合成較大的脂滴，細(xì)胞核常常被擠到一側(cè)，經(jīng)油紅O 染色可見細(xì)胞內(nèi)的脂肪滴被染成橙色，細(xì)胞核被染成藍(lán)色，證實(shí)為脂肪變性。（見圖1）

圖1 油紅O 染色

2.4 熒光定量PCR 檢測(cè)

熒光定量PCR 結(jié)果顯示，從剖檢的雞組織中檢測(cè)出雞傳染性貧血病毒，其他病毒未檢出。

3 討論

雞脂肪肝綜合征是由營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境、激素、遺傳等因素引起的，因體內(nèi)脂肪代謝紊亂而使得肝臟脂肪堆積的一種營(yíng)養(yǎng)代謝性疾病。脂肪肝綜合征的癥狀不像雞疫病那樣有比較明顯的臨床特征，因此，常被人們忽視，但隨著集約化等高效規(guī)模養(yǎng)殖方式的推廣，蛋雞脂肪肝已經(jīng)普遍存在，患雞最初無明顯癥狀，且與雞疫病相比死亡率不高[5]，但是此病可造成產(chǎn)蛋率下降，給養(yǎng)殖戶帶來較大經(jīng)濟(jì)損失。

通過熒光定量PCR 檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該雞場(chǎng)具有雞傳染性貧血，雞傳染性貧血是雞的一種免疫抑制性疾病，是傳染性貧血病毒引起的。該病毒的易感性隨著雞日齡的增長(zhǎng)而下降，自然發(fā)病多見于2～4 周齡雞，公雞比母雞易感染，肉雞比蛋雞易感染，該病主要的傳播方式是垂直傳播[6]，根據(jù)雞場(chǎng)臨床癥狀和剖檢變化，未發(fā)現(xiàn)雞傳染性貧血的典型癥狀和病理變化，因此該病毒判斷為隱性感染。根據(jù)病原學(xué)檢測(cè)、臨床癥狀、剖檢變化、鏡檢觀察綜合分析，綜合考慮確診該養(yǎng)殖場(chǎng)為雞脂肪肝綜合征。

在實(shí)際生產(chǎn)中，過多的能量飼料、不平衡的能量和蛋白、飼料霉變是導(dǎo)致脂肪肝綜合征發(fā)生的主要原因。要根據(jù)蛋雞的品種合理搭配日糧的營(yíng)養(yǎng)成分，并停止飼喂發(fā)病前的飼料。當(dāng)?shù)半u出現(xiàn)產(chǎn)蛋率下降了，可以添加膽堿1kg 拌料1000kg，同時(shí)添加維生素C 純粉1g 拌7.5kg 料。當(dāng)雞群中出現(xiàn)了死亡，可以在飼料中添加肝泰樂，每只雞1g 拌料，最好用開水煮30min后放涼，渣子和藥液一起拌料。本次檢測(cè)結(jié)果為養(yǎng)殖戶確診和防治雞脂肪肝綜合征提供了依據(jù)。