云洪巖

摘要：目的：探討p53、KRAS在肺腺癌患者中的表達(dá)及意義。方法：選擇2018年5月-2020年12月肺腺癌患者45例作為對(duì)象，所有患者均行手術(shù)治療，取病灶組織及癌旁組織（距離病灶≥3cm）。采用二代測(cè)序技術(shù)測(cè)定患者KRAS突變基因;采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定患者p53蛋白表達(dá)。結(jié)果：45例肺腺癌患者均完成基因突變測(cè)定，結(jié)果表明：28例發(fā)生基因突變，突變率為62.22%?；蛲蛔冾愋团旁谇叭环謩e為：EGFR、P53和KRAS，分別占：36.36%、22.73%和18.18%;肺腺癌患者病灶組織中p53高于癌旁組織（P<0.05）。結(jié)論：肺腺癌患者基因中存在多種基因突變和共突變，且患者常伴有p53、KRAS表達(dá)異常，能為臨床診療提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：肺腺癌;基因突變;基因譜;KRAS;二代測(cè)序技術(shù);免疫組織化學(xué)法

肺腺癌屬于肺癌的一種，是非小細(xì)胞肺癌。但是，肺腺癌不同于鱗狀細(xì)胞肺癌，更容易發(fā)生在女性、不吸煙人群中[1]。目前，臨床上對(duì)于肺腺癌發(fā)病機(jī)制尚未闡明，普遍認(rèn)為與吸煙、電離輻射及多環(huán)形方向化合物有關(guān)，發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，導(dǎo)致臨床診療難度較大。既往研究表明：肺腺癌的發(fā)生與多種因素有關(guān)，而基因改變的遺傳多樣性及易感性在疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。P53作為重要的抑癌基因，在誘導(dǎo)細(xì)胞周期捕獲、凋亡與DNA修復(fù)等多種生理功能中發(fā)揮了重要作用。鼠類肉瘤病毒癌基因（KRAS）屬于原癌基因RAS家族成員之一，是表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）信號(hào)通路下游重要調(diào)節(jié)位點(diǎn)，能直接參與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖與分化的調(diào)節(jié)[2]。因此，本研究以肺腺癌患者為對(duì)象，探討肺腺癌基因譜及p53、KRAS的表達(dá)及意義，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1臨床資料

選擇2018年5月-2020年12月肺腺癌患者45例作為對(duì)象，男26例，女19例，年齡（43-75）歲，平均（58.95±6.49）歲;腫瘤直徑（1-6）cm，平均（3.23±0.61）cm;TNM分期：I-II期31例，III-IV期14例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：是21例，否24例;分化程度：高分化18例，中分化20例，低分化7例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合肺腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)病理組織檢查確診;（2）均能完成腺癌基因譜及p53、KRAS檢查，且患者均可耐受;（3）具有完整的基線及隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）精神異常、認(rèn)知功能異?；蚱髻|(zhì)性疾病者;（2）伴有自身免疫系統(tǒng)疾病、行放化療治療者。

1.2 方法

1.2.1 肺腺癌基因譜

采用二代測(cè)序法測(cè)定不同組織中KRAS基因突變位點(diǎn)，具體方法如下。試劑盒購(gòu)置于Illumina提供的人類肺癌相關(guān)26個(gè)基因突變檢測(cè)試劑盒。KRAS基因檢測(cè)位點(diǎn)主要檢測(cè)外顯子2號(hào)12個(gè)密碼子的16個(gè)不同的基因位點(diǎn)，并完成位于13密碼子的1個(gè)突變位點(diǎn)，分析兩種不同組織中KRAS基因突變情況。

1.2.2 P53蛋白

采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定不同組織中P53蛋白表達(dá)水平，具體方法如下：將制備并獲得的標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)石蠟切片，常規(guī)脫蠟、水化后給予抗原進(jìn)行熱修復(fù)處理，去除內(nèi)源性生物酶后、染色。P53工作液，常規(guī)采用DAB液（購(gòu)自于基因科技有限公司）顯色后，采用自來(lái)水進(jìn)行沖洗，終止反應(yīng)后進(jìn)行蘇木精1min染色，并利用鹽酸乙醇分化。上述操作完畢后進(jìn)行再?zèng)_洗、返藍(lán)。梯度乙醇對(duì)標(biāo)本脫水后再二甲苯的輔助作用下處理，中性樹(shù)膠封固（免疫組化測(cè)定時(shí)，以鹽酸鹽緩沖液作為一抗陰性對(duì)照，利用已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照）在400倍顯微鏡下對(duì)不同標(biāo)本切片隨機(jī)取5個(gè)視野，每個(gè)視野選擇細(xì)胞200個(gè)計(jì)數(shù)。②判定方法。不同組織測(cè)定完畢后，采用半定量方法進(jìn)行測(cè)定及判斷。0分：陽(yáng)性細(xì)胞占0%-10%;1分：陽(yáng)性細(xì)胞占10.0%-25.0%;2分：陽(yáng)性細(xì)胞占25%-50.0%;3分：陽(yáng)性細(xì)胞占50.0%-75.0%;4分陽(yáng)性細(xì)胞>75.0%。對(duì)于得分>3分視為陽(yáng)性[3]。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS24.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用n（%）表示，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用（ ）表示，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 肺腺癌患者基因突變類型及構(gòu)成比

45例肺腺癌患者均完成基因突變測(cè)定，結(jié)果表明：28例發(fā)生基因突變，突變率為62.22%?；蛲蛔冾愋团旁谇叭环謩e為：EGFR、P53和KRAS，分別占：36.36%、22.73%和18.18%，見(jiàn)表1。

2.2 肺腺癌患者不同組織中p53蛋白陽(yáng)性率比較

肺腺癌患者病灶組織中p53蛋白陽(yáng)性率均高于癌旁組織（P<0.05），見(jiàn)表2。

3 討論

本研究中采用二代測(cè)序法對(duì)肺腺癌患者完成基因譜分析，結(jié)果表明：基因突變類型排在前三位分別為：EGFR、P53和KRAS，分別占：36.36%、22.73%和18.18%。EGFR基因突變主要集中在19和21號(hào)外顯子上，突變率較高，可發(fā)生共突變。而KRAS基因突變主要集中在2號(hào)外顯子上。而p53基因突變多集中在4-8號(hào)外顯子上。本研究中，肺腺癌患者病灶組織中p53、KRAS蛋白陽(yáng)性率均高于癌旁組織（P<0.05），說(shuō)明p53、KRAS蛋白在肺腺癌患者中表達(dá)異常。因此，臨床上肺腺癌患者應(yīng)加強(qiáng)基因突變、p53、KRAS蛋白測(cè)定，評(píng)估患者預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述，肺腺癌患者基因中存在多種基因突變和共突變，且患者常伴有p53、KRAS蛋白表達(dá)異常，能為臨床診療提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]柴榮，范銀星，趙家義，等.非小細(xì)胞肺癌中KRAS基因突變與PD-1/PD-L1信號(hào)通路相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].國(guó)際呼吸雜志，2019，39（23）：1822-1826.

[2]陳瓏，王琳，何冬雷，等.T790M基因突變陽(yáng)性的肺腺癌并骨轉(zhuǎn)移患者個(gè)體化治療遠(yuǎn)期療效及預(yù)后的相關(guān)因素分析[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2019，26（2）：200-205.

[3]鄭瑞鋒，文海英，羅俊波，等.非小細(xì)胞肺癌Kras基因突變相關(guān)因素及其與一線同步放化療療效相關(guān)性研究[J].中華腫瘤防治雜志，2020，27（5）：47-52.

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