周 輝，焦文學，葉芳紅，王 潔

（甘肅省隴南市第一人民醫(yī)院，甘肅 隴南 746000）

丙型肝炎病毒（HCV）是一種通過血液或者體液進行傳播的傳染性病毒，發(fā)病癥狀不明顯，如果診斷不及時會嚴重影響患者的肝臟功能，導致肝臟部分組織出現(xiàn)炎癥或者纖維化的現(xiàn)象，最終發(fā)展為肝硬化和肝癌[1]。目前，臨床上已經(jīng)將HCV 歸類為損傷肝臟功能重要因素之一。通過對HCV 進行深入研究，發(fā)現(xiàn)HCV 基因型和患者病情發(fā)展、臨床癥狀、藥物敏感度、傳播方式等都有著較為緊密的關系[2]。有報道稱基因分型的不同會增加肝硬化或者肝癌的發(fā)生概率，基因型和血清抗體相遇后所產(chǎn)生的反應也有所差異[3]。HCV 基因型可以成為制定治療方案的主要標準，且可以讓醫(yī)生更加清晰地了解HCV 傳播途徑，對于HCV 的治療和預防都有著重要的意義。隴南地區(qū)交通和經(jīng)濟發(fā)展均較為落后，人口在287 萬左右，隴南市中心血站及各縣級醫(yī)院，只能進行抗HCV 篩查，對HCV 基因型研究較少[4]。為了提高隴南地區(qū)HCV 治療效果和預后效果，選擇2013 年10 月—2015 年10 月隴南地區(qū)HCV患者作為研究樣本，具體研究內容如下。

1 資料與方法

1.1 基本資料

選擇2013 年10 月—2015 年10 月期間隴南市第一人民醫(yī)院所收治丙型肝炎患者共69 例作為研究對象，經(jīng)疾病診斷患者共32 例，年齡在34～82歲，平均年齡（68.34±3.42）歲，男15 例，女17 例。未經(jīng)疾病診斷患者37 例，均為男性，年齡在18～45歲，平均年齡（30.42±3.89）歲。經(jīng)比較，69 例患者基本資料無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 方法

提取HCV、RNA

（1）抑制物去除液（濃縮液）以及去離子液（濃縮液）分別加入2.5 mL、11 mL 無水乙醇，并做好標記，室溫保存。蛋白酶K（干粉）以及Carrier RNA（干粉）中加入625 μL 洗脫液，充分混勻溶解，放置于-20℃環(huán)境下保存。

（2）處理標本。血清標本、血漿標本和陰陽性質控品處理方法一致。取滅菌1.5 mL 離心管加入50 μL RNA 蛋白酶K，取200 μL 血清或血漿，加入200 μL 病毒裂解液（已含Carrier RNA），振蕩混勻，高速離心10 s，72 ℃放置10 min。同時將洗脫液置于72℃預熱。加入250 μL 無水乙醇，振蕩混勻，將混合液吸至離心柱、500 μL 抑制物去除液以及500 μL 去離子液加入離心柱，室溫下12 000 rpm 離心1 min，將離心柱裝至新的收集管。重復操作后將離心柱-收集管于室溫下14 000 rpm 離心3 min 除去殘余乙醇，將離心柱取出，放置于新的1.5 mL 離心管。打開離心柱蓋子，72 ℃放置2 min，在離心柱的膜的正上方加入72 ℃預熱的洗脫液50 μL，蓋緊離心柱管蓋,室溫靜置1 min 后，14 000 rpm 離心1 min。離心管內即為病毒核酸溶液，建議立即使用，如需保存，置于-20 ℃[5]。

RT-PCR 擴增：HCV-PCR 反應管若干，分別在管壁加入標本和陰陽性質控品RNA 各30 μL，瞬時離心，將各反應管放入PCR 儀，按下列條件擴增：50 ℃逆轉錄25 min，95 ℃15 min 預變性，然后按（94 ℃30s→55 ℃40 s→72 ℃45 s）×45 個循環(huán)擴增；最后72 ℃延伸7 min[6]。

雜交反應：正確配置試劑，包括雜交液Ⅰ濃縮液、雜交液Ⅱ濃縮液、溶液Ⅱ濃縮液、溶液Ⅳ、顯色液。利用DA-8000 全自動核酸分子雜交儀實施核酸檢測。

2 結果

2.1 對比兩組患者基因分型情況

兩組患者中基因分型為3a 的患者數(shù)量最多，第一批次患者中8 例患者未分型，第二批次患者中1 例患者分型結果為陰性，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 兩批次患者基因分型（n，%）

2.2 病情與基因型關系

3a 型和1b 型患者普遍病情較為嚴重，包括肝硬化、腹痛、肝癌、消化道出血等，患者臟器功能受到嚴重影響，具體對比數(shù)據(jù)見表2，P<0.05。

表2 病情與基因型關系（n，%）

3 討論

丙型肝炎病毒屬于一種傳染性病毒，目前，HCV患者數(shù)量正在持續(xù)增加，如何預防和控制HCV 的傳播和擴散已經(jīng)成為了世界各國所面臨的重要問題之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織對HCV 患者進行調查發(fā)現(xiàn)，每年均有300 萬左右人次被HCV 所感染[7-11]。HCV治療難度較大，難以徹底從血液之中根除，且會損害患者的肝臟功能，隨著疾病不斷發(fā)展，會形成肝硬化或者癌癥。部分患者雖然被HCV 所感染，但是并不會表現(xiàn)出相應的癥狀，會成為攜帶HCV 的人群，通過某些途徑可能會將病毒傳染給其他人。HCV 基因分型具有一定的地理特征，我國多數(shù)HCV 患者為1b 型和2a 型，但是，每個地區(qū)基因分型差異性較大，在研究HCV 治療和預防時應當結合地區(qū)實際基因分型情況進行研究。HCV 患者基因型的不同會影響到臨床癥狀表現(xiàn)以及病情發(fā)展的嚴重程度，而且每一種基因對于治療藥物的敏感程度也有著較大的差異[12-13]。對HCV 基因分型進行分析可以結合患者的具體分型制定合適的治療方案，認識到不同類型的HCV 分型和肝臟疾病的嚴重程度，預測治療效果，提高HCV 治療水平[14-15]。

根據(jù)本次研究結果進行分析，隴南地區(qū)3a 型HCV 患者所占比例最多，其次分別為1b、6a、2a、3b，且基因型為3a 型和1b 型患者容易發(fā)展為肝硬化以及肝癌，嚴重損害了患者的肝臟功能。因此，隴南地區(qū)在今后對HCV 患者實施治療時，應在3a 型患者治療方案中增加預防肝硬化、肝功能受損的計劃，加強對患者肝臟功能的保護。

綜上所述，通過對隴南地區(qū)丙型肝炎患者基因型進行分析，3a 型患者比例逐漸增加，且3a 型HCV患者普遍存在肝功能受損問題，部分患者已經(jīng)出現(xiàn)癌化現(xiàn)象，嚴重威脅了隴南地區(qū)人民身體健康。本次研究過程中所選擇的樣本數(shù)量不足，會對此次研究活動的結果造成一定的影響，在之后臨床治療過程中應持續(xù)關注臨床數(shù)據(jù)的變化，強化隴南地區(qū)HCV 治療效果和控制水平。