楊成成 季曉黎 文怡 尹小蘭 楊伊斯

摘要 目的：探討清熱祛瘀湯對(duì)慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的炎性反應(yīng)細(xì)胞因子及粘連相關(guān)免疫分子的影響。方法：選取100只Wistar雌性大鼠為研究對(duì)象，以隨機(jī)分組方式將其分為5組，分別為模型對(duì)照組、假手術(shù)組、清熱祛瘀湯組（包括低、中、高3種不同劑量），每組20只;除假手術(shù)組外，其余5組均建立盆腔炎性疾病大鼠模型;于清熱祛瘀方作用下對(duì)其炎性反應(yīng)細(xì)胞因子、血液流變學(xué)、粘連相關(guān)免疫分子變化情況進(jìn)行分析。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組大鼠血液流變學(xué)各指標(biāo)均明顯升高變（P<0.05）;而經(jīng)治療后，各指標(biāo)均明顯下降，且與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;模型對(duì)照組與假手術(shù)組比較，大鼠血清IL-4、IL-10、TNF-α、IgA、IgG差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;經(jīng)治療后，清熱祛瘀方各劑量組各指標(biāo)水平均發(fā)生明顯改變（P<0.05）。結(jié)論：清熱祛瘀湯對(duì)慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的炎性反應(yīng)細(xì)胞因子及粘連相關(guān)免疫分子、血液流變學(xué)均有較大影響，可推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞 清熱祛瘀湯;慢性盆腔炎性疾病;炎性反應(yīng)細(xì)胞因子;血液流變學(xué);免疫分子;大鼠;粘連相關(guān)免疫分子;假手術(shù)

Experimental Study on Qingre Quyu Decoction on Inflammatory Cytokines and Adhesion-associated

Immune Molecules in Rats with Chronic Pelvic Inflammatory Disease

YANG Chengcheng，JI Xiaoli，WEN Yi，YIN Xiaolan，YANG Yisi

（Department of Gynecology，Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 610072，China）

Abstract Objective：To investigate the effects of Qingre Quyu Decoction on inflammatory cytokines and adhesion-related immune molecules in rats with chronic pelvic inflammatory disease.Methods：One hundred female Wistar rats were selected as subjects.They were randomly divided into five groups：model control group，sham operation group and Qingre Quyu Decoction group（including three different doses of low，medium and high），with 20 rats in each group.Except for the sham operation group，the other 5 groups established a rat model of pelvic inflammatory disease; the changes of inflammatory cytokines，hemorheology and adhesion related immune molecules were analyzed under the action of Qingre Quyu Decoction.Results：Compared with sham operation group，the indexes of hemorheology of the model control group were significantly increased（P<0.05）.After treatment，the indexes were significantly decreased，and the differences were Statistically significant compared with the model control group（P<0.05）.There were statistically significant differences in serum IL-4，IL-10，TNF-α，IgA and IgG between model control group and sham operation group（P<0.05）; After treatment，the levels of of indexes in each dose group of Qingre Quyu Decoction significantly changed（P<0.05）.Conclusion：Qingre Quyu Decoction has great influence on inflammatory cytokines，adhesion related immune molecules and hemorheology in chronic pelvic inflammatory disease rats，and can be popularized and applied.

Keywords Qingre Quyu Decoction; Chronic pelvic inflammatory disease; Inflammatory cytokines; Hemorrheology; Immune molecules; Rats; Adhesion-related immune molecules; Sham operation

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.02.013

盆腔炎性疾病（Pelvic Inflammatory Diseases，PID）為女性常見(jiàn)疾病，為性活躍期女性發(fā)生率較高的一種上生殖道感染性疾病[1-2]。急性期若未得到有效治療，則極易因病程遷延、患者體質(zhì)差等因素而逐漸形成慢性盆腔炎性疾病（CPID）。而慢性盆腔炎性疾病的病情較為頑固，極易導(dǎo)致患者出現(xiàn)月經(jīng)不調(diào)、白帶異常增多、腰腹疼痛等癥狀;且慢性盆腔炎性疾病還可引發(fā)盆腔靜脈曲張，從而誘發(fā)盆腔淤血綜合征，嚴(yán)重時(shí)甚至可引發(fā)不孕，嚴(yán)重影響女性健康[3-4]。如何有效改善患者病情，提高女性生命質(zhì)量已成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)。既往，臨床上通常將現(xiàn)代醫(yī)學(xué)抗感染等藥物作為治療該病的常用手段，但效果并不理想。且隨著廣譜抗生素的應(yīng)用，致使藥物耐藥性不斷升高[5-6]。近年來(lái)，臨床上逐漸將中醫(yī)療法應(yīng)用于慢性盆腔炎性疾病患者的治療中。基于此，本次研究中以盆腔炎性疾病模擬大鼠為研究對(duì)象，采用中醫(yī)清熱祛瘀湯進(jìn)行治療，并分析該湯藥對(duì)大鼠炎性反應(yīng)細(xì)胞因子、粘連相關(guān)免疫分子、血液流變學(xué)等的影響，以闡明該療法在慢性盆腔炎性疾病中的應(yīng)用效果。具體研究如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選取100只SPF級(jí)Wistar雌性大鼠為研究對(duì)象，所有大鼠均由成都中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（甘）2004-0006-0000010;大鼠鼠齡10～14周，平均鼠齡（12.2±0.8）周;大鼠體質(zhì)量190～248 g，平均體質(zhì)量（219.9±15.4）g，保持環(huán)境溫度22～25 ℃，濕度40%，明暗光照12 h/12 h，自由飲食。動(dòng)物倫理學(xué)內(nèi)容（倫理審批號(hào)：20180221）。

1.1.2 藥物 清熱祛瘀湯方組成主要為：白芷、紅藤、沒(méi)藥、延胡索、土茯苓、當(dāng)歸、野菊花、五靈脂、黃柏、赤芍、乳香、丹參。方中所用藥材均由成都中醫(yī)藥大學(xué)炮制實(shí)驗(yàn)室提供，且所有藥材均經(jīng)專(zhuān)業(yè)人員鑒定，滿(mǎn)足藥典質(zhì)量要求。上述諸藥均加水浸泡2 h，然后用水煎煮，對(duì)濾液進(jìn)行過(guò)濾、合并，然后將其濃縮至規(guī)定濃度，最后進(jìn)行冷藏備用。

1.1.3 試劑與儀器 10%水合氯醛（中國(guó)白鶴化工廠提供，批號(hào)：980101），酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（上海易莎生物科技有限公司提供，批號(hào)：E20160903）;多功能酶標(biāo)儀（Tecan集團(tuán)奧地利有限公司，型號(hào)：Tecan Infinite M200 PRO），電子計(jì)價(jià)秤（廣東香山有限公司，型號(hào)：ACS-30-JE11），型恒溫水浴鍋（河北潤(rùn)連機(jī)械設(shè)備有限公司，型號(hào)：HHS-2S），冰箱（上海拓紛制冷設(shè)備有限公司，型號(hào)：BCD-290W），移液槍?zhuān)ㄉ虾ａt(yī)樂(lè)醫(yī)用光學(xué)儀器廠，型號(hào)：DY47914），全自動(dòng)血液流變儀（北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：LG-R-80A），全自動(dòng)血液黏度儀（北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：LG-R-80E），離心機(jī)（上海云樓醫(yī)用儀器廠，型號(hào)：80-1）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 以隨機(jī)分組方式將100只大鼠分為5組，分別為模型對(duì)照組、假手術(shù)組、清熱祛瘀湯組高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組20只;各組大鼠均進(jìn)行為期1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)。然后以10%水合氯醛進(jìn)行麻醉處理，麻醉起效后，以仰臥體位固定大鼠，在大鼠下腹部手術(shù)部位行去毛處理，常規(guī)消毒，沿腹中線(xiàn)在尿道口上方10 mm處做8～10 mm長(zhǎng)的切口，對(duì)右側(cè)子宮進(jìn)行暴露，然后在距離卵巢20 mm部位，以5號(hào)針頭將子宮劃傷，然后向右側(cè)輸卵管-卵巢方向注入0.05 mL濃度為25%的苯酚膠漿溶液;然后逐層關(guān)閉腹腔，建立盆腔炎性疾病模型，完成造模。然后假手術(shù)組大鼠，在切開(kāi)暴露后，直接進(jìn)行關(guān)閉腹腔及消毒處理;術(shù)后，所有大鼠均常規(guī)進(jìn)行為期1周的飼養(yǎng)

1.2.2 給藥方法 第8天開(kāi)始，依照人和大鼠藥量換算方式對(duì)用藥劑量進(jìn)行換算，然后分別進(jìn)行藥物灌胃處理，其中假手術(shù)組與模型組均以10 mL/kg蒸餾水行灌胃處理，低劑量組以5.3 g/kg的清熱祛瘀湯進(jìn)行灌胃處理，中劑量組與高劑量組則分別以10.5 g/kg、21.0 g/kg的清熱祛瘀湯灌胃;各組均灌胃1次/d，連續(xù)治療4周。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 最后1次給藥后24 h，將禁食不禁水16 h的大鼠以350 mg/kg濃度為10%的水合氯醛行腹腔麻醉處理，麻醉起效后，行破腹處理，采集腹主動(dòng)脈血6 mL，并以1∶125單位抗凝。然后取經(jīng)肝素抗凝的全血0.8 mL，將其置于全自動(dòng)血液流變儀、全自動(dòng)血液黏度儀進(jìn)行測(cè)定，測(cè)量指標(biāo)包括全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、紅細(xì)胞壓積等;剩余全血以4 000 r/min，離心半徑15.0 cm，離心5 min）進(jìn)行離心處理;然后取0.8 mL血漿置于全自動(dòng)血液流變儀上行血漿黏度測(cè)定。取在-20 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆玫难暹M(jìn)行炎性反應(yīng)細(xì)胞因子及粘連相免疫分子測(cè)定，包括IgA、IgG、IL-4、IL-10、TNF-α個(gè)指標(biāo)均選用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，并嚴(yán)格按照試劑盒相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用例（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血液流變學(xué)情況比較 與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組大鼠血液流變學(xué)各指標(biāo)均明顯升高變（P<0.05）;而經(jīng)治療后，各指標(biāo)均明顯下降，且與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 各組炎性反應(yīng)因子水平比較 模型對(duì)照組與假手術(shù)組比較，大鼠血清IL-4、IL-10、TNF-α差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;經(jīng)治療后，清熱祛瘀方各劑量組各指標(biāo)水平均發(fā)生明顯改變（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 各組相關(guān)免疫分子指標(biāo)比較 模型對(duì)照組與假手術(shù)組比較，大鼠血清IgA、IgG差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;經(jīng)治療后，清熱祛瘀方各劑量組各指標(biāo)水平均發(fā)生明顯改變（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 清熱祛瘀湯大鼠子宮病理學(xué)影響研究 正常對(duì)照組大鼠子宮組織結(jié)構(gòu)正常，壁界清晰，無(wú)明顯充血點(diǎn)及炎性浸潤(rùn)表現(xiàn);模型組大鼠可見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，結(jié)締組織增生明顯，黏膜上皮細(xì)胞可見(jiàn)明顯變性、壞死區(qū);經(jīng)清熱祛瘀湯干預(yù)后，大鼠子宮組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及組織增生減少。見(jiàn)圖1。

3 討論

慢性盆腔炎性疾病也叫盆腔炎性疾病后遺癥，其主要是指女性?xún)?nèi)生殖器及周?chē)Y(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎性反應(yīng)，具有病程長(zhǎng)、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)[7-8]。多是因急性盆腔炎性疾病未能得到及時(shí)、徹底治療，致使病情遷延、反復(fù)發(fā)作所致。慢性盆腔炎性疾病患者多可見(jiàn)盆腔組織增厚、粘連、下腹疼痛、白帶異常等現(xiàn)象，嚴(yán)重者甚至可引發(fā)不孕等嚴(yán)重后果，對(duì)女性健康乃至家庭生命質(zhì)量造成嚴(yán)重影響[9]?？咕幬餅榕R床上治療該病的常用方式，然而長(zhǎng)期或反復(fù)予以患者多種抗菌藥物聯(lián)合治療往往難以取得理想效果。

近年來(lái)，臨床上逐漸將中醫(yī)應(yīng)用于該病的治療中，中醫(yī)認(rèn)為，慢性盆腔炎性疾病屬于“腹痛”“癥瘕”“帶下”等范疇[10]，認(rèn)為該病的發(fā)生與血瘀、濕熱有較大關(guān)聯(lián)，而濕熱內(nèi)停、反復(fù)進(jìn)退、邪毒內(nèi)存、正氣不足則是導(dǎo)致該病發(fā)生的重要病機(jī)。因此，中醫(yī)通常將活血化瘀、清熱利濕作為治療該病的關(guān)鍵。本研究中所選用的清熱祛瘀湯，其方中所含有的野菊花、紅藤、土茯苓等藥物均有清熱解毒、活血通絡(luò)、散瘀的功效;與黃柏相配伍，可促使清熱效果增強(qiáng);延胡索則均具有辛散溫通的功效;而沒(méi)藥、當(dāng)歸、乳香、五靈脂、赤芍、丹參等藥物則具有消腫止痛、行氣活血的作用;與白芷相配伍則可發(fā)揮通滯散結(jié)的功效;且丹參與赤芍配合使用還可達(dá)到調(diào)經(jīng)止痛、活血化瘀的功效;且赤芍還有良好的抗炎功效，可對(duì)炎性反應(yīng)細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)行有效抑制，從而可達(dá)到促進(jìn)黏膜上皮細(xì)胞功能恢復(fù)、細(xì)胞分泌活動(dòng)增強(qiáng)的效果;而丹參則具有促纖溶功效，在促進(jìn)纖溶蛋白溶解、緩解組織粘連方面可發(fā)揮積極作用;當(dāng)歸則可在一定程度上對(duì)血小板聚集現(xiàn)象進(jìn)行改善，并可促進(jìn)非特異性免疫功能增強(qiáng);諸藥合用可達(dá)到清熱利濕、活血化瘀、行氣止痛的功效[11]。將其應(yīng)用于慢性盆腔炎性疾病的治療中可發(fā)揮一定的積極作用，對(duì)改善患者病情有重要意義。

臨床上通常認(rèn)為，慢性盆腔炎性疾病遷延不愈與盆腔血液循環(huán)障礙有較大關(guān)聯(lián);臨床多項(xiàng)研究顯示[12]，盆腔炎性疾病后遺癥患者多伴有血液凝滯、黏稠狀態(tài)，而血瘀證則與血液流變學(xué)存在較大關(guān)聯(lián)。本次研究結(jié)果提示清熱祛瘀湯在改善慢性盆腔炎性疾病患者血液流變學(xué)方面可發(fā)揮積極作用。另外，中醫(yī)認(rèn)為，慢性盆腔炎性疾病的發(fā)生與濕熱有較大關(guān)聯(lián);而濕熱的發(fā)生則與慢性炎性反應(yīng)有較大關(guān)聯(lián)。體內(nèi)細(xì)胞因子異常應(yīng)答則與慢性炎性反應(yīng)的發(fā)生有較大關(guān)聯(lián)。盆腔炎性疾病患者多可見(jiàn)Th細(xì)胞亞群偏離現(xiàn)象，IL-4、IL-10均屬于抑炎性細(xì)胞因子，兩者均有Th2細(xì)胞產(chǎn)生;其中IL-4有較強(qiáng)的抗炎活性，可有效的對(duì)脂多糖介導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子進(jìn)行抑制，并可在一定程度上對(duì)TNF-a及前列腺素E2的分泌情況進(jìn)行抑制，進(jìn)而可達(dá)到抗炎性反應(yīng)糖皮質(zhì)激素的功效。而IL-4則可對(duì)促炎性反應(yīng)細(xì)胞因子進(jìn)行抑制，從而可在一定程度上減輕因炎性細(xì)胞因子所致的過(guò)強(qiáng)免疫反應(yīng)，進(jìn)而可達(dá)到減輕自身免疫應(yīng)答的功效。TNF-a則可在炎性反應(yīng)發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)功效[13-14]。免疫球蛋白IgA、IgG則是體液免疫的主要組成部分，屬于具有抗體活性的蛋白質(zhì)，可會(huì)較好的抗病毒、抗菌功效，可在機(jī)體抗感染免疫中發(fā)揮重要價(jià)值。本次研究結(jié)果提示清熱祛瘀湯可在一定程度上對(duì)體液免疫反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，并可對(duì)變態(tài)反應(yīng)形成進(jìn)行有效抑制，從而可發(fā)揮較好的抗感染、抗炎功效，進(jìn)而可達(dá)到減輕患者炎性癥狀的效果。

綜上所述，清熱祛瘀湯對(duì)慢性盆腔炎性疾病模型大鼠的免疫分子、血流動(dòng)力、血清炎性反應(yīng)因子水平均有較好的調(diào)節(jié)作用，可在一定程度上減輕盆腔炎性疾病癥狀，對(duì)防治盆腔炎性疾病有重要價(jià)值，可在臨床上推廣應(yīng)用。

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（2019-07-03收稿 責(zé)任編輯：王明）

基金項(xiàng)目：四川省教育廳科研計(jì)劃項(xiàng)目（17ZB0154）

作者簡(jiǎn)介：楊成成（1986.03—），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥防治婦科痛癥，E-mail：3086827810@qq.com

通信作者：楊伊斯（1987.01—），女，本科，主治醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥防治婦科疾病，E-mail：150393856@qq.com