方苓力 譚璽 葉雨絲 黃蘭 何瑤

重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 口腔疾病與生物醫(yī)學(xué)重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶市高校市級口腔生物醫(yī)學(xué)工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 重慶401147

顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎（temporomandibular joint osteoarthritis，TMJOA）是一種低炎癥性病變[1-2]，以關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性破壞為主要特征，同時(shí)伴有關(guān)節(jié)盤，滑膜及軟骨下骨的改變[3-4]。

髁突軟骨退行性變則是TMJOA的典型表現(xiàn)，其細(xì)胞生物學(xué)行為的研究是TMJOA相關(guān)研究的重要組成部分。正常情況下髁突軟骨包含4個(gè)不同成熟階段的軟骨細(xì)胞，從表層向下依次分為纖維軟骨細(xì)胞層，多形態(tài)細(xì)胞層/增殖細(xì)胞層，前肥大軟骨細(xì)胞層/扁平細(xì)胞層，以及最下層的肥大軟骨細(xì)胞層[5-7]。作為咀嚼系統(tǒng)的重要組成部分，關(guān)節(jié)區(qū)一定程度的負(fù)荷，對維持關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)態(tài)有重要意義[8]?？陬M系統(tǒng)的平衡失調(diào)，如宿主關(guān)節(jié)表面適應(yīng)能力的降低和/或功能性負(fù)荷超限，將導(dǎo)致關(guān)節(jié)區(qū)超負(fù)荷受載，引起關(guān)節(jié)軟骨漸進(jìn)性破壞，促使骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生[8-9]。因此，明確超負(fù)荷應(yīng)力下的顳下頜關(guān)節(jié)（temporomandibular joint，TMJ）的反應(yīng)性改變及TMJOA進(jìn)展的內(nèi)在機(jī)制，將為后續(xù)干預(yù)和逆轉(zhuǎn)TMJOA 病變的發(fā)生發(fā)展提供重要依據(jù)。

目前，建立超負(fù)荷應(yīng)力誘導(dǎo)TMJOA的方式主要是通過增大關(guān)節(jié)表面的力學(xué)加載，打破關(guān)節(jié)軟骨的改建平衡，從而引起軟骨的退行性改變和軟骨下骨的破壞[10]。強(qiáng)制性張口模型是應(yīng)用比較成熟的超負(fù)荷應(yīng)力誘導(dǎo)的TMJOA模型。此模型也是為數(shù)不多能夠應(yīng)用于誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)病變的模型，Sobue等[11]發(fā)現(xiàn)1 h·d-1，0.5 N的強(qiáng)制張口應(yīng)力，連續(xù)作用5 d后小鼠出現(xiàn)了適應(yīng)性軟骨細(xì)胞增殖，細(xì)胞層增厚，基質(zhì)表達(dá)增加的現(xiàn)象[11-12]。Tanaka等[13]使大鼠處于最大開口位1 h·d-1，連續(xù)加載20 d出現(xiàn)了軟骨退變晚期的表現(xiàn)，如軟骨層變薄，表層結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞凋亡增加，排列紊亂，基質(zhì)降解，并伴隨局部細(xì)胞巢狀增生[13-14]。此外，結(jié)合其他增加應(yīng)力負(fù)荷的造模方式誘導(dǎo)的髁突軟骨退變表現(xiàn)，基本確定了退變初期的適應(yīng)性增殖階段和晚期以凋亡破壞為主的病損確立階段[15-17]。而對于這2個(gè)階段是如何轉(zhuǎn)變及相關(guān)表現(xiàn)，尚缺乏研究探討。因此，本研究應(yīng)用Sobue等[11]的小鼠建模方法，延長應(yīng)力作用時(shí)間，旨在探索適應(yīng)性增殖階段之后髁突軟骨退變早期的軟骨細(xì)胞生物學(xué)行為表現(xiàn)。

除了增殖、凋亡及基質(zhì)分泌改變這些基本的生物學(xué)行為變化以外，近年來研究表明自噬也在骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[18]。通過咬合紊亂建立的誘導(dǎo)TMJ退變的模型中發(fā)現(xiàn)，在TMJOA病變初期，自噬活性增強(qiáng)，能夠通過去除過量的細(xì)胞成分來抑制細(xì)胞接觸并阻斷細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)，從而減少軟骨細(xì)胞凋亡和細(xì)胞基質(zhì)的降解。而在病變晚期，與凋亡相關(guān)的蛋白基因激活，自噬活性受到抑制，關(guān)節(jié)退變加重[19-21]。磷脂酰肌醇3-激酶/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt）通路是被證實(shí)在TMJOA的發(fā)生過程中起到重要保護(hù)作用的一條信號通路，不僅可以通過PI3K的磷酸化實(shí)現(xiàn)磷脂酰肌醇3磷酸的轉(zhuǎn)化，最終使Akt磷酸化而活化，進(jìn)而參與調(diào)控軟骨細(xì)胞生長及功能[22]；還可以通過調(diào)控下游因子mTOR的活性影響細(xì)胞自噬的表達(dá)[23]。在手術(shù)、氧化應(yīng)激或基質(zhì)分解酶誘導(dǎo)的TMJOA發(fā)生過程中，該通路被抑制，導(dǎo)致軟骨細(xì)胞凋亡增加，軟骨基質(zhì)合成相關(guān)蛋白分泌降低，基質(zhì)分解酶類表達(dá)增高，從而促進(jìn)了關(guān)節(jié)軟骨的進(jìn)行性破壞[24-25]。

因此，本研究通過給小鼠加載適宜的應(yīng)力，探究在適應(yīng)性增殖階段之后的髁突軟骨退變早期，軟骨細(xì)胞在增殖、凋亡、自噬方面行為的改變以及PI3K/Akt信號通路的表達(dá)變化，以期加深對于TMJ退行性變進(jìn)展的認(rèn)識，進(jìn)而為早期干預(yù)治療TMJOA提供相應(yīng)參考靶點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 動物模型構(gòu)建

8周齡C57BL/6野生型雄鼠，購自重慶醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心，隨機(jī)分成2組，每組5只。實(shí)驗(yàn)通過重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院倫理委員會審查［批號：2020年倫審（004）號］。根據(jù)Sobue等[11]描述的強(qiáng)制張口模型建模，誘導(dǎo)麻醉后固定。實(shí)驗(yàn)組清醒時(shí)放置開口器，產(chǎn)生0.5 N強(qiáng)制張口力壓迫TMJ，1 h·d-1（圖1A）。對照組僅固定，10 d后取樣。處死前1天腹腔注射5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷（5-ethynyl-2'-deoxyuridine，EdU）試劑A（廣州銳博生物科技有限公司）50 mg·kg-1，0.1 mL·g-1體質(zhì)量（圖1B）。

1.2 樣本收集

過量水合氯醛處死小鼠，正中矢狀面剖開頭部。右側(cè)分離出完整下頜骨，擬行激光共聚焦掃描及EdU染色。左側(cè)頭部固定后脫鈣、脫水、修剪后冠狀向包埋標(biāo)本，制成5 μm厚度石蠟切片行后續(xù)染色。

圖 1 應(yīng)力刺激下TMJ軟骨的組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)Fig 1 Histomorphology of TMJ cartilage stimulated by stress

1.3 石蠟切片染色

常規(guī)進(jìn)行蘇木精伊紅（hematoxylin and eosin，HE）和甲苯胺藍(lán)染色。切片于室溫脫蠟、水化，抗原修復(fù)15 min，3%過氧化氫孵育10 min，山羊血清封閉20 min，滴加體積分?jǐn)?shù)為1∶100的一抗增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、體積分?jǐn)?shù)為1∶100的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cysteine-requiring aspartate protease3，caspase3）、體積分?jǐn)?shù)為1∶200的自噬基因Beclin1、體積分?jǐn)?shù)為1∶100的磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶（phosphorylated Akt，p-Akt）（成都正能生物技術(shù)有限責(zé)任公司），體積分?jǐn)?shù)為1∶100的Ⅱ型膠原（collagen Ⅱ，Col Ⅱ）、體積分?jǐn)?shù)為1∶100的基質(zhì)金 屬 蛋 白 酶 13 （matrix metalloproteinase 13，MMP13）（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），體積分?jǐn)?shù)為1∶100的蛋白聚糖（aggrecan，Acan）（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），體積分?jǐn)?shù)為1∶100的微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（light chain 3，LC3）、體積分?jǐn)?shù)為1∶50的磷酸化雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of rapamyoin， p-mTOR）（Abcam Plc公司，美國），4 ℃孵育過夜；山羊抗鼠二抗（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）顯色，蘇木素（北京百靈威科技有限公司）復(fù)染，脫水，透明，封片。

光學(xué)顯微鏡（中國奧林巴斯有限公司）下觀察，采用Image-ProPlus6.0圖像分析系統(tǒng)（Media Cybernetics圖像技術(shù)公司，美國），每張切片截取關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)、中、外側(cè)3個(gè)部位12×8 cm2面積大小進(jìn)行積分光密度（integralopticaldensity，IOD）統(tǒng)計(jì)。

1.4 髁突軟骨激光共聚焦掃描及重建

下頜骨固定后加入10 μg·mL-1的4，6-二氨基-2-苯基吲哚（重慶蒙博生物科技有限公司）500 μL避光孵育24 h，掃描軟骨中段，設(shè)置同課題組前期研究[26]，掃描通道405 nm，掃描深度60 μm，層距2 μm。Leica Application Suite X軟件三維重建，觀察髁突軟骨內(nèi)細(xì)胞分布。

1.5 關(guān)節(jié)軟骨冰凍切片EdU染色

右側(cè)下頜骨脫鈣，蔗糖梯度脫水后包埋，8 μm切片。根據(jù)EdU試劑盒（C10301，廣州銳博生物科技有限公司）染色，固定后滴加2 mg·mL-1的甘氨酸（重慶蒙博生物科技有限公司）1 mL作用10 min，1 mL 0.5%曲拉通（Sigma公司，美國）穿透10 min，Apollo染色反應(yīng)液孵育30 min，0.5%曲拉通洗3次，10 μg·mL-14，6-二氨基-2-苯基吲哚1 mL復(fù)染，激光共聚焦顯微鏡405 nm和643 nm通道掃描。以7×10 cm2統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 TMJ軟骨的組織形態(tài)學(xué)改變

HE染色結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組軟骨結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞層增厚，軟骨細(xì)胞排列紊亂，總細(xì)胞數(shù)目減少，內(nèi)側(cè)細(xì)胞減少更明顯，但并未出現(xiàn)典型的巢狀增生表現(xiàn)（圖1C～F）。甲苯胺藍(lán)染色提示：實(shí)驗(yàn)組較對照組軟骨基質(zhì)減少（圖1G～H）。共聚焦掃描重建顯示：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞排列紊亂，密度降低，局部區(qū)域細(xì)胞減少明顯（圖1I～J）。結(jié)合適應(yīng)性增殖階段和退變后期軟骨的表現(xiàn)，認(rèn)為該期處于軟骨退變早期即適應(yīng)性增殖后的過渡階段。

2.2 顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的基質(zhì)蛋白表達(dá)

Acan和Col Ⅱ是鑒定軟骨基質(zhì)蛋白的主要標(biāo)記物，實(shí)驗(yàn)組Acan明顯較對照組減少，其IOD值也降低（圖2A～C）。Col Ⅱ在增殖層和前肥大軟骨細(xì)胞層中表達(dá)較對照組有所增加，在肥大軟骨細(xì)胞層中Col Ⅱ的表達(dá)則較對照組減少，但總的IOD測量值實(shí)驗(yàn)組比對照組低（圖2D～F）。MMP13是主要的基質(zhì)金屬蛋白降解酶，實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)明顯增加（圖2G～I(xiàn)）。結(jié)合以上變化，說明實(shí)驗(yàn)組經(jīng)應(yīng)力誘導(dǎo)后軟骨基質(zhì)出現(xiàn)降解。

圖 2 TMJ軟骨的基質(zhì)表達(dá)變化Fig 2 Expression of TMJ cartilage matrix

2.3 顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的增殖和凋亡

活體增殖細(xì)胞標(biāo)記結(jié)合EdU染色能較準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞增殖狀態(tài)[26]，陽性細(xì)胞核呈紅色，實(shí)驗(yàn)組多于對照組（圖3A～C）。PCNA也是增殖細(xì)胞的常用標(biāo)記蛋白，實(shí)驗(yàn)組陽性細(xì)胞的百分率多于對照組，且實(shí)驗(yàn)組中可見個(gè)別肥大軟骨細(xì)胞細(xì)胞核呈陽性表現(xiàn)，IOD值也大于對照組（圖3D～F）。細(xì)胞凋亡的主要蛋白酶caspase 3在實(shí)驗(yàn)組中陽性表達(dá)增加，IOD值也較對照組大（圖3G～I(xiàn)）。因此，應(yīng)力作用下軟骨細(xì)胞增殖和凋亡活性都較對照組增強(qiáng)。

圖 3 TMJ軟骨細(xì)胞在應(yīng)力作用下的增殖與凋亡表現(xiàn)Fig 3 Proliferation and apoptosis of TMJ cartilage under stress stimulation

2.4 TMJ軟骨細(xì)胞自噬水平

作為自噬的重要標(biāo)志性蛋白，Beclin1和LC3是自噬體形成的標(biāo)志，代表其活化的強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)組Beclin1和LC3表達(dá)較對照組升高，相應(yīng)的IOD值也增大（圖4），說明在應(yīng)力作用后的髁突軟骨自噬表達(dá)增強(qiáng)。

2.5 TMJ軟骨中PI3K/Akt通路的變化

在對PI3K/Akt通路關(guān)鍵激活因子檢測中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組p-Akt的表達(dá)較對照組明顯升高，其IOD測量值也增大（圖5A～C）。mTOR作為PI3K/Akt通路的下游關(guān)鍵因子，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)高于對照組（圖5D～F）。由此推測應(yīng)力誘導(dǎo)的髁突軟骨退變過程中，伴隨PI3K/Akt信號通路的激活。

3 討論

過大的機(jī)械應(yīng)力是TMJOA發(fā)生的重要病因。目前，應(yīng)力導(dǎo)致TMJOA的模型主要有咬合紊亂模型、強(qiáng)制張口模型、根據(jù)飲食硬度改變咀嚼負(fù)荷模型等。相較而言，強(qiáng)制張口模型操作可人為量化，一致性好。

Sobue等[11]連續(xù)5 d加力1 h·d-1后，小鼠關(guān)節(jié)出現(xiàn)軟骨層增厚，細(xì)胞增殖增加等初期表現(xiàn)。而學(xué)者們[13-14]加大應(yīng)力后，大鼠髁突軟骨出現(xiàn)典型的確立期表現(xiàn)。目前尚未發(fā)現(xiàn)有對TMJ在病變初期到病變確立期這個(gè)過渡期關(guān)節(jié)軟骨退變行為表現(xiàn)進(jìn)行探索的實(shí)驗(yàn)。因此，參考Sobue等[11]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，加力10 d觀察到小鼠髁突軟骨在細(xì)胞層增厚的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)細(xì)胞排列紊亂，數(shù)目減少，基質(zhì)降解的情況，但并沒有典型的巢狀增生表現(xiàn)，軟骨結(jié)構(gòu)保持完整。Utreja等[12]采用與Sobue等[11]一樣的加力方式和時(shí)間，利用轉(zhuǎn)基因小鼠標(biāo)記各層軟骨細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)應(yīng)力加載后軟骨各層厚度均增加，伴隨EdU標(biāo)記細(xì)胞的增加。Utreja等[12]認(rèn)為在應(yīng)力作用下細(xì)胞軟骨層厚度的增加不僅是軟骨細(xì)胞增殖增加的結(jié)果，也可能是髁突軟骨中前肥大軟骨細(xì)胞分化水平增加，從而促進(jìn)了軟骨細(xì)胞層增厚。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示軟骨細(xì)胞層厚度增加，但軟骨細(xì)胞數(shù)目減少。結(jié)合本研究實(shí)驗(yàn)組較對照組EdU和PCNA表達(dá)增加的結(jié)果，筆者猜測一方面可能是由于軟骨細(xì)胞在加力前期階段出現(xiàn)了適應(yīng)性細(xì)胞增殖，軟骨層呈增厚的狀態(tài)，但由于應(yīng)力持續(xù)作用，軟骨破壞發(fā)生，導(dǎo)致軟骨上層及表層細(xì)胞數(shù)目首先減少，而肥大軟骨層的細(xì)胞數(shù)目還尚未表現(xiàn)出明顯減少[27]，故而軟骨細(xì)胞層厚度仍保持較厚狀態(tài)。此外，MMP13作為軟骨細(xì)胞分化的重要標(biāo)志物，在本實(shí)驗(yàn)中部分前肥大軟骨細(xì)胞呈陽性表達(dá)，因此另一方面也不排除在應(yīng)力加載后前肥大軟骨細(xì)胞向肥大軟骨細(xì)胞分化加劇，進(jìn)而引起軟骨細(xì)胞層增厚的可能。

圖 4 應(yīng)力作用下髁突軟骨細(xì)胞中自噬的表達(dá)Fig 4 Expression of autophagy in condylar chondrocytes under stress stimulation

圖 5 p-Akt及p-mTOR在應(yīng)力誘導(dǎo)的TMJ軟骨中的表達(dá)Fig 5 Expression of p-Akt and p-mTOR in stress-induced TMJ cartilage

近年來，有學(xué)者[12,28-29]認(rèn)為部分分化后的肥大軟骨細(xì)胞仍保持增殖能力。Kurio等[5]在幼鼠和3個(gè)月大的小鼠中用EdU進(jìn)行增殖細(xì)胞示蹤，顯示EdU標(biāo)記的軟骨前體細(xì)胞可向軟骨細(xì)胞和肥大軟骨細(xì)胞進(jìn)行分化和遷移，且分化后的肥大軟骨細(xì)胞EdU仍呈陽性表達(dá)。本研究的結(jié)果也顯示實(shí)驗(yàn)組中PCNA在部分肥大軟骨細(xì)胞核中呈陽性表達(dá)，說明此部分肥大軟骨細(xì)胞在分化后仍具有增殖潛力。

在OA發(fā)生的過程中，自噬水平也會發(fā)生相應(yīng)變化。Zhang等[21]發(fā)現(xiàn)，咬合紊亂導(dǎo)致的應(yīng)力作用初期軟骨細(xì)胞排列不規(guī)則，軟骨層出現(xiàn)無細(xì)胞區(qū)域，LC3、Beclin1以及溶酶體的表達(dá)水平升高，電鏡下觀察到自噬小體的形成，表明自噬活性增強(qiáng)。此外，Yang等[19]也證實(shí)了在TMJ早期病變時(shí)，細(xì)胞自噬和凋亡都被激活，而晚期自噬體與溶酶體的融合過程受阻，自噬活性受到抑制，TMJ病變進(jìn)一步加重。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者發(fā)現(xiàn)在應(yīng)力誘導(dǎo)的TMJ退變早期，軟骨細(xì)胞為了對抗應(yīng)力刺激進(jìn)行了代償從而引起自噬的活化。

PI3K/Akt通路參與調(diào)控軟骨細(xì)胞生長發(fā)育及生物學(xué)行為表現(xiàn)已被眾多實(shí)驗(yàn)證實(shí)[30]。研究[31-32]表明，PI3K/Akt通路促進(jìn)軟骨細(xì)胞存活和基質(zhì)合成。Zhang等[33]發(fā)現(xiàn)，一定的壓力刺激促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖，伴隨PI3K/Akt通路激活。此外該通路還影響自噬表達(dá)。Xiao等[34]通過抑制PI3K/Akt和mTOR的活性增強(qiáng)了對軟骨細(xì)胞的保護(hù)作用。對于本實(shí)驗(yàn)PI3K/Akt和mTOR活性增強(qiáng)，自噬表達(dá)增加的結(jié)果，提示自噬活性調(diào)控可能不僅是PI3K/Akt單獨(dú)作用的結(jié)果。有學(xué)者[35]發(fā)現(xiàn)，Beclin 1蛋白可以通過與其他因子相互作用來調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬水平。Arai等[36]在Beclin 1基因敲除鼠中發(fā)現(xiàn)，軟骨細(xì)胞分化功能受損，軟骨基質(zhì)表達(dá)減少。此外，Yang等[37]發(fā)現(xiàn)，激活p53可以抑制軟骨細(xì)胞的自噬表達(dá)，促進(jìn)軟骨細(xì)胞凋亡。因此，對于應(yīng)力誘導(dǎo)下髁突軟骨自噬的具體調(diào)控機(jī)制還需要更深入的實(shí)驗(yàn)研究。Shanware等[38]將PI3K信號級聯(lián)、中間代謝和自噬合稱為新陳代謝的超級信號網(wǎng)絡(luò)，其中一個(gè)部分障礙會有其他部分的補(bǔ)償響應(yīng)。在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)力誘導(dǎo)TMJ退變早期軟骨細(xì)胞的一系列反應(yīng)可能也與此有關(guān)，具體的調(diào)控機(jī)制尚需進(jìn)一步研究明確。

目前，臨床上關(guān)節(jié)疾病的分期主要依據(jù)臨床體征和影像學(xué)檢測結(jié)果。但相較之下病理學(xué)指標(biāo)更加敏感，能在關(guān)節(jié)軟骨退變早期即體現(xiàn)出細(xì)胞和分子表達(dá)的改變。而當(dāng)病理學(xué)上軟骨退變后期出現(xiàn)比如關(guān)節(jié)軟骨裂隙和吸收等嚴(yán)重表現(xiàn)時(shí)，影像檢查才可見部分現(xiàn)象，此時(shí)依據(jù)影像學(xué)表現(xiàn)的臨床分期，事實(shí)上已經(jīng)錯(cuò)過了關(guān)節(jié)軟骨退變的早期階段，并不利于TMJ治療的早期干預(yù)和治療。而依據(jù)臨床體征進(jìn)行的分期，由于個(gè)體差異較大，和病理學(xué)表現(xiàn)建立聯(lián)系相對更困難。因此如何將關(guān)節(jié)病變的病理學(xué)表現(xiàn)與臨床檢測相結(jié)合，還需要進(jìn)一步研究探索。一方面，可以通過更精細(xì)的影像技術(shù)與關(guān)節(jié)軟骨退變的病理改變相關(guān)聯(lián)[39-40]。另一方面，也可以考慮采集體液樣本檢測關(guān)鍵指標(biāo)來建立與關(guān)節(jié)軟骨退變病理學(xué)表現(xiàn)的聯(lián)系[41]。

綜上所述，退變早期髁突軟骨可能仍處于細(xì)胞增殖與凋亡的抗衡狀態(tài)，表現(xiàn)為軟骨細(xì)胞增殖、凋亡及自噬生物學(xué)行為均有一定程度的激活，并伴隨PI3K/Akt通路表達(dá)活化。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。