◎ 苗育可，王然然，王楠楠，董建鋒

（承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000）

隨著人們對動物源食品由需求型向質量型的轉變，動物源食品中的獸藥殘留已逐漸成為全世界關注的一個焦點，也是影響動物源性食品安全的重要因素之一。某些生產(chǎn)者為提高存活率會給批量生產(chǎn)的食用動物使用獸藥，但使用方法不當、休藥期結束前屠宰動物或動物接觸含有抗生素的污水等都可能造成獸藥殘留超標，蓄積在動物的細胞組織器官內(nèi)，或進入乳汁、蛋中。喹諾酮類藥物是以4-喹諾酮為基本結構的人工合成的抗菌藥，是使用較多的獸藥抗生素[1]。過量可引起人體的腸胃不適，甚至還會引起中樞系統(tǒng)的不良反應。

我國有國家強制標準、國家推薦標準、地方標準、行業(yè)標準、農(nóng)業(yè)部公告和衛(wèi)生部公告等多種類型的食品標準。目前我國關于動物源性食品中喹諾酮類藥物殘留檢測方法的標準，現(xiàn)行有效的有30余條，這些標準種類繁多，不同動源性類基質提取方法各異、儀器方法不同，檢測喹諾酮的種類數(shù)量也不同。目前最常用的為GB/T 21312—2007與GB/T 20366—2006，均為高效液相色譜-質譜聯(lián)用法，本文結合長期檢測經(jīng)驗，以兩種標準為基礎，優(yōu)化整合出一套便捷高效的喹諾酮類藥物殘留的實驗方案[2-3]。本文實施后對前處理過程的優(yōu)化，可簡化實驗步驟，最大程度涵蓋動物源性基質的種類，降低實驗系統(tǒng)誤差，大大提高工作效率，避免浪費，節(jié)省實驗資金。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品：檢測樣品來自河北省承德市雙灤區(qū)超市，包括雞肉、豬肉、牛肉、雞蛋和牛奶。

試劑：冰乙酸（99.5%，凱通化學試劑公司）；正己烷（98.0%，凱通化學試劑公司）；檸檬酸（99.5%，凱通化學試劑公司）；甲酸（99.0%，羅恩試劑公司）；氫氧化鈉（96.0%，紅巖試劑廠）；乙二胺四乙酸二鈉（99.0%，羅恩試劑公司）；磷酸氫二鈉（99.0%，泰興試劑廠）；甲醇（色譜級，美國Fisher公司）；乙腈（色譜級，美國Fisher公司）；娃哈哈純凈水。

標準品：氧氟沙星（純度99.7%，壇墨質檢）。

1.2 儀器

ME303T/02型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、KS-500DE型超聲波清洗器（昆山潔力美超聲儀器有限公司）、HC-3018R高速冷凍離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）、液相色譜串聯(lián)質譜儀（AB SCIEX公司）、旋轉蒸發(fā)儀（瑞士布奇公司）和氮吹儀（美國Biotage公司）。

1.3 儀器條件

本文所采用的儀器流動相為0.2%甲酸水溶液和乙腈，流速為0.2 mL·min-1，梯度洗脫情況見表1。

表1 流動相梯度洗脫表

1.4 樣品前處理

樣品前處理是檢驗檢測過程中重要的試驗步驟，其占據(jù)整個分析過程約60%的時間，主要的分析誤差都來自樣品前處理環(huán)節(jié)，樣品前處理直接影響到檢驗檢測結果的準確性。本文主要依據(jù)國家標準《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法》（GB/T 21312—2007）與《動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法》（GB/T 20366—2006），在其中選取了3種喹諾酮類藥物殘留檢測前處理方法作為比較。

1.5 試驗方法

1.5.1 相同基質

以豬肉為基質，氧氟沙星為例。①前處理方法1。使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化。稱取試樣加入20 mL 0.1 mol·L-1的EDTA Mcllvaine緩沖溶液，進行旋渦混合超聲離心后，使用HLB固相萃取柱進行凈化。使用1 mL 0.2%甲酸水溶液渦旋溶解。供液相色譜串聯(lián)質譜儀測定[2]。②前處理方法2。使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸 稱取均質試樣加入20 mL甲酸-乙腈溶液進行提取，均質離心后，用20 mL甲酸-乙腈溶液再重復提取一次，合并上清液。使用25 mL乙腈飽和的正己烷進行凈化，旋蒸氮吹，準確加入1.0 mL甲酸-乙腈溶液溶解殘渣定容，供液相色譜串聯(lián)質譜儀測定[3]。③前處理方法3。根據(jù)QuEchERS方法的要求，進行提取凈化，供液相色譜串聯(lián)質譜儀測定。

1.5.2 不同基質

使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸，以氧氟沙星為例，以豬肉、雞肉、牛肉、雞蛋和牛奶[4]為基質。

2 結果與分析

2.1 3種前處理方法的回收率比較

由圖1知，使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化，最終回收率為31.2%。使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸，最終回收率為74.3%。采用QuEchERS方法最終回收率為75.0%[5]。

圖1 3種前處理方法的回收率圖

2.2 5種基質的回收率比較

由圖2知，豬肉回收率為73.2%，雞肉回收率為72.9%，牛肉回收率為75.4%，雞蛋回收率為69.1%，牛奶回收率為66.4%。結論為畜禽類基質回收率較好，雞蛋、牛奶較低。

圖2 5種基質的回收率圖

3 結論與討論

使用0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸和QuEchERS方法回收率相差不大，且二者均比使用EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取樣品，采用固相萃取柱凈化的方法回收率高。使用固相萃取柱在具體實驗過程中對于目標物質的損失更大，且更加耗時。而對于畜禽肉、雞蛋牛奶來說，使用QuEchERS方法或0.2%甲酸乙腈提取樣品，采用乙腈飽和正己烷凈化旋蒸的方法，回收率較高，試驗效率較高。此結果為喹諾酮藥物殘留檢測方法提供技術支撐。