生吉萍，宿文凡

(中國(guó)人民大學(xué) 農(nóng)業(yè)與農(nóng)村發(fā)展學(xué)院， 北京 100872)

茶樹花(tea blossom或tea flower)與茶葉同根共生、一母同胞，是茶樹的生殖器官。由于茶樹花的生長(zhǎng)會(huì)與第二年萌發(fā)的新芽爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，從而降低新茶的質(zhì)量，故茶樹花往往作為茶樹的廢棄物被茶農(nóng)采用各種方法除去。這不僅耗費(fèi)了人力，還造成了茶樹花資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。實(shí)際上，茶樹花作為茶樹生長(zhǎng)過程中的重要產(chǎn)物，同茶葉一樣擁有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)。

山茶科山茶屬茶樹[Camelliasinensis(L.) O.Kuntze]的花早在2013年就被原國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為新資源食品(衛(wèi)生部公告2013年第1號(hào))。茶樹花蘊(yùn)含著豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，主要包括茶多酚、茶多糖、茶皂素、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、黃酮類物質(zhì)、氨基酸等有益成分和活性物質(zhì)[1-2]。茶多糖(tea polysaccharides，TPS)是一類與蛋白質(zhì)結(jié)合的酸性多糖或酸性糖蛋白，具有防輻射、抗凝血、降血糖、增強(qiáng)免疫功能、降血壓、耐缺氧、增加冠狀動(dòng)脈血流量和降血等多種作用[3]。而茶樹花多糖(tea flower polysaccharides，TFPS)是從茶樹花中提取出來的多糖成分，與茶多糖比較，茶樹花多糖高于新茶葉中多糖的含量。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[4]，茶樹花中的多糖成分與茶葉中含有的多糖成分基本相同。茶樹花中多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.04%～1.84%，高于新茶葉中多糖的含量。將茶樹花樹多糖進(jìn)行有效分離，發(fā)現(xiàn)茶樹花多糖由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸、甘露糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖等聚合而成，其中以葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸、甘露糖為主，占70%以上。

目前，圍繞茶樹花的研究方興未艾，針對(duì)茶樹花多糖的研究報(bào)道也相對(duì)較少。但茶樹花可利用價(jià)值高，可制作的食品種類多樣，在未來的茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展中，深入開發(fā)茶樹花產(chǎn)業(yè)，將對(duì)豐富茶相關(guān)產(chǎn)業(yè)、延長(zhǎng)茶產(chǎn)業(yè)鏈，以至促進(jìn)農(nóng)民增收、實(shí)現(xiàn)鄉(xiāng)村振興發(fā)揮重要的作用。本文圍繞茶樹花多糖的功效、提取方法、分離純化方法等方面進(jìn)行闡述，以期為茶樹花及其多糖活性物質(zhì)的開發(fā)和利用提供新的思路。

1 茶樹花多糖生物活性研究

由于茶樹花多糖的成分與茶多糖相似，故本節(jié)整合了茶樹花多糖和茶多糖的生物活性研究報(bào)道。

1.1 降血糖

在我國(guó)和日本的民間，常利用粗老茶葉來治療糖尿病，其主要的有效成分就是茶多糖。茶樹花中的茶多糖含量高于茶葉，可為茶多糖的生產(chǎn)利用提供較好的材料。茶多糖降血糖作用隨著世界范圍內(nèi)糖尿病發(fā)病率的持續(xù)增高而得到了日益廣泛的關(guān)注，目前關(guān)于其降血糖作用的機(jī)理主要有4個(gè)方面的解釋。1)茶多糖可保護(hù)胰島細(xì)胞，促進(jìn)了胰島素分泌。丁仁鳳等[5]將茶多糖拌入飼料喂糖尿病大鼠3周，發(fā)現(xiàn)茶多糖有顯著抑制糖尿病大鼠血糖升高的作用，與對(duì)照組相比，茶多糖組大鼠血胰島素水平有顯著提高(P<0.05)，其作用機(jī)制可能是促進(jìn)了胰島細(xì)胞損傷的恢復(fù)。茶多糖可通過提高機(jī)體抗氧化能力和細(xì)胞免疫功能保護(hù)胰島β細(xì)胞，從而促進(jìn)胰島素分泌[6]。2)提高胰島素敏感性。胰島β細(xì)胞功能異常和胰島素抵抗是II型糖尿病發(fā)病的基本環(huán)節(jié)，持續(xù)高血糖可直接損傷β細(xì)胞功能和胰島素敏感性，使得血糖進(jìn)一步升高，形成惡性循環(huán)[7]。PPAR-γ激動(dòng)劑有提高胰島素敏感性的作用，是某些抗糖尿病藥物如噻唑烷二酮的主要作用機(jī)理。許多研究表明：茶多糖降血糖的作用機(jī)制可能是通過激活PPAR-γ而使其介導(dǎo)的胰島素敏感性增高所致[8]。3)調(diào)節(jié)糖代謝有關(guān)酶的活性。這些調(diào)節(jié)作用包括增強(qiáng)葡萄糖激酶活性和抑制糖降解酶活性。增強(qiáng)葡萄糖激酶活性可以促進(jìn)糖的合成代謝從而降低血糖，抑制糖降解酶活性可以抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)活性、延緩小腸對(duì)糖的消化吸收。4)提高肝糖原含量，降低血糖。有研究表明：茶多糖可通過改善糖尿病小鼠肝臟糖代謝過程增加肝糖原的累計(jì)，從而使輸出到血液中的葡萄糖減少，使血糖水平降低。

茶多糖降血糖功效是肯定的，它具有多種降糖機(jī)制，但其作用機(jī)制比較復(fù)雜，可能是多途徑、多因素的綜合作用。若需進(jìn)一步搞清楚多糖的構(gòu)效關(guān)系，還需進(jìn)行更加深入的研究。

1.2 抗氧化

茶多糖的抗氧化活性可能是其預(yù)防心腦血管疾病和延緩衰老的作用機(jī)制之一。全吉淑等[14]研究了茶多糖體外清除自由基與抗脂蛋白氧化作用。結(jié)果表明：在食用茶多糖后受試者血漿及極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白過氧化脂質(zhì)水平明顯降低，說明茶多糖可增強(qiáng)血漿及脂蛋白的抗氧化能力。

1.3 免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤

茶多糖可以通過增強(qiáng)免疫細(xì)胞活性從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。而茶多糖的抗氧化活性可能是其具有增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用的機(jī)制之一。韓銓[15]建立小鼠S180肉瘤移植模型，進(jìn)行抑瘤率計(jì)算和免疫調(diào)節(jié)活性的研究。將茶樹花多糖以灌胃形式注入患瘤小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，茶樹花多糖低、中、高劑量組的抑瘤率分別為45.5%、60.9%和64.5%；第20天的存活率分別為40%、60%和90%，對(duì)照組小鼠則全部死亡。對(duì)于脾臟和胸腺等免疫器官，茶樹花多糖使胸腺指數(shù)有所上升對(duì)胸腺起到的保護(hù)作用，但是對(duì)脾臟指數(shù)沒有顯著影響。對(duì)于具防御和免疫調(diào)節(jié)功能的巨噬細(xì)胞，使用低中高劑量的茶樹花多糖后小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)有顯著的提高，表明其對(duì)小鼠免疫功能的增強(qiáng)作用。

Wang等[16]水提法提取茶樹花多糖后分別用體積分?jǐn)?shù)為10%～90%的9個(gè)不同梯度濃度的乙醇分別沉淀茶多糖，從而得到九種不同組分的茶多糖并研究其相關(guān)生物活性，結(jié)果表明：不同組分茶樹花多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶及淋巴細(xì)胞增殖均有很強(qiáng)的抑制效果。魏楠等[17]將茶葉提取物茶多糖與阿霉素聯(lián)用，研究了茶多糖對(duì)阿霉素抑制肺癌A549細(xì)胞增殖作用的影響，發(fā)現(xiàn)茶多糖和阿霉素聯(lián)用后能夠使具有毒副作用的阿霉素在減少用量的同時(shí)不改變對(duì)肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞的增殖抑制作用。但實(shí)驗(yàn)所用的為粗茶多糖并不是提純后的茶多糖，所以具體的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究。

1.4 肝臟保護(hù)

茶樹花粗多糖可有效地保護(hù)肝臟，有學(xué)者認(rèn)為其作用機(jī)理可能是(至少部分是)通過內(nèi)源性抗氧化酶(SOD和GSH- Px)活性的增強(qiáng)以及MDA含量的減少來發(fā)揮作用的。徐人杰[10]利用四氯化碳建立了肝損傷模型，肝損傷模型組能顯著降低肝臟中SOD和GSH- Px活性，增加MDA含量；而茶樹花粗多糖組可以顯著提高SOD和GSH- Px活性，降低MDA含量，這表明茶樹花粗多糖能從抑制脂質(zhì)過氧化的角度保護(hù)肝臟。值得注意的是，在茶樹花多糖處理組中，中劑量組表現(xiàn)出最好的效果，而高劑量組的效果比中劑量組低，暗示茶樹花粗多糖在高濃度下反而產(chǎn)生了一定的反作用，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

另外，黃思茂等[18]研究金花茶多糖對(duì)肝損傷的保護(hù)作用機(jī)制時(shí)認(rèn)為茶多糖對(duì)肝的保護(hù)作用除了與抗氧化應(yīng)激密切相關(guān)，可能與抗炎機(jī)制也有關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，金花茶多糖能較好地抑制NF-κB、IL-1β、IL-6及TNF-α的表達(dá)。NF-κB是重要的炎癥轉(zhuǎn)錄因子，被激活后可以導(dǎo)致各種促炎細(xì)胞因子如IL-1β、IL-6及TNF-α的大量產(chǎn)生并參與炎癥反應(yīng)，而促炎細(xì)胞因子大量增多又可以反過來激活NF-κB，形成正反饋調(diào)節(jié)。這種正反饋調(diào)節(jié)會(huì)加重炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生進(jìn)而加重肝組織的損傷，而金花茶多糖抑制相關(guān)因子的表達(dá)便可達(dá)到保肝的效果。這也可以成為茶樹花多糖肝保護(hù)作用的一個(gè)研究方向。

1.5 抗凝血

有關(guān)茶樹花多糖抗凝血的研究文章幾乎沒有，但是關(guān)于從茶葉中提取出的茶多糖抗凝血作用的研究在這幾年間已經(jīng)有所發(fā)展。實(shí)驗(yàn)證明，茶多糖可以明顯抑制血小板的黏附作用并降低血液黏度因而具有抗血凝可抗血栓作用。王淑如等[19]報(bào)道，茶多糖在體內(nèi)、體外均有顯著的抗凝作用，茶多糖體外可顯著延長(zhǎng)混合人血漿的凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間。研究發(fā)現(xiàn)，茶多糖是通過內(nèi)源性系統(tǒng)來影響抗凝血過程[20-21]。隨著茶多糖濃度的增加，活化部分凝血活酶時(shí)間(activated partial thromboplastin time，APTT)不斷延長(zhǎng)，但凝血酶原時(shí)間基本沒有變化，這都顯示茶多糖不是通過外源性途徑來影響凝血途徑。謝亮亮將茶葉中的茶多糖提取分離后得到4個(gè)組分TPS-1、TPS-2、TPS-3和TPS-4，其中粗多糖、TPS-2、TPS-3與凝血酶時(shí)間不存在劑量關(guān)系，但是TPS-4和TPS-1存在一定的劑量依賴關(guān)系，其中TPS-4比TPS-1對(duì)凝血酶時(shí)間更有顯著性影響，延長(zhǎng)了46.9%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TPS-4是通過把纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白影響凝血過程。

1.6 其他作用

茶多糖還有調(diào)節(jié)腸道健康、抗輻射作用、抗病毒、降血脂等作用，但這些作用研究較少，且大都以茶葉為研究原料，故關(guān)于茶樹花多糖的生理活性有待進(jìn)一步研究。

2 茶樹花多糖提取方法研究

根據(jù)多糖的提取部位和存在形式的差異，決定是否需要做預(yù)處理并確定預(yù)處理的方法。根據(jù)近些年茶樹花多糖的提取工藝研究，主要的提取方法包括溶劑提取法、酶法提取、微波輔助提取和超聲輔助提取法。

2.1 溶劑提取法

多糖是極性大分子化合物，故在選擇溶劑時(shí)，根據(jù)相似相容的原理，應(yīng)選擇水、醇或極性較強(qiáng)的酸堿溶劑。采用熱水進(jìn)行粗提時(shí)一般要把水溫加熱到快沸的溫度，因此提取成本較高。熱水浸提要消耗的時(shí)間長(zhǎng)提取出來的組分較復(fù)雜后續(xù)的進(jìn)一步提純難度大因此提取效率也較低。相對(duì)乙醇和水，酸堿提取能獲得更高的提取效率，并且酸、堿提取液經(jīng)迅速中和、透析、濃縮與醇析后，能獲得更多的多糖沉淀。但是，酸堿提取有一個(gè)明顯的缺點(diǎn)就是容易破壞多糖的活性及空間結(jié)構(gòu)。

2.2 熱水浸提法

有關(guān)熱水浸提茶樹花多糖的報(bào)道較多，但是研究結(jié)果中料液比、時(shí)間、溫度等影響因素的數(shù)值有所不同。

楊玉明等[22]用水浴浸提茶樹花多糖，關(guān)注料液比、提取次數(shù)、提取時(shí)間、提取溫度等因素對(duì)多糖得率的影響。經(jīng)過正交試驗(yàn)表明：各因素對(duì)茶樹花多糖浸提的得率影響大小順序?yàn)榱弦罕?、時(shí)間、溫度，得到較佳的浸提工藝為料液比1∶40(g/mL)、浸提溫度90 ℃、提取時(shí)間120 min，在此工藝條件下茶樹花多糖提取得率為2.13%。

稱取100 g的茶樹花將其研磨粉碎，在茶樹花粉末中加入V(氯仿)∶V(甲醇)=2∶1的混合液900 mL，劇烈搖晃，重復(fù)4～5次，直到有機(jī)層基本無色為止，將提取渣取出，晾曬揮發(fā)有機(jī)溶劑。再加入一定體積的蒸餾水加熱浸提數(shù)小時(shí)，連續(xù)提取3次，合并濾液后60 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1/5體積，在濃縮液中加入5倍體積的無水乙醇沉淀多糖，靜置過夜沉淀，5 000 r/min，20 min離心收集沉淀，從茶樹花多糖中提取得到的總多糖，濕態(tài)下接觸空氣會(huì)氧化變色，因此水提醇沉得到茶樹花多糖，應(yīng)依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，盡可能保留較少的水分，真空干燥或凍干，可一定程度上避免氧化發(fā)生。

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用響應(yīng)面法優(yōu)化茶樹花多糖的提取工藝，確定出茶樹花多糖熱水浸提的提取較佳條件為21.75倍質(zhì)量的水，90 ℃提取1.89 h[15]。

將茶樹花多糖粗品用蒸餾水溶解后，運(yùn)用Sevage法脫蛋白，重復(fù)3～4次，直至無變性蛋白層產(chǎn)生。加入5%的活性炭脫色，3 000 r/min離心后過濾活性炭，冷凍干燥后得到茶樹花粗多糖。

2.3 乙醇回流提取法

張星海[23]利用乙醇回流提取茶樹花中的茶多糖，發(fā)現(xiàn)不同來源的茶樹花其總糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在16.15%～23.25%。提取方法為稱取磨碎茶樣10 g，加體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇400 mL，95 ℃水浴回流1 h，趁熱抽濾，濾渣用體積分?jǐn)?shù)為80%熱乙醇50 mL重復(fù)洗滌2次，以除去單糖等干擾性成分，加水1 L，沸水浸提60 min，濾渣用熱蒸餾水50 mL重復(fù)洗滌2次，合并濾液，10 000 r/min離心分離10 min，去除雜質(zhì)，濃縮后用3倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇沉淀，7 000 r/min離心10 min得到沉淀物，凍干后得茶樹花粗多糖。

2.4 酶解提取法

通過酶的作用分解原料組織，加快有效成分溶出細(xì)胞，這樣能夠大大縮短提取時(shí)間，提高了提取效率。為了分解破壞具有纖維素、半纖維素、果膠等這些物質(zhì)組成的植物細(xì)胞壁及細(xì)胞間質(zhì)，在應(yīng)用時(shí)多采用復(fù)合酶，這種提取方法的工藝條件溫和、容易提純、提取得率高和成本低等優(yōu)點(diǎn)。

俞蘭[24]研究了酶法提取對(duì)多糖得率的影響。在按表1中的條件下加入戊聚糖復(fù)合酶、纖維素酶、葡聚糖酶、中性蛋白酶及果膠酶，90 ℃滅酶10 min，過濾，濾渣繼續(xù)用水提取[水提工藝條件為料液比1∶8(g/mL)、浸提溫度55 ℃、提取時(shí)間1 h]，再過濾、離心，然后兩次清液合并濃縮，醇沉、凍干，制得多糖樣品。

研究結(jié)果表明：添加中性蛋白酶、纖維素酶戊聚糖復(fù)合酶對(duì)多糖得率有明顯的提高。其中添加中性蛋白酶后多糖得率為33.41%，添加纖維素酶后多糖得率為17.93%，添加戊聚糖復(fù)合酶后多糖得率為18.32%，但是戊聚糖復(fù)合酶提取得到的茶多糖的蛋白質(zhì)含量較低，茶多糖中的酸性糖含量較高，因此提取茶樹花多糖一般選擇戊聚糖復(fù)合酶。

表1 不同酶制劑提取茶樹花多糖的最適參考條件Tab.1 Optimum reference conditions for extraction of polysaccharides from tea blossom by different enzymes

2.5 超聲波輔助提取法

超聲波技術(shù)是一種非常有效的提取生物功能因子的方法和手段。在大破壞應(yīng)力作用下，液體內(nèi)產(chǎn)生空化作用，產(chǎn)生很強(qiáng)的沖擊波和微聲流，使細(xì)胞壁瞬間破裂。植物細(xì)胞內(nèi)的有效成分能夠很快進(jìn)入溶劑從而提高提取效率。但是超聲可能會(huì)降解部分可溶性多糖，使其容易溶解于乙醇溶液中，但并不影響水溶性多糖的生物性能。張玲等[25]研究了茶樹花多糖的提取方法，通過正交試驗(yàn)確定了較佳提取工藝條件。結(jié)果表明：影響茶樹花多糖提取各因素的主次順序?yàn)槌暡üβ?、浸提溫度、料液比，較佳提取工藝條件為料液比1∶20(g/mL)，超聲波功率90 W，浸提溫度為70 ℃，在此工藝條件下茶樹花多糖提取得率1.324%。該文獻(xiàn)報(bào)道沒有研究超聲波輔助提取時(shí)間因素，茶樹花多糖得率較低；而秦德利等[26]利用響應(yīng)曲面法優(yōu)化的較佳工藝條件為超聲時(shí)間12 min，超聲功率540 W，料液比1∶30(g/mL)，茶樹花多糖提取率為7.69%。

2.6 微波輔助提取法

微波萃取就是利用高頻電磁波穿透提取溶劑，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)破損，胞外溶劑容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，有效成分也自由流出到溶劑中。應(yīng)用微波輔助提取手段能夠顯著縮短提取時(shí)間，提高多糖的提取效率。余銳[27]利用微波輔助提取技術(shù)研究茶樹花多糖的提取工藝。通過單因素試驗(yàn)比較了時(shí)間溫度和溶媒添加量等3個(gè)因素對(duì)茶樹花多糖得率的影響得到較佳的提取工藝條件，在較佳條件下多糖得率為(5.08±0.09)%。韓艷麗等[28]利用微波輔助提取技術(shù)研究茶樹花多糖的提取工藝，正交試驗(yàn)優(yōu)化較佳工藝為時(shí)間60 min，料液比1∶15(g/mL)，提取溫度50 ℃，醇沉純化后提取率為2.61%。

韓艷麗等[29]將酶法提取和微波法提取工藝進(jìn)行了綜合，研究了果膠酶- 微波法綜合提取茶樹花多糖的工藝。通過單因素和正交實(shí)驗(yàn)，在加酶質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.0%、酶解pH值5.5、酶解時(shí)間2.5 h、酶解溫度50 ℃的條件下，茶樹花多糖的提取率最高；茶樹花經(jīng)酶解后，在700 W微波強(qiáng)度下，微波時(shí)間60 s，茶樹花多糖提取率達(dá)4.82%。由此可知，果膠酶- 微波法明顯提高了茶樹花多糖的提取率。

2.7 超臨界CO2萃取法

利用壓力和溫度對(duì)超臨界流體溶解能力的影響，在超臨界下，將超臨界流體與目標(biāo)物接觸，有選擇性地將極性、分子質(zhì)量和沸點(diǎn)不同的成分依次萃取。有研究利用超臨界萃取茶樹花中的茶多糖，利用響應(yīng)面法對(duì)萃取工藝進(jìn)行優(yōu)化：在萃取時(shí)間170 min、萃取壓力45 MPa、萃取溫度75 ℃、夾帶劑乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%條件下，茶樹花多糖的實(shí)際平均得率為(6.56±0.37)%[23]。但該項(xiàng)技術(shù)設(shè)備昂貴，而且實(shí)驗(yàn)重復(fù)性、穩(wěn)定性較差，不利于推廣應(yīng)用。

3 茶樹花多糖分離純化方法研究

提取出的茶樹花粗多糖，一般需要經(jīng)過脫蛋白、脫色、色譜柱分離等純化工藝。

3.1 脫蛋白

陳小萍等[30]總結(jié)了茶樹花脫蛋白的方法，主要有Sevage法、蛋白酶法與Sevage法聯(lián)用法、鞣酸法、三氯乙酸法。這4種方法的機(jī)理不盡相同，蛋白酶法是將茶樹花多糖中的蛋白質(zhì)水解，Sevage法是用有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)變性，鞣酸和三氯乙酸是使蛋白質(zhì)帶正電荷的酸根離子結(jié)合變性。研究發(fā)現(xiàn)以上4種方法中酶法和Sevage法聯(lián)用脫蛋白效果最好。但酶解強(qiáng)度不宜過大、時(shí)間不宜過長(zhǎng)，因?yàn)椴铇浠ǘ嗵侵杏卸嗵? 蛋白質(zhì)復(fù)合物，酶解強(qiáng)度大則會(huì)使這部分復(fù)合物的生理活性降低。顧亞萍[31]采用了Sevage法，較佳操作條件為：先用分液漏斗分離，再使用離心的方法去除蛋白，這樣可以盡可能減少多糖的損失。Sevage處理的較佳次數(shù)為3次。

3.2 脫色

常用的脫色方法有3種：活性炭脫色法、H2O2脫色法、大孔樹脂脫色法。H2O2氧化脫色效果差，原因可能是H2O2不適合應(yīng)用于酚氧化酶活性高的茶樹花多糖樣品?；钚蕴棵撋灰紫疵摚瑫?huì)造成多糖成分的損失，故對(duì)于茶樹花多糖最常用的方法就是樹脂脫色。

陳小萍等[30]采用D- 315型大孔樹脂脫色效果較好。顧亞萍[31]采用DEAE- 陰離子纖維素DE52柱材料脫色，脫色的較佳條件：緩沖液為pH6.0的磷酸鹽，流速為0.8 mL/min，每6 min收集一管。經(jīng)DEAE初分離，可以得到純度為87%的TPS-1和另一多糖TPS-2。俞蘭[24]采用樹脂靜態(tài)脫色，篩選后RJA型號(hào)樹脂脫色效果較好，經(jīng)過離子交換樹脂 RJA 脫色處理后，茶花水提液總糖保留率為70%，酸性糖保留率為41%。

3.3 色譜柱純化

多糖的純化主要采用色譜法，通常有纖維素陰離子交換劑柱色譜法和凝膠排阻柱色譜法兩種。纖維素離子交換劑柱色譜法是利用連接在纖維素上的離子交換基團(tuán)的靜電鍵合作用對(duì)所帶電荷大小不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的一種方法。常見的纖維素陰離子交換劑為二乙基氨基乙基(dicthylaminoethyl, DEAE)、羧甲基(carboxymethyl, CM)等，適用于分離各種酸性多糖、中性多糖和黏多糖。凝膠排阻柱色譜法是利用凝膠微孔的分子篩作用對(duì)分子大小不同的物質(zhì)進(jìn)行分離的一種方法。通常選作填料(固定相)用的微孔凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex G-75、Sephadex G-100和Sephadex G-200)、瓊脂糖凝膠(Sepharose 2B、Sepharose 4B和Sepharose 6B)等。

顧亞萍[31]采用Sephacryl S-300進(jìn)行分離，將樹脂脫色過的TPS-2上已經(jīng)預(yù)處理的Sephacryl S- 300柱，使用pH=6.0的磷酸緩沖溶液洗脫，洗脫速度0.8 mL/min。徐人杰[10]將經(jīng)過DEAE- 纖維素- 52層析柱得到的3個(gè)洗脫組分TFPS-1、TFPS-2、TFPS-3 50 ℃減壓蒸發(fā)濃縮，濃縮液去離子水透析48 h，透析液真空冷凍干燥得到初步純化產(chǎn)品，然后將3個(gè)組分用葡聚糖凝膠G- 100進(jìn)行進(jìn)一步分離純化，可知TFPS-1、TFPS-2可洗脫出兩個(gè)組分，而TFPS-3只洗脫出一個(gè)組分，這說明TFPS-3是均一多糖。

4 總結(jié)與展望

茶樹花內(nèi)含有豐富的茶樹花多糖，具有降血糖、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤、肝保護(hù)、抗凝血等多種作用，具有較大的開發(fā)利用價(jià)值。目前已開發(fā)出多種方法對(duì)其進(jìn)行提取、分離、純化，為后續(xù)茶樹花多糖的加工利用奠定了基礎(chǔ)。未來，需繼續(xù)加大茶樹花多糖的開發(fā)利用，將其應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工等領(lǐng)域，這將對(duì)豐富茶相關(guān)產(chǎn)業(yè)、延長(zhǎng)茶產(chǎn)業(yè)鏈、促進(jìn)農(nóng)民增收、實(shí)現(xiàn)鄉(xiāng)村振興發(fā)揮重要的作用。