成紀(jì)予 陸雅清 湯陳依 王 姝 龐林江 陸國(guó)權(quán) 路興花

(浙江農(nóng)林大學(xué)農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院；浙江省農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)改良技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 311300)

甘薯(Ipomoeabatatas(L.)Lam.)是發(fā)展中國(guó)家許多地區(qū)一種重要糧食作物，廣泛種植于熱帶、亞熱帶地區(qū)[1]。亞洲是甘薯的主要生產(chǎn)區(qū)，據(jù)FAO統(tǒng)計(jì)，2018年產(chǎn)量為6 071萬(wàn)t，占全球產(chǎn)量的66%[2]。甘薯營(yíng)養(yǎng)豐富，不僅可以作為能量補(bǔ)充，還可以作為生物活性植物化學(xué)營(yíng)養(yǎng)源，被視為是營(yíng)養(yǎng)平衡全面的綠色保健食品[3, 4]。

新鮮甘薯塊根含水量高、表皮脆弱，在收裝運(yùn)過(guò)程中極易遭受機(jī)械損傷，病原菌亦容易侵染，導(dǎo)致采后病害發(fā)生嚴(yán)重，造成損失及貯藏困擾[5]。甘薯黑斑病是由甘薯長(zhǎng)喙殼菌(CeratocystisfimbriataEllisetHalsted)侵染導(dǎo)致的一種病害，不僅發(fā)生在田間，在貯藏期間亦有發(fā)生，每年我國(guó)由該病害導(dǎo)致的甘薯產(chǎn)量損失5%～10%，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)為20%～50%[6]。甘薯長(zhǎng)喙殼菌是一種致病性真菌，通過(guò)分泌毒素侵染寄主，殺死寄主組織，從中汲取養(yǎng)分，進(jìn)而對(duì)寄主的生理生化過(guò)程和組織結(jié)構(gòu)造成破壞，使寄主迅速萎蔫以及細(xì)胞組織大范圍轉(zhuǎn)為暗黑色，再變?yōu)楹谏蛏詈稚?，直至腐爛[7]。高溫高濕環(huán)境利于甘薯長(zhǎng)喙殼菌侵染產(chǎn)生病害，通過(guò)高于15 ℃開(kāi)始發(fā)病，溫度越高，發(fā)病率越高，且病情嚴(yán)重，高于35 ℃或低于9 ℃病情則會(huì)被抑制[8]。長(zhǎng)喙殼菌侵染過(guò)程會(huì)產(chǎn)生甘薯酮、甘薯寧、甘薯醇、4-薯醇等耐高溫的毒素，使甘薯變得又苦又毒[9]。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于甘薯黑斑病防治主要從抗病品種篩選[10，12]和化學(xué)藥劑篩選[13, 14]方面開(kāi)展研究，其中以化學(xué)防治為主。但隨著致病菌的耐藥性不斷增加，化學(xué)試劑殘留量易超標(biāo)，進(jìn)而威脅人體健康，并造成環(huán)境污染。植物精油天然、安全、對(duì)環(huán)境友好，具有較強(qiáng)的抑菌活性，且不易產(chǎn)生抗性[15]，已越來(lái)越多地被用于抑制藍(lán)莓、櫻桃、香蕉等果蔬采后病原菌的生長(zhǎng)，降低采后病害的發(fā)生[16，18]，提高貯藏品質(zhì)及延長(zhǎng)貨架期。

本研究首先通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)，從12種常見(jiàn)植物精油中篩選出對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌抑制效果最佳的精油品種；進(jìn)一步通過(guò)人工接種的方式，驗(yàn)證其在甘薯體內(nèi)的抑菌效果，以期為植物精油應(yīng)用于甘薯采后黑斑病害防控提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試甘薯：為鮮食為主品種“心香”，由浙江農(nóng)林大學(xué)薯類研究所甘薯種植基地提供。選擇無(wú)機(jī)械損傷、腐爛變質(zhì)、大小基本一致的同一批收獲新鮮甘薯為實(shí)驗(yàn)材料。

供試精油：中國(guó)薄荷、迷迭香、百里香、茶樹(shù)、歐洲薄荷、月桂、香芹酮、山雞椒、香茅、丁香、大茴香以及肉桂精油(純度≥95%)。

供試菌：甘薯長(zhǎng)喙殼菌(CeratocystisfimbriataEllisetHalsted)，分離自黑斑病發(fā)病甘薯。

主要試劑：馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基、二甲基亞砜(DMSO)、草酸、鹽酸、甲醇、冰醋酸、乙酸鈉、愈創(chuàng)木酚、無(wú)水乙醇、2,6-二氯靛酚、抗壞血酸、鄰苯二酚、過(guò)氧化氫、乙二胺四乙酸、聚乙二醇、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇辛基苯基醚、聚乙二醇單甲醚、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等均為分析純。

1.2 主要設(shè)備

YP3001N電子天平，YX280B手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌器，SW-CJ-1CU雙人單面(水平送風(fēng))潔凈工作臺(tái)，DRP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱，T6新世紀(jì)可見(jiàn)分光光度計(jì)，HWS-250FT智能低溫冷藏箱，GY-4果實(shí)硬度計(jì)，Allegra 64R Centrifuge臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)。

1.3 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

1.3.1 甘薯長(zhǎng)喙殼菌菌懸液的配制

無(wú)菌環(huán)境下，挑取適量甘薯長(zhǎng)喙殼菌孢子于10 mL無(wú)菌水中混勻形成孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，用無(wú)菌水稀釋菌懸液濃度約為105CFU/mL。

1.3.2 不同植物精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的抑制活性

不同植物精油體外抑菌活性的比較采用濾紙片法[19]。將不同精油分別用DMSO充分溶解，配制成100 mg/mL的溶液。將滅菌PDA培養(yǎng)基倒平板(直徑90 mm，高20 mm)后，分別加入0.2 mL甘薯長(zhǎng)喙殼菌菌懸液，涂布均勻，將預(yù)先滅菌烘干的濾紙片(直徑6 mm)將各精油溶液浸透并在瓶壁稍微瀝干后平貼在含菌培養(yǎng)基上，同時(shí)設(shè)置DMSO為空白對(duì)照組。所有培養(yǎng)基倒置在培養(yǎng)箱中，在28 ℃下培養(yǎng)3 d，取出用游標(biāo)卡尺采取十字交叉法測(cè)量濾紙片抑菌圈直徑的大小，用于比較抑菌活性。所有操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

1.3.3 最低抑菌濃度和最小殺菌濃度的測(cè)定

采用熏蒸法[20]測(cè)定肉桂精油處理對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)和最小殺菌濃度(minimum fungicidal concentration，MFC)。將直徑為30 mm的濾紙貼在培養(yǎng)皿的皿蓋中央，與培養(yǎng)皿一起滅菌后備用。滅菌PDA培養(yǎng)基倒平板，用無(wú)菌打孔器取直徑6 mm的甘薯長(zhǎng)喙殼菌菌餅接種于PDA培養(yǎng)基上，分別取不同量的精油滴在濾紙中央，使精油在培養(yǎng)皿中的空間體積濃度分別為：20、30、40、50、60、70、80、90、100 μL/L。未加精油為空白對(duì)照組。在28 ℃培養(yǎng)3～5 d。以48 h內(nèi)抑制率100%的最低精油濃度為MIC值，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，仍不長(zhǎng)菌的精油濃度為MFC值。抑菌率=[(對(duì)照組菌落直徑-精油處理組菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑)] ×100%

1.4 體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)

根據(jù)體外抑菌的結(jié)果，對(duì)健康甘薯進(jìn)行人工接種致病，觀察肉桂精油對(duì)甘薯黑斑病侵染的實(shí)際抑制效果。甘薯塊根洗凈后用75%酒精對(duì)其表面消毒、晾干，用滅菌打孔器在塊根赤道部位打一個(gè)小孔(直徑5 mm，深5 mm)，在無(wú)菌條件下，用滅菌一次性注射器取25 μL的濃度為105～106CFU/mL的甘薯長(zhǎng)喙殼菌菌懸液注入孔洞，晾干，并隨機(jī)將甘薯分裝到4 L密封保鮮盒內(nèi)。分別以空間體積濃度為0、25、40 μL/L的肉桂精油在室溫下進(jìn)行密封熏蒸處理24 h，于RH 85%～90%、28 ℃(長(zhǎng)喙殼菌的適宜生長(zhǎng)條件)恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)貯藏。每組處理25個(gè)甘薯，且重復(fù)3次。

1.5 取樣

每隔3 d取樣一次，每組隨機(jī)取樣5個(gè)甘薯，檢測(cè)甘薯失重率、病斑直徑、病變深度及硬度的變化情況；并取病斑周?chē)?0 mm的薯肉用液氮冷凍粉碎后在-80 ℃條件下密封保藏，用于測(cè)定總酚含量和PPO酶活性。

1.6 甘薯病變部位相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

1.6.1 病斑直徑的測(cè)定

在甘薯表面病斑處采用十分交叉法進(jìn)行測(cè)量[21]，取平均值作為甘薯發(fā)生黑斑病病害的病斑直徑，單位為mm。

1.6.2 病變深度的測(cè)定

從甘薯接種處橫向切開(kāi)，測(cè)量黑斑病在薯塊組織內(nèi)部的侵入深度，單位為mm。

1.6.3 失重率的測(cè)定

將貯藏甘薯定期取出稱取質(zhì)量，計(jì)算公式為：失重率=(貯藏前甘薯質(zhì)量-貯藏后甘薯質(zhì)量)/貯藏前甘薯質(zhì)量×100%。

1.6.4 硬度的測(cè)定

使用GY-4果實(shí)硬度計(jì)測(cè)定，選取每個(gè)甘薯的赤道面作為測(cè)定點(diǎn)，取相對(duì)面的兩個(gè)點(diǎn)作平均值為其硬度，單位為Pa。

1.6.5 總酚含量的測(cè)定

采用福林-酚法。稱取1.0 g甘薯樣品經(jīng)液氮研磨后，加入10 mL 80%甲醇超聲提取30 min，于4 ℃、12 000 g離心10 min，取上清液，4 ℃保存待測(cè)。測(cè)定過(guò)程參考Bao等[22]的方法并略作修改?？偡雍恳詻](méi)食子酸當(dāng)量計(jì)，單位為mg/g鮮重。

1.6.6 PPO活性的測(cè)定

稱取1.0 g甘薯樣品，加入5.0 mL提取緩沖液(內(nèi)含1 mol/L PEG、4% PVPP和1% Triton X-100)，冰浴研磨至勻漿，于4 ℃、12 000 g離心30 min，上清液即是粗酶液，4 ℃保存待測(cè)。PPO活性測(cè)定過(guò)程參考Liu等[23]的方法進(jìn)行，酶活力單位分別為ΔOD420·min-1·g-1，以鮮重計(jì)。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有處理均重復(fù)3組，結(jié)果以平均值±SD值表示。使用IBM SPSS Statistics 23.0軟件的單因素ANOVA檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并同時(shí)用Duncan’s比較數(shù)據(jù)之間的差異顯著性，P<0.05表明各組處理之間存在顯著性差異。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同植物精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的抑制效果

抑菌圈可以反映出植物精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的抑菌活性，因此，通過(guò)抑菌圈直徑大小的比較，可為篩選高效植物精油提供參考。由圖1可知，在相同條件下，甘薯長(zhǎng)喙殼菌對(duì)不同植物精油表現(xiàn)出不同程度的敏感性，且所選用的精油均對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的生長(zhǎng)具有一定的抑制。其中，肉桂精油的平均抑菌圈直徑達(dá)78.47 mm，抑制效果顯著大于其他精油(P<0.05)；其次為大茴香，平均抑菌圈直徑為64.37 mm，抑制效果顯著大于除肉桂之外的其他精油(P<0.05)；此外，抑菌圈直徑超過(guò)培養(yǎng)皿直徑50%的精油還有山雞椒和丁香，平均值分別是47.63mm和47.47 mm，兩者對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的抑制效果無(wú)顯著性差異(P>0.05)。迷迭香、月桂、中國(guó)薄荷和茶樹(shù)精油的抑菌作用均較弱，抑菌圈直徑范圍為4.67～6.70 mm，不能特別有效地抑制甘薯長(zhǎng)喙殼菌的菌絲生長(zhǎng)。結(jié)果表明，肉桂精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制能力，抑菌效果最好。

注：不同小寫(xiě)字母表示不同處理組間結(jié)果差異顯著(P<0.05)，余同。圖1 相同濃度下12種植物精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的體外抑制效果

3.2 肉桂精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的體外熏蒸抑制效果

精油具有揮發(fā)性，熏蒸處理可使精油中的有效抑菌成分更為充分地分散在病原菌體周?chē)?，增加精油與菌體的作用表面積，能更好地發(fā)揮精油的抑菌功效[24]。不同濃度肉桂精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的體外熏蒸抑制效果如圖2所示。肉桂精油的空間體積濃度越高，抑菌效果越好，這與前人的研究結(jié)果的變化趨勢(shì)一致[17][25]。在培養(yǎng)48 h內(nèi)，肉桂精油空間體積濃度≥25 μL/L時(shí)抑菌率均為100%，因此，肉桂精油的MIC濃度為25 μL/L。繼續(xù)培養(yǎng)至96 h，30 μL/L和25μL/L的肉桂精油抑菌率均分別顯著降低至90%和70%左右(P<0.05)，40 μL/L和50μL/L的肉桂精油抑菌率仍然保持在100%，因此，肉桂精油的MFC濃度為40 μL/L。

圖2 不同濃度肉桂精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的體外熏蒸抑制效果

3.3 肉桂精油對(duì)甘薯貯藏期間黑斑病病斑直徑的影響

如圖3所示，甘薯人工接種后侵染部位的病斑直徑隨貯藏時(shí)間的增加呈上升趨勢(shì)，精油處理組甘薯的病斑直徑增加幅度在貯藏期間顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。第3天時(shí)，空白組和25 μL/L肉桂精油處理組的甘薯均已出現(xiàn)病害，40 μL/L肉桂精油處理組則有效抑制了病害的發(fā)生。第15天時(shí)，25、40 μL/L肉桂精油和空白組甘薯的病斑直徑存在顯著性差異，且空白組>25μL/L肉桂精油組>40 μL/L肉桂精油組，各處理組甘薯塊根表面形成的病斑大小如圖4所示。結(jié)果表明，精油熏蒸濃度越高，對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的入侵抑制作用越強(qiáng)。

注：實(shí)線折線圖表示病斑直徑的變化趨勢(shì)；虛線折線圖表示病變深度的變化趨勢(shì)。圖3 不同處理對(duì)甘薯病斑直徑和病變深度的影響

圖4 第15天時(shí)不同處理下甘薯病斑直徑情況

3.4 肉桂精油對(duì)甘薯貯藏期間黑斑病病變深度的影響

甘薯病斑深度在貯藏期間的變化如圖5所示。在甘薯長(zhǎng)喙殼菌的侵染之下，精油處理組甘薯的病斑深度增加幅度在貯藏期間顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，但隨著時(shí)間延長(zhǎng)，甘薯病斑深度均呈上升趨勢(shì)，與庫(kù)爾勒香梨病斑深度的發(fā)展趨勢(shì)一致[26]。第15天時(shí)，25 μL/L、40 μL/L肉桂精油處理組的病斑深度分別為2.5 mm和1.9 mm左右，顯著低于空白組，各處理組甘薯的病變深度如圖5所示，可見(jiàn)，肉桂精油對(duì)甘薯黑斑病對(duì)組織侵染深度的蔓延起到一定的抑制作用。

圖5 第15天時(shí)不同處理下甘薯病變深度情況

3.5 肉桂精油對(duì)甘薯貯藏期間失重率的影響

甘薯貯藏期間，由于呼吸作用和蒸騰作用會(huì)加速重量損失，造成失重率增加。甘薯長(zhǎng)喙殼菌侵染后的15 d貯藏期內(nèi)，甘薯失重率的變化情況如圖6所示。結(jié)果顯示，甘薯的失重率隨貯藏時(shí)間增加逐漸升高，40 μL/L肉桂精油處理組甘薯的失重率顯著低于25 μL/L精油處理組和空白組(P<0.05)。在第15 d，空白組、25 μL/L和40 μL/L精油處理組的失重率分別達(dá)到3.0%、3.1%和1.4%，可見(jiàn)，40 μL/L精油處理有利于降低失重率，減少質(zhì)量損失，延緩貯藏品質(zhì)的下降。

注：實(shí)線折線圖表示失重率的變化趨勢(shì)；虛線折線圖表示硬度的變化趨勢(shì)。圖6 不同處理對(duì)甘薯失重率和硬度的影響

3.6 肉桂精油對(duì)甘薯貯藏期間硬度的影響

硬度也是衡量果蔬采后貯藏品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。甘薯長(zhǎng)喙殼菌侵染后，甘薯的硬度變化情況如圖6所示。結(jié)果顯示，甘薯的失重率隨貯藏時(shí)間增加呈現(xiàn)前期快速下降后期趨于平緩的變化趨勢(shì)，40 μL/L肉桂精油對(duì)維持甘薯硬度品質(zhì)的作用效果顯著優(yōu)于25 μL/L肉桂精油處理組(P<0.05)，且兩組精油處理甘薯的硬度變化幅度均顯著低于空白組(P<0.05)?？梢?jiàn)，精油處理對(duì)于甘薯貯藏期間減緩組織的軟化具有積極作用。

3.7 肉桂精油對(duì)甘薯貯藏期間總酚含量的影響

酚類是植物生長(zhǎng)過(guò)程產(chǎn)生的一類次生代謝性物質(zhì)，具有較強(qiáng)的抗氧化能力，可抑制病原菌通過(guò)傷口侵染植物組織，與植物的抗病性有直接的關(guān)系[27，28]。從圖7可以看出，不同處理組甘薯的總酚含量的均呈現(xiàn)先上升后趨于平緩的變化趨勢(shì)。甘薯長(zhǎng)喙殼菌侵染后的第6天，總酚的含量較處理前顯著提高69.0%～116.2%，此時(shí)40 μL/L精油處理組的總酚含量顯著高于其余兩組(P<0.05)，表明40 μL/L肉桂精油處理對(duì)增加甘薯受病菌感染后初期酚類物質(zhì)的積累有一定的促進(jìn)作用；在6～15 d，3組處理的甘薯總酚含量均維持在較高水平，且無(wú)顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果表明，病菌侵染有利于酚類活性物質(zhì)的合成，從而減輕病情。

注：實(shí)線折線圖表示總酚含量的變化趨勢(shì)；虛線折線圖表示PPO活性的變化趨勢(shì)圖7 不同處理對(duì)甘薯總酚含量的影響

3.8 肉桂精油對(duì)甘薯貯藏期間PPO活性的影響

PPO能催化多酚類物質(zhì)氧化轉(zhuǎn)變?yōu)橛卸拘缘孽愇镔|(zhì)，從而增強(qiáng)植物體抵御病原菌的侵入。甘薯長(zhǎng)喙殼菌侵染后，甘薯的PPO活性變化情況如圖7所示。不同處理組均呈先上升后趨于平緩的趨勢(shì)，與總酚含量的變化趨勢(shì)一致。與處理前相比，侵染第3天，甘薯PPO活性顯著增加(P<0.05)，增加幅度30.8%～61.2%，空白組的增加幅度顯著高于25 μL/L和40 μL/L肉桂精油處理組(P<0.05)，且兩個(gè)精油處理之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)；之后的3～15 d PPO活性都保持比較平穩(wěn)，且不同處理間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果表明，病菌侵染可使得PPO活性得到提高，有利于延緩病害的發(fā)展。

4 討論

在甘薯的真菌病害中，甘薯長(zhǎng)喙殼菌是其中最大的病原真菌，它可以從甘薯的塊莖、切口等處侵染其內(nèi)部，引起腐爛變質(zhì)并產(chǎn)生毒素[29]。植物精油中具有抑制真菌的天然活性成分，且對(duì)人體健康和生態(tài)環(huán)境都不會(huì)帶來(lái)負(fù)面影響[30]。不同種類的精油對(duì)特定真菌的作用效果有顯著差異，通過(guò)體外和體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)，表明肉桂精油能夠有效抑制甘薯長(zhǎng)喙殼菌的生長(zhǎng)，作用濃度越高，對(duì)甘薯黑斑病的防控作用效果越好。已有研究表明，植物精油的主要抑菌機(jī)制是利用其疏水性使得微生物的細(xì)胞膜和脂質(zhì)層被破壞，使微生物細(xì)胞的滲透性增加，胞內(nèi)物質(zhì)泄漏而干預(yù)微生物的正常生長(zhǎng)[30，32]。肉桂精油能夠破壞菌體細(xì)胞壁和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)泄漏到胞外，影響能量代謝系統(tǒng)，最終導(dǎo)致菌體死亡[30]。肉桂精油成分復(fù)雜，包括醛、烴烯、酯和酮等多種化合物，以醛類為主[31, 32]，其中肉桂醛為發(fā)揮其抑菌作用的主要成分，且肉桂精油的其他成分與肉桂醛存在協(xié)同增效的作用[33]。本實(shí)驗(yàn)中，在相同濃度條件下，肉桂精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的體外抑制效果優(yōu)于體內(nèi)，因此，如果要達(dá)到相同的抑制效果，可從提高作用濃度、與其他抑菌劑復(fù)合使用方面考慮以達(dá)到相同的抑制效果。

失重率、硬度、總酚含量等指標(biāo)可以用來(lái)評(píng)價(jià)果蔬采后貯藏期間的品質(zhì)。失重率可反映甘薯貯藏期間物質(zhì)損失和衰老的程度，本實(shí)驗(yàn)表明肉桂精油熏蒸處理能有效降低甘薯貯藏期間的失重率，已有研究報(bào)道，肉桂精油能推遲呼吸和乙烯高峰出現(xiàn)的時(shí)間，從而降低果實(shí)采后營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗速度[34]。甘薯的干物質(zhì)含量與硬度之間存在正相關(guān)，即干物質(zhì)含量越高硬度越大[35]，肉桂精油在降低甘薯被病菌侵染后失重率的同時(shí)，能維持更高的硬度，延緩組織變軟。酚類物質(zhì)在保護(hù)植物抵抗各種生物或非生物的脅迫起著重要的作用[36]，PPO可以將酚類物質(zhì)氧化為醌類物質(zhì)，醌是一類比酚抗氧化能力更強(qiáng)的物質(zhì)，能延緩入侵病原菌的生長(zhǎng)[37，39]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘薯在接種病菌后會(huì)激發(fā)自身防御系統(tǒng)，提高酚類物質(zhì)的積累，并在6～15 d均維持在比較高的水平，PPO活性的增加，從而使得更多的多酚類物質(zhì)氧化成醌類物質(zhì)，增強(qiáng)甘薯對(duì)長(zhǎng)喙殼菌的抵抗力，與劉美艷等[40]研究結(jié)果一致。與空白組相比，肉桂精油熏蒸處理對(duì)甘薯貯藏期間酚類物質(zhì)的合成和PPO活性的提高并無(wú)顯著作用效果，但是精油處理能夠有效延緩甘薯貯藏期間黑斑病的病斑直徑和病斑深度的擴(kuò)張，且失重率更低和組織硬度更高，這對(duì)抵制甘薯長(zhǎng)喙殼菌的入侵和維持甘薯的貯藏品質(zhì)具有積極的意義。但是，肉桂精油如何抑制甘薯長(zhǎng)喙殼菌的生長(zhǎng)以及如何影響甘薯采后貯藏期間的生理生化品質(zhì)，在理論上還缺乏系統(tǒng)地探究，其作用機(jī)理有待進(jìn)一步闡明。

5 結(jié)論

本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，比較12種常見(jiàn)植物精油對(duì)甘薯長(zhǎng)喙殼菌的抑制能力，結(jié)果表明，同樣條件下，肉桂、大茴香、山雞椒和丁香精油具有較強(qiáng)的抑菌活性，其中，肉桂精油的活性顯著優(yōu)于其他精油，MIC和MFC濃度分別為25 μL/L和40 μL/L。在此基礎(chǔ)上，對(duì)健康甘薯進(jìn)行人工接種感染甘薯長(zhǎng)喙殼菌，采用熏蒸處理，進(jìn)一步研究其對(duì)甘薯黑斑病的防控效果。結(jié)果表明，肉桂精油的體內(nèi)抑菌活性不如體外作用效果，但與空白相比，肉桂精油對(duì)甘薯黑斑病的侵染程度仍具有顯著的減緩作用，且40 μL/L的精油處理效果更佳，在15 d的貯藏期間，能有效減輕甘薯黑斑病的病變直徑和病變深度，延緩失重率的增加和硬度的下降，并能更好地保持甘薯組織的含水量和干物質(zhì)含量，且對(duì)總酚含量、PPO活性沒(méi)有負(fù)面影響，結(jié)果可為甘薯采后長(zhǎng)喙殼菌侵染導(dǎo)致的黑斑病防治提供技術(shù)參考。