＊牟建平 滕寶霞 賀曉文 朱玲 肖靜 曾小梅

（甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院 甘肅 730070）

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版中對(duì)微生物檢驗(yàn)進(jìn)行方法和限值規(guī)定[1]，眼影由于含有著色顏料、珠光顏料、酯類基質(zhì)和抑菌劑等[2]，影響微生物的檢出，本文對(duì)4種眼影分別加入陽(yáng)性指示菌[3]，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)方法挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，通過(guò)計(jì)數(shù)方法回收率、控制菌生長(zhǎng)試驗(yàn)，建立4種眼影（NOVO鍵盤(pán)指尖酷潮眼影星辰11#、希貝單色鉆石眼影41#、希貝單色鉆石眼影14#和希貝單色鉆石眼影18#）的微生物檢驗(yàn)方法，為其他類別的眼影微生物檢驗(yàn)提供參考。

1.試驗(yàn)材料

(1)樣品

NOVO鍵盤(pán)指尖酷潮眼影星辰11#，批號(hào)：AL528001，規(guī)格1.8g；希貝單色鉆石眼影41#淺粉色，批號(hào)：XB17111685，規(guī)格1.8g；希貝單色鉆石眼影14#寶藍(lán)色，批號(hào)：XB18051 685，規(guī)格1.8g；希貝單色鉆石眼影18#綠色，批號(hào)：XB18 051685，規(guī)格1.8g。

(2)培養(yǎng)基

卵磷脂吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂，批號(hào)：190221；SCDLP液體培養(yǎng)基，批號(hào)：180202；孟加拉紅瓊脂，批號(hào)：180119；雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基（含中和劑），批號(hào)：180609；Baird-Parker培養(yǎng)基基礎(chǔ)，批號(hào)：190122；甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基，批號(hào)：180811；伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB），批號(hào)：190827；十六烷三甲基溴化銨瓊脂，批號(hào)：190813；pH7.0氯化鈉—蛋白胨緩沖液，批號(hào)：20200312，均購(gòu)于北京陸橋技術(shù)股份有限公司。

(3)菌種

大腸埃希菌（ATCC 8739）、銅綠假單胞菌（ATCC 278 53）、枯草芽孢桿菌（ATCC 6633）、金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、白色念珠菌（ATCC 10231）和黑曲霉（ATCC 16404）購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究院。

(4)儀器設(shè)備

生物安全柜（ESCD、CLASS11BSC）、生化培養(yǎng)箱（上海一恒、BPMJ-250F）、壓力消毒器（松下、MSL-3781L-PC）、恒溫水浴鍋（杭州米歐儀器有限公司、WT100-2）、顯微鏡（奧林巴斯、BX53+DP74）。

2.方法與結(jié)果

(1)菌種

試驗(yàn)所用菌種為第3代，菌懸液為第4代。

(2)供試液制備

稱取眼影5g加到滅菌的三角瓶中，加入5ml滅菌吐溫-80，加入pH7.0氯化鈉—蛋白胨緩沖液至100ml，置于45℃水浴中，用勻漿儀混勻2分鐘，制成1:20供試液。

(3)計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證

加入5種陽(yáng)性指示菌，采用1:20供試液1ml注皿、1:100供試液1ml注皿，計(jì)算回收率試驗(yàn)，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)檢查方法的篩選。指示菌回收率結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)回收率

結(jié)果采用1:20供試液1ml注皿，NOVO鍵盤(pán)指尖酷潮眼影星辰11#供試品銅綠假單胞菌回收率試驗(yàn)低于50%，對(duì)銅綠假單胞菌有抑制作用，希貝單色鉆石眼影41#供試液對(duì)銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌回收率低于50%，有抑制作用，采用1:100供試液1ml注皿，回收率大于50%，方法可行；希貝單色鉆石眼影14#和18#采用1:20供試液1ml注皿，5種陽(yáng)性指示菌回收率均大于50%，方法可行。

(4)控制菌方法適用性試驗(yàn)

①耐熱大腸菌群耐熱大腸菌群系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌，在44.5℃培養(yǎng)24～48h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，采用《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版耐熱大腸菌群常規(guī)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[1]，可以檢出試驗(yàn)菌大腸埃希菌，方法可行。結(jié)果見(jiàn)圖1，表2。

圖1 耐熱大腸菌群挑戰(zhàn)性試驗(yàn)

表2 控制菌（耐熱大腸菌群）方法適用性試驗(yàn)

②金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽(yáng)性，采用 《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版金黃色葡萄球菌常規(guī)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[1]，可以檢出試驗(yàn)菌金黃色葡萄球菌，方法可行。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 控制菌（金黃色葡萄球菌）方法適用性試驗(yàn)

③銅綠假單胞菌屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽(yáng)性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42℃條件下能生長(zhǎng)，采用《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版銅綠假單胞菌常規(guī)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[1]，可以檢出試驗(yàn)菌銅綠假單胞菌，方法可行。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 控制菌（銅綠假單胞菌）方法適用性試驗(yàn)

3.結(jié)論

（1）NOVO鍵盤(pán)指尖酷潮眼影星辰11#和希貝單色鉆石眼影41#樣品微生物檢驗(yàn)方法，計(jì)數(shù)方法中菌落總數(shù)采用1:100供試液1ml注皿，霉菌和酵母菌總數(shù)采用1:20供試液1ml注皿，控制菌采用常規(guī)方法檢驗(yàn)。

（2）希貝單色鉆石眼影14#和希貝單色鉆石眼影18#樣品微生物檢驗(yàn)方法，計(jì)數(shù)方法菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)均采用1:20供試液1ml注皿，控制菌采用常規(guī)方法檢驗(yàn)。