＊王紫薇 孫曉維 吳澎昊 涂明峰 葉文峰*

（1.宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院 江西 336000 2.江西百神藥業(yè)股份有限公司 江西 336000）

油茶系山茶科山茶屬，是中國特有的一種優(yōu)良的多年生木本油料植物。中國已有2000多年的栽培經(jīng)驗，種植面積達(dá)5000多畝地。茶油富含不飽和脂肪酸具有抑制腫瘤、降低膽固醇、預(yù)防心血管疾病等多種生理功能。山茶油具有特別豐富的營養(yǎng)價值，色澤金黃或淺黃，品質(zhì)純凈，澄清透明，氣味清香，味道純正，是良好的食用油脂，有“東方橄欖油”“油王”及“長壽油”等美稱。茶油還含有維生素E、黃酮類物質(zhì)、角鯊烯以及其他抗氧化物質(zhì)，其中黃酮類物質(zhì)能夠有效幫助延緩身體衰老，增強(qiáng)身體免疫力[1-3]。江西宜春市氣候和土壤條件都非常適合油茶林基地建設(shè)，油茶林地面積居江西省第一，其袁州區(qū)具有“中國名特優(yōu)經(jīng)濟(jì)林-油茶之鄉(xiāng)”之稱[4]，對袁州區(qū)茶油進(jìn)行脂肪酸、黃酮進(jìn)行測定分析，為宜春市油茶種植提供科學(xué)依據(jù)，具有重要意義。

1.材料與方法

(1)材料與試劑

不同級別的茶油：精煉油和毛油（宜春市星火提供）三氟化硼甲醇溶液（上海泰坦）；蘆丁對照品（上海源葉）；甲醇、氫氧化鉀、正己烷、無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉（均為分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

(2)儀器與設(shè)備

安捷倫5975C+7890氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS）（Agilent公司）；電子天平（AL-104，海梅特勒-托利多儀器公司）；紫外可見分光光度計（N752，上海佑科儀器儀表有限公司）；HWS24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

(3)研究方法

①GC-MS測試

A.茶油的甲酯化[4]

分別稱取5種不同品種的油樣200mg，放入50mL燒瓶中，加入氫氧化鈉-甲醇（0.5mol·L-1）溶液4mL，70℃水浴回流直至油滴消失，大約需10min，用移液管從冷凝器頂部加入三氟化硼-甲醇溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%）溶液5mL，繼續(xù)回流3min，加入2mL正己烷，取出燒瓶，立即加入20mL飽和氯化鈉溶液，猛烈振搖至少20s，靜置分層后棄去水相層，取正己烷層進(jìn)行GC-MS分析鑒定。

B.脂肪酸測定

采用GC-MS對脂肪酸定性分析，GC對脂肪酸進(jìn)行定量分析。定量分析采用GB 5009.168-2016第三法歸一化法，吸取約60mg試樣溶解在4mL異辛烷中，加入200μL氫氧化鉀甲醇溶液（2%），通過搖晃混合進(jìn)行酯交換甲酯化，反應(yīng)完全后，用約2g硫酸氫鈉中和剩余氫氧化鉀，取澄清試樣上機(jī)[6]。

氣相條件：氫火焰離子化檢測器（FID）；檢測條件是進(jìn)樣口溫度280℃，柱溫100℃保持0.5min，10℃/min升溫至250℃，保持20min；進(jìn)樣方式，分流進(jìn)樣，分流比100:1，進(jìn)樣量1μL。

質(zhì)譜條件：離子源為EI；電離電壓：70eV；離子源溫度：200℃；質(zhì)譜范圍：50-500Amu；質(zhì)量范圍：30-400Amu；掃描周期：1s。

②黃酮類化合物測定

A.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精密稱取蘆丁0.25g，置50mL容量瓶中，加入50%乙醇，置于水浴上加熱溶解，放冷，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻。按參考文獻(xiàn)[7]進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，在500nm下用紫外可見分光光度測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.2595C+0.0724，R2=0.9897。

圖1 精煉油脂肪酸的GC-MS圖

B.黃酮含量的測定

根據(jù)樣品中黃酮含量高低，取茶油5mL，用50%乙醇定容到50mL，按A方法進(jìn)行吸光度測定，并使吸光度在0.3127-1.3887之間，通過下式計算總黃酮含量。

2.結(jié)果分析

(1)不同級別茶油脂肪酸組成的分析

對不同級別茶油（毛油和精煉油）脂肪酸組成的GC-MS 測試分析和相對含量的比較結(jié)果見圖1和表1。

表1 不同級別茶油（毛油和精煉油）脂肪酸的組成與含量

由表1可知，對不同級別茶油（毛油和精煉油）可鑒定出主要脂肪酸組成是棕櫚酸、硬脂、酸油、亞油酸和亞麻酸，毛油和精煉各脂肪酸含量差別不是很大，含量大小為：油酸＞亞油酸和棕櫚酸＞硬脂酸＞亞麻酸，其中油酸含量最高，為主要脂肪酸，其次為亞油酸和棕櫚酸，然后是硬脂酸，含量最低的是亞麻酸。

脂肪酸是茶油構(gòu)成的主要成分，其性質(zhì)主要取決于脂肪酸的種類，因此可把脂肪酸組成分析來作為定性鑒別茶油的重要依據(jù)。

宜春市產(chǎn)的茶油毛油和精煉油主要脂肪酸組分含量差異不大。精煉后油酸稍增大了一點。

(2)不同級別茶油總黃酮含量分析

分別取茶油毛油和精煉油各5mL，用50%乙醇定容到50mL，取一定量測定其吸光度，按1.3.2.2中的公式計算，得出總黃酮含量，結(jié)果見表2。

表2 不同級別茶油總黃酮含量

從表2可知，由于茶油成分復(fù)雜，同一產(chǎn)地茶油毛油的總黃酮含量高于精煉油,可能與精煉工藝、生產(chǎn)環(huán)境有關(guān)以及儲存條件、原料的品種等多種因素有關(guān)。

3.結(jié)論

通過GC-MS分析共鑒定出5種脂肪酸組分：棕櫚酸、硬脂、酸油、亞油酸和亞麻酸，毛油和精煉油各脂肪酸含量差別不是很大，含量大小為：油酸＞亞油酸和棕櫚酸＞硬脂酸＞亞麻酸，可將山茶籽的含油量和脂肪酸組分的差異作為鑒別其產(chǎn)地的指標(biāo)結(jié)論。通過總黃酮的測定，說明茶油含有酚性物質(zhì)，具有抗氧化性能。但由于茶油成分復(fù)雜，紫外分光光度法測定總黃酮有一定的局限性，還應(yīng)做進(jìn)一步的深入研究。