丁云錄，劉艷華，鄒 迪，張洪寶，崔成姬，張守琳

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長(zhǎng)春 130021）

益腎止血顆粒功效為滋陰補(bǔ)腎、健脾利濕、活血化瘀，是長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腎病科張守琳教授的經(jīng)驗(yàn)方，自1996 年應(yīng)用其治療IgA 腎病二十余年，可有效減輕患者臨床癥狀。本研究觀察益腎止血顆粒對(duì)微循環(huán)障礙模型大鼠的療效，以期為臨床用藥提供藥理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 動(dòng)物，Wistar 大鼠，SPF 級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，分籠飼養(yǎng)，室溫（21±2）℃，相對(duì)濕度50%～60%，通風(fēng)良好，室內(nèi)12 h 明暗自動(dòng)切換，自由攝食、飲水。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（吉）2018-0007，購(gòu)于長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。藥品，益腎止血顆粒（黃芪、枸杞子、女貞子、生地黃、旱蓮草、大薊、小薊、大黃、梔子、白茅根、槐花、益母草、牡丹皮、赤芍、當(dāng)歸等），長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)藥研究中心提供。腎炎康復(fù)片，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10940034，規(guī)格：每片0.48 g，每瓶45 片，批號(hào)：1P17419，天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司。戊巴比妥鈉，規(guī)格：每瓶500 mg，批號(hào)：WXBB6772V，美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。試劑，高分子右旋糖酐（Dextran，MW,500,000），批號(hào)：17-0320-01，瑞典Pharmacia Fine Chemicals AB Uppsala。儀器，BI-2000 醫(yī)學(xué)圖像分析儀，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法 動(dòng)物分組及給藥，隨機(jī)將50 只大鼠分成對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組（腎炎康復(fù)片10.8 g/kg）和益腎止血顆粒13.5、6.75、3.4 g/kg 3 個(gè)劑量組。試驗(yàn)共分5 組，每組10 只。受試藥物用蒸餾水配制成混懸液，大鼠ig 體積為10 mL/kg，對(duì)照組給予等體積的蒸餾水。模型制備及指標(biāo)檢測(cè)[1-4]，灌胃給藥1 h 后，戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉，于腹正中線2 cm 切口，把大鼠近盲腸段腸系膜鋪于盛有恒定37 ℃臺(tái)氏液的有機(jī)玻璃灌流盒內(nèi)，通過(guò)微循環(huán)顯微鏡和微圖像計(jì)算機(jī)處理裝置觀察記錄腸系膜注射Dextran 0、5、15、30、45、60 min 的微動(dòng)脈流速、微靜脈流速、微動(dòng)脈血管口徑、微靜脈血管口徑、毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)和微靜脈血流狀態(tài)的變化，以10% Dextran 6 mL/kg 舌靜脈給藥，制備急性微循環(huán)障礙模型。血液流態(tài)的測(cè)定，采用血液流態(tài)的加權(quán)積分法：線流、線粒流（1、2 態(tài)）0 分；粒線流（3 態(tài)）為0.2 分；粒流（4 態(tài)）為0.8 分；粒緩流（5 態(tài)）為1.6 分；粒擺流（6 態(tài)）為4.0 分；全停滯（7 態(tài)）為6.0 分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 試驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用組間t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動(dòng)脈流速、微靜脈流速的影響 注射Dextran 后5 min 血流速度開(kāi)始下降，并隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減慢，微動(dòng)脈流速、微靜脈流速變化規(guī)律一致。益腎止血顆粒高劑量組動(dòng)脈、靜脈血流速度在注射Dextran 后5、15、30、45、60 min時(shí)，與對(duì)照組比較均有顯著差異性（P＜0.01或P＜0.05）。并且，益腎止血顆粒高劑量組動(dòng)脈血流速度在注射Dextran 后45 min 時(shí)，與腎炎康復(fù)片組比較有顯著差異性（P＜0.05）。益腎止血顆粒中劑量組動(dòng)脈、靜脈血流速度在注射Dextran 后30、45、60 min 時(shí)，與對(duì)照組比較均有顯著差異性（分別為P＜0.01 或P＜0.05）。益腎止血顆粒低劑量組動(dòng)脈、靜脈血流速度在注射Dextran 后45、60 min 時(shí)，與對(duì)照組比較均有顯著差異性（P＜0.01 或P＜0.05）。說(shuō)明益腎止血顆粒高，中和低三個(gè)劑量組均能增快微血管血流速度。見(jiàn)表1，表2。

2.2 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動(dòng)脈口徑、微靜脈口徑的影響 注射Dextran 后30、45、60 min，益腎止血顆粒高劑量組、中劑量組微動(dòng)脈、微靜脈血管口徑與對(duì)照組比較均有顯著差異性（P＜0.01 或P＜0.05）；注射Dextran 后45、60 min 時(shí)益腎止血顆粒低劑量組微動(dòng)脈血管口徑與對(duì)照組比較均有顯著差異性（P＜0.05）。說(shuō)明益腎止血顆粒能顯著改善微血管痙攣狀態(tài)。見(jiàn)表3，表4。

2.3 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)的影響 注射Dextran 后45、60 min，益腎止血顆粒高劑量組毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)與對(duì)照組比較均有顯著差異性（為P＜0.05）；注射Dextran 后60 min，益腎止血顆粒中劑量組、低劑量組毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)與對(duì)照組比較均有顯著差異性（P＜0.05），說(shuō)明益腎止血顆粒能顯著增加毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)。見(jiàn)表5。

2.4 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管內(nèi)血液流態(tài)的影響 注射Dextran 5 min 后，微靜脈血流有線流或線粒流轉(zhuǎn)變?yōu)榱＞€流或粒流，紅細(xì)胞聚集，血漿與血細(xì)胞分離，可見(jiàn)白細(xì)胞貼壁翻滾現(xiàn)象，并逐漸加重至60 min。各給藥組出現(xiàn)以上現(xiàn)象均在注射Dextran 15 min 后。說(shuō)明藥物對(duì)微循環(huán)障礙時(shí)的血液流態(tài)具有改善作用。益腎止血顆粒高劑量組、中劑量組在注射Dextran 后15、30、45、60 min，可以明顯改善微循環(huán)血液流態(tài)，與對(duì)照組比較均有顯著差異性（P＜0.01 或P＜0.05）。益腎止血顆粒低劑量組在注射Dextran 后15、45 min，可以明顯改善微循環(huán)血液流態(tài)，與對(duì)照組比較有顯著差異性（P＜0.05）。說(shuō)明益腎止血顆粒能明顯改善血液流態(tài)。見(jiàn)表6。

表1 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動(dòng)脈流速的影響（，n =10） μm/s

表1 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動(dòng)脈流速的影響（，n =10） μm/s

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01；與腎炎康復(fù)片比較，△P ＜0.05

表2 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流速的影響（，n =10） μm/s

表2 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流速的影響（，n =10） μm/s

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表3 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動(dòng)脈口徑的影響（，n =10） μm

表3 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微動(dòng)脈口徑的影響（，n =10） μm

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表4 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈口徑的影響（，n =10） μm

表4 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈口徑的影響（，n =10） μm

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表5 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)的影響（，n =10） 條

表5 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)的影響（，n =10） 條

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

表6 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流態(tài)的影響（，n =10）

表6 益腎止血顆粒對(duì)大鼠腸系膜急性微循環(huán)障礙微靜脈流態(tài)的影響（，n =10）

注：與對(duì)照組比較，# P ＜0.05，## P ＜0.01

3 討論

益腎止血顆粒提出以脾腎虧虛為本，濕熱瘀阻為標(biāo)，滋陰補(bǔ)腎、健脾利濕、活血化瘀為治療慢性腎炎血尿的根本治療原則。開(kāi)發(fā)中藥復(fù)方新藥益腎止血顆粒，可以滿足臨床對(duì)治療慢性腎炎血尿的品種的需求[5-6]。益腎止血顆粒由黃芪、枸杞子、女貞子、生地黃、旱蓮草、大薊、小薊、大黃、梔子、白茅根、槐花、益母草、牡丹皮、赤芍、當(dāng)歸等組方，諸藥合用共奏滋陰補(bǔ)腎、健脾利濕，活血化瘀功效。引發(fā)慢性腎炎血尿的常見(jiàn)疾病有急性腎小球腎炎、慢性腎小球腎炎、隱匿性腎小球腎炎、狼瘡性腎炎和紫癜性腎炎等。其中IgA 腎病是原發(fā)性腎小球疾病中呈現(xiàn)單純性血尿的常見(jiàn)病理類型，約占40%～50%[7-8]。我國(guó)慢性腎臟病患病率為10%，原發(fā)性腎小球疾病患病率約為5%，其中IgA 腎病患病率可達(dá)到2.4%～3%[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)采用舌靜脈注射Dextran 造成大鼠腸系膜微循環(huán)血瘀模型的方法，觀察大鼠腸系膜微動(dòng)脈流速、微靜脈流速、微動(dòng)脈血管口徑、微靜脈血管口徑、毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)和微靜脈血流狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明益腎止血顆粒可以明顯地改善大鼠腸系膜微循環(huán)障礙，為深入研究益腎止血顆粒的藥理學(xué)作用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。