薛晴 （蘇州第九人民醫(yī)院內(nèi)科，蘇州 215200）

肺癌是一種惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率和死亡率。盡管在最近幾十年中肺癌的診斷和治療取得了進(jìn)步，但是患者的5年總生存率并未顯著提高［1］。約80%的肺癌患者被診斷出處于晚期，預(yù)后較差［2］。癌癥細(xì)胞遷移影響肺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，實(shí)驗(yàn)證明選擇抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移作為肺癌的臨床治療方案［3］。因此，需要進(jìn)一步研究肺癌轉(zhuǎn)移的潛在分子機(jī)制，以確定新的治療方案。既往研究顯示，龍膽根的甲醇提取物以劑量依賴(lài)性方式抑制肺癌細(xì)胞系HOP‐62和急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系THP‐1癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，具有抗增殖特性［4］。龍膽苦苷是中藥龍膽主要的活性成分，能夠抑制肝癌HepG2和SMMC‐7721細(xì)胞的增殖，還對(duì)上皮性卵巢癌HO8910細(xì)胞表現(xiàn)出抗增殖、抗遷移和促凋亡作用［5‐7］。非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）LINC00520位于人類(lèi)染色體14q22.3，長(zhǎng)度約為20 kb，是多種人類(lèi)癌癥致癌性的重要調(diào)節(jié)劑［8］。資料表明，LINC00520在喉鱗狀細(xì)胞癌組織、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，并且LINC00520可抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，但促進(jìn)細(xì)胞凋亡［9‐10］。JIN等［11］在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞系中檢測(cè)到了高表達(dá)的LINC00520，并且這種高表達(dá)與患者不良的臨床病理參數(shù)以及較短的總生存期和無(wú)病生存期有關(guān)。在功能上，LINC00520的干擾導(dǎo)致結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移、集落形成和侵襲的能力顯著降低。然而尚未報(bào)道龍膽苦苷和LINC00520在肺癌中的確切作用。因此，本研究針對(duì)龍膽苦苷和LINC00520在肺癌細(xì)胞A549增殖、遷移中的功能進(jìn)行考察，并進(jìn)一步探索LINC00520是否參與龍膽苦苷介導(dǎo)的肺癌細(xì)胞增殖、遷移過(guò)程。

1 材料與方法

1.1 材料龍膽苦苷（含量97.1%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，細(xì)胞A549購(gòu)自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基（DMEM）購(gòu)自美國(guó)Gibco，LINC00520 siRNA si‐LINC00520、陰性對(duì) 照si‐NC、LINC00520過(guò) 表 達(dá) 質(zhì) 粒pcDNA‐LINC00520、pcDNA購(gòu) 自 上 海 吉 瑪 公 司，Lipo-fectamine2000試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜購(gòu)自美國(guó)Bio‐Rad公司，兔抗E‐鈣黏蛋白（E‐cadherin）、兔抗N‐鈣黏蛋白（N‐cadherin）、兔抗甘油醛‐3‐磷酸脫氫酶（glyceraldehyde‐3‐phosphate dehydrogenase，GAP-DH）抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，標(biāo)記羊抗兔IgG/HRP二抗購(gòu)自北京博奧森公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)分組A549細(xì)胞在10%胎牛血清的DMEM中培養(yǎng)，并將細(xì)胞維持在37℃和5%CO2條件下。處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞被分為以下幾組：對(duì)照組（正常培養(yǎng)）、龍膽苦苷低、中、高劑量組（10、20、40 μmol/L龍膽苦苷）、si‐NC組（轉(zhuǎn)染si‐NC）、si‐LINC00520組（轉(zhuǎn)染si‐LINC00520）、龍膽苦苷高劑量+pcDNA組（轉(zhuǎn)染pcDNA+40μmol/L龍膽苦苷）、龍膽苦苷高劑量+pcDNA‐LINC00520組（轉(zhuǎn)染pcDNA‐LINC00520+40 μmol/L龍膽苦苷）［7］。龍膽苦苷的給藥時(shí)間均為48 h。通過(guò)使用Lipo-fectamine2000試劑將si‐LINC00520，si‐NC，pcDNA‐LINC00520和pcDNA轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞中。首先，將A549細(xì)胞接種于6孔板（1×105個(gè)/孔）中培養(yǎng)24 h。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到70%時(shí)，按照Lipofectamine2000的指示，將si‐LINC00520，si‐NC，pcDNA‐LINC00520和pcDNA轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞6 h，轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞在含10%胎牛血清的新培養(yǎng)基中再放置24 h。之后，用40μmol/L龍膽苦苷處理轉(zhuǎn)染pcDNA‐LINC00520和pcDNA的A549細(xì)胞48 h。轉(zhuǎn)染效率的驗(yàn)證采用qRT‐PCR進(jìn)行。

1.2.2 qRT‐PCR測(cè)定LⅠNC00520表達(dá)按照制造商指定步驟使用TRIzol試劑從A549細(xì)胞中提取RNA。逆轉(zhuǎn)錄后使用ABI StepOnePlus系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增 反 應(yīng)。引 物 如 下：LINC00520正 向5'‐CCT-GCTCCTTCAGGGACATC‐3'和LINC00520反 向5'‐TCCGCCCCTTGCTCAAATAG‐3'；GAPDH正 向5'‐GTCAACGGATTTGGTCTGTATT‐3'和GAPDH反 向5'‐AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT‐3'。GAPDH為內(nèi)參，用2‐ΔΔCt法計(jì)算LINC00520相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性接種于A549細(xì)胞（1×104個(gè)/孔）96孔板中以1.2.1中分組處理于37℃孵育48 h。將20μl的MTT（5 mg/ml）溶液添加到孔中，再孵育4 h。隨后，將100μl二甲基亞砜添加至孔中以溶解甲瓚晶體，并使用酶標(biāo)儀在490 nm的波長(zhǎng)處測(cè)量光密度OD值。

1.2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞克隆形成A549接種在6孔板（50個(gè)/孔）中24 h，然后以1.2.1中分組處理。2周后，A549細(xì)胞用3∶1甲醇‐乙酸固定，并在室溫下用0.1%結(jié)晶紫染色10 min。染色板干燥后通過(guò)顯微鏡計(jì)數(shù)。

1.2.5 Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞遷移將1.2.1處理的A549細(xì)胞懸浮于500 μl無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基。將A549細(xì)胞（1×105個(gè)）移到Transwell（孔徑為8μm）的上腔室中，并在Transwell下腔室補(bǔ)充500μl含血清DMEM培養(yǎng)基。37℃下孵育48 h，隨后用4%多聚甲醛固定5 min，并在37℃下用0.1%結(jié)晶紫染色30 min。使用Olympus倒置顯微鏡（放大倍數(shù)×200）在至少5個(gè)隨機(jī)選擇的視野中對(duì)遷移的A549細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.6 Western blot分 析E‐cadherin和N‐cadherin表達(dá)使用含有蛋白酶抑制劑的放射免疫沉淀分析RIPA裂解緩沖液從A549細(xì)胞中提取總蛋白。通過(guò)BCA蛋白質(zhì)測(cè)定法確定蛋白濃度。在10%十二烷基硫酸鈉‐聚丙烯酰胺凝膠電泳上80 V分離等量蛋白。然后將分離的蛋白在350 mA下轉(zhuǎn)移至PVDF膜2 h。將膜在室溫下用5%封閉液處理1 h，與一抗在4℃孵育過(guò)夜：兔抗E‐cadherin（1∶1 000），兔 抗N‐cadherin（1∶1 000）和 兔 抗GAPDH（1∶2 000）。用Tris‐HCl‐Tween緩沖鹽溶液洗膜以去除未結(jié)合的抗體。添加二抗（標(biāo)記羊抗兔IgG/HRP抗體），并在室溫下孵育1 h。使用ECL顯示蛋白信號(hào)，并使用Image J軟件掃描蛋白條帶的強(qiáng)度。以GAP-DH為參照，分析E‐cadherin和N‐cadherin相對(duì)蛋白表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)采用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料表示為±s。采用單因素方差分析進(jìn)行多組間差異比較，SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行組間多重比較，t檢驗(yàn)進(jìn)行兩組間差異比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 龍膽苦苷對(duì)A549細(xì)胞活性和克隆形成的影響如圖1、表1所示，與對(duì)照組相比，龍膽苦苷低劑量組A549細(xì)胞的活性、克隆形成數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與對(duì)照組或龍膽苦苷低劑量組相比，龍膽苦苷中、高劑量組A549細(xì)胞的活性、克隆形成數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與龍膽苦苷中劑量組相比，龍膽苦苷高劑量組A549細(xì)胞的活性、克隆形成數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 龍膽苦苷對(duì)A549克隆形成的檢測(cè)Fig.1 Detection of A549 clone formation by gentiopicro-side

2.2 龍膽苦苷對(duì)A549遷移及LⅠNC00520表達(dá)的影響如表2、圖2所示，與對(duì)照組相比，龍膽苦苷低劑量組A549細(xì)胞的LINC00520表達(dá)量、遷移細(xì)胞數(shù)、E‐cadherin蛋白和N‐cadherin蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與對(duì)照組或龍膽苦苷低劑量組相比，龍膽苦苷中、高劑量組A549細(xì)胞的LINC00520表達(dá)量減少，遷移細(xì)胞數(shù)減少，E‐cad-herin蛋白水平升高，N‐cadherin蛋白水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與龍膽苦苷中劑量組相比，龍膽苦苷高劑量組A549細(xì)胞的LINC00520表達(dá)量減少，遷移細(xì)胞數(shù)減少，E‐cadherin蛋白水平升高，N‐cadherin蛋白水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 干擾LⅠNC00520對(duì)A549細(xì)胞活性和克隆形成的影響如表3、圖3所示，si‐LINC00520組A549細(xì)胞活性和克隆形成數(shù)低于si‐NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 A549細(xì)胞活性和克隆形成的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.1 Detection of A549 cell viability and clone forma-tion（±s，n=3）

表1 A549細(xì)胞活性和克隆形成的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.1 Detection of A549 cell viability and clone forma-tion（±s，n=3）

Note：Compared with the control group，1）P＜0.05；Compared with the low dose gentiopicroside group，2）P＜0.05；Compared with the me-dium dose gentiopicroside group，3）P＜0.05.

Clone formation number 104.67±3.09 104.67±2.87 79.67±2.361）2）55.67±2.051）2）3）240.519 0.000 Groups OD 490 nm Control Low dose gentiopicroside Medium dose gentiopicroside High dose gentiopicroside F P 1.16±0.08 1.15±0.06 0.85±0.041）2）0.63±0.041）2）3）59.583 0.000

表2 A549遷移細(xì)胞數(shù)及LINC00520表達(dá)的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.2 Detection of A549 migration cell number and LINC00520 expression（±s，n=3）

表2 A549遷移細(xì)胞數(shù)及LINC00520表達(dá)的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.2 Detection of A549 migration cell number and LINC00520 expression（±s，n=3）

Note：Compared with the control group，1）P＜0.05；compared with the low dose gentiopicroside group，2）P＜0.05；compared with the medium dose gen-tiopicroside group，3）P＜0.05.

N‐cadherin protein 0.77±0.05 0.76±0.05 0.51±0.041）2）0.23±0.021）2）3）111.586 0.000 Groups Control Low dose gentiopicroside Medium dose gentiopicroside High dose gentiopicroside F P LINC00520 1.01±0.04 1.00±0.05 0.71±0.041）2）0.48±0.021）2）3）127.607 0.000 Migration cells Number 230.33±3.30 228.33±4.11 182.33±3.301）2）132.00±2.941）2）3）547.500 0.000 E‐cadherin protein 0.14±0.01 0.14±0.01 0.34±0.021）2）0.58±0.031）2）3）349.867 0.000

2.4 干擾LⅠNC00520對(duì)A549遷移的影響如表4、圖4所示，干擾LINC00520后，si‐LINC00520組A549細(xì)胞的LINC00520的表達(dá)量為0.29±0.02，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于si‐NC組的0.99±0.05。并且，與si‐NC組相比si‐LINC00520組減少遷移細(xì)胞數(shù)，提高E‐cadherin蛋白水平，并且降低N‐cadherin蛋白水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.5 過(guò)表達(dá)LⅠNC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549細(xì)胞活性和克隆形成的影響如表5、圖5所示，龍膽苦苷高劑量+pcDNA‐LINC00520組A549細(xì)胞活性和克隆形成數(shù)均高于龍膽苦苷高劑量+pcDNA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 龍膽苦苷對(duì)A549中E‐cadherin、N‐cadherin蛋白表達(dá)的影響Fig.2 Effect of gentiopicroside on the expression of E‐cad-herin and N‐cadherin in A549

表3 干擾LINC00520表達(dá)的A549細(xì)胞活性和克隆形成的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.3 Activity and clonal formation of A549 cells inter-fering with LINC00520 expression（±s，n=3）

表3 干擾LINC00520表達(dá)的A549細(xì)胞活性和克隆形成的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.3 Activity and clonal formation of A549 cells inter-fering with LINC00520 expression（±s，n=3）

Note：Compared with the si‐NC group，1）P＜0.05.

Clone formation number 104.67±3.30 47.67±1.701）26.596 0.000 Groups si‐NC si‐LINC00520 t P OD 490 nm 1.16±0.08 0.50±0.031）13.380 0.000

圖3 干擾LINC00520對(duì)A549克隆形成的檢測(cè)Fig.3 Detection of A549 clone formation by interference with LINC00520

2.6 過(guò)表達(dá)LⅠNC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549遷移的影響如表6、圖6所示，龍膽苦苷高劑量+pcDNA‐LINC00520組A549細(xì)胞的LINC00520的表達(dá)量、遷移細(xì)胞數(shù)高于龍膽苦苷高劑量+pcDNA組，E‐cadherin蛋白水平低于龍膽苦苷高劑量+pcDNA組，以及N‐cadherin蛋白水平高于龍膽苦苷高劑量+pcDNA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 干擾LINC00520表達(dá)的A549遷移細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.4 Detection of A549 migration cells interfering with LINC00520 expression（±s，n=3）

表4 干擾LINC00520表達(dá)的A549遷移細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.4 Detection of A549 migration cells interfering with LINC00520 expression（±s，n=3）

Note：Compared with the si‐NC group，1）P＜0.05.

N‐cadherin protein 0.78±0.05 0.13±0.011）22.079 0.000 Groups LINC00520 si‐NC si‐LINC00520 t P 0.99±0.05 0.29±0.021）22.514 0.000 Migration cells Number 230.67±3.30 112.00±2.451）50.010 0.000 E‐cadherin protein 0.13±0.01 0.67±0.041）22.685 0.000

圖4 干擾LINC00520對(duì)A549中E‐cadherin、N‐cadherin蛋白表達(dá)的影響Fig.4 Effect of LINC00520 interference on the expression of E‐cadherin and N‐cadherin in A549

表5 過(guò)表達(dá)LINC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549細(xì)胞活性和克隆形成的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.5 Detection of cell viability and clone formation of gentiopicroside treated A549 cells by overexpres-sion of LINC00520（±s，n=3）

表5 過(guò)表達(dá)LINC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549細(xì)胞活性和克隆形成的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.5 Detection of cell viability and clone formation of gentiopicroside treated A549 cells by overexpres-sion of LINC00520（±s，n=3）

Note：Compared with the high dose gentiopicroside+pcDNA group，1）P＜0.05.

Groups OD 490 nm High dose gentiopicroside+pcDNA High dose gentiopicroside+pcDNA‐LINC00520 0.63±0.03 Clone forma-tion number 56.00±2.16 1.07±0.051）92.67±2.871）17.682 0.000 t P 13.070 0.000

表6 過(guò)表達(dá)LINC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549遷移細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.6 Number of A549 migration cells treated with gentiopicroside by overexpression of LINC00520（±s，n=3）

表6 過(guò)表達(dá)LINC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549遷移細(xì)胞數(shù)的檢測(cè)（±s，n=3）Tab.6 Number of A549 migration cells treated with gentiopicroside by overexpression of LINC00520（±s，n=3）

Note：Compared with the high dose gentiopicroside+pcDNA group，1）P＜0.05.

Groups High dose gentiopicroside+pcDNA High dose gentiopicroside+pcDNA‐LINC00520 LINC00520 Migration cells number E‐cadherin protein N‐cadherin protein 0.48±0.03 130.67±2.87 0.58±0.03 0.23±0.02 0.86±0.051）217.67±3.681）0.23±0.021）0.62±0.041）15.105 0.000 t P 11.288 0.000 31.865 0.000 16.813 0.000

圖5 過(guò)表達(dá)LINC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549克隆形成的檢測(cè)Fig.5 Detection of gentiopicroside treated A549 clone by overexpression of LINC00520

圖6 過(guò)表達(dá)LINC00520對(duì)龍膽苦苷處理的A549中E‐cad-herin、N‐cadherin蛋白表達(dá)的影響Fig.6 Effect of overexpression of LINC00520 on expres-sion of E‐cadherin and N‐cadherin in gentiopicro-side treated A549

3 討論

肺癌是致命的癌癥之一，急需開(kāi)發(fā)出新穎的治療策略，以降低其發(fā)病率和死亡率。長(zhǎng)期以來(lái)，植物來(lái)源的天然產(chǎn)物一直被認(rèn)為是抗癌劑的來(lái)源［12‐13］。龍膽苦苷是一種重要的植物次生代謝產(chǎn)物，作為一種環(huán)烯醚萜苷類(lèi)成分，它對(duì)癌癥的治療效果更好，毒性更低［14］。研究表明，龍膽苦苷通過(guò)劑量和時(shí)間依賴(lài)性來(lái)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)凋亡，并也通過(guò)抑制周期和抑制遷移對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞表現(xiàn)出治療作用，而對(duì)正常細(xì)胞系HUVEC的抑制作用較?。?2］。LI等［15］觀察到龍膽苦苷對(duì)SKOV3卵巢癌細(xì)胞顯示出顯著的抗癌活性，這歸因于其誘導(dǎo)線粒體凋亡，細(xì)胞周期停滯以及抑制細(xì)胞遷移和侵襲。本研究對(duì)龍膽苦苷的抗肺癌作用進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)10 μmol/L龍膽苦苷對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖和遷移能力無(wú)明顯影響，而20 μmol/L、40 μmol/L龍膽苦苷能夠顯著減弱肺癌A549細(xì)胞的活性、克隆形成數(shù)、遷移細(xì)胞數(shù)、N‐cadherin蛋白表達(dá)，增強(qiáng)E‐cad-herin蛋白表達(dá)，且40μmol/L龍膽苦苷作用效果更顯著，這說(shuō)明龍膽苦苷具有一定的抗肺癌能力。與前人研究［相吻合，為龍膽苦苷成為潛在的腫瘤抑制劑提供了新的證據(jù)［4，15］。

LINC00520是一種高度保守的lncRNA，在各種組織中廣泛表達(dá)。資料顯示，LINC00520在多種腫瘤中起作用，可能成為癌癥治療的有效靶標(biāo)［16］。LINC00520高表達(dá)已在甲狀腺乳頭狀癌組織和細(xì)胞系中得到驗(yàn)證，LINC00520干擾使甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞增殖，遷移和體外侵襲顯著減少，并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加［17］。LINC00520被發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤組織中過(guò)表達(dá)，其高表達(dá)是黑色素瘤患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。LINC00520促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞的增殖，侵襲和遷移，發(fā)揮其致癌作用［18］。在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞和組織中，LINC00520被上調(diào)，沉默LINC00520可以促進(jìn)放射敏感性，并抑制頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中的細(xì)胞增殖，遷移［19］。由此可見(jiàn)，LINC00520是癌癥中的致癌因子。但是，到目前為止，尚未研究LINC00520在肺癌中的作用。在這項(xiàng)研究中，干擾LINC00520還被證明可以顯著抑制肺癌A549細(xì)胞的活性、克隆形成、遷移、N‐cadherin蛋白表達(dá)，促進(jìn)E‐cadherin蛋白表達(dá)，顯示出抑制肺癌效果。

研究表明，一些天然成分對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用過(guò)程和機(jī)制涉及l(fā)ncRNA［20］。例如，鹽酸青藤堿通過(guò)抑制卵巢癌細(xì)胞中l(wèi)ncRNA HOST2表達(dá)發(fā)揮抗腫瘤作用，小檗堿誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌細(xì)胞活力抑制和細(xì)胞凋亡激活是通過(guò)上調(diào)lncRNA CASC2實(shí)現(xiàn)的［21‐22］。但是，肺癌細(xì)胞中LINC00520與龍膽苦苷之間的特定功能關(guān)聯(lián)尚未可知。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)qRT‐PCR分析，發(fā)現(xiàn)A549細(xì)胞 中LINC00520表 達(dá) 被20 μmol/L、40 μmol/L龍膽苦苷所抑制，提示LINC00520可能是龍膽苦苷抗肺癌細(xì)胞增殖和遷移的重要調(diào)節(jié)劑。此外，功能獲得測(cè)定結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)LINC00520后，龍膽苦苷抑制A549細(xì)胞活性、克隆形成數(shù)、遷移細(xì)胞數(shù)、N‐cadherin蛋白表達(dá)的作用，和其促進(jìn)E‐cadherin蛋白表達(dá)的作用被逆轉(zhuǎn)，說(shuō)明龍膽苦苷通過(guò)下調(diào)LINC00520表達(dá)來(lái)發(fā)揮其抗肺癌作用。

總之，當(dāng)前的研究表明，20 μmol/L、40 μmol/L龍膽苦苷可降低肺癌A549細(xì)胞的增殖和遷移能力。此外，機(jī)理研究表明，龍膽苦苷下調(diào)LINC00520的表達(dá)水平發(fā)揮其在肺癌中的抑制功能。因此，龍膽苦苷可能是肺癌患者的潛在治療藥物，靶向LINC00520可能作為龍膽苦苷抗肺癌作用的重要治療靶點(diǎn)。