陳倩娟 王利霞 侯玉雷 付裕

（銳德檢測(cè)（天津）技術(shù)有限公司 天津 300000）

1 前言

我國(guó)是畜肉生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó), 為防止畜類(lèi)疫病發(fā)生, 獸藥被廣泛應(yīng)用于對(duì)畜類(lèi)的治療。 獸藥的使用可以降低畜禽發(fā)病率與死亡率、提高飼料利用率、促生長(zhǎng)和改善產(chǎn)品的品質(zhì)。但是，由于科學(xué)知識(shí)的缺乏和經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使， 非法使用獸藥的現(xiàn)象普遍存在。 GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》、農(nóng)業(yè)部公告第560 號(hào)獸藥地方標(biāo)準(zhǔn)廢止目錄、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250 號(hào)食品動(dòng)物中禁止使用的藥品及其他化合物清單中均對(duì)食品動(dòng)物藥物殘留進(jìn)行了規(guī)定, 其中包括甲硝唑、 氯霉素類(lèi)、磺胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)等獸藥。 國(guó)標(biāo)方法采用的是分類(lèi)檢測(cè)各類(lèi)獸藥, 優(yōu)點(diǎn)是樣品前處理適用范圍廣,缺點(diǎn)是樣品前處理復(fù)雜, 完成不同種類(lèi)的獸藥檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)。 現(xiàn)在迫切需要建立畜肉中獸藥多殘留的高通量快速檢測(cè)方法，簡(jiǎn)化前處理步驟、降低試劑消耗量已成為快速分析獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。建立對(duì)多種獸殘留的檢測(cè)方式，對(duì)監(jiān)測(cè)畜產(chǎn)品的獸藥殘留和保障動(dòng)物源性食品安全有至關(guān)重要的作用。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

儀器配置：Ultimate 3000 和 TSQ ENDURA 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用； 色譜柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；SHIMSEN QuEChERS 多獸殘專用提取包 （P/N 380-00155）；SHIMSEN QVet-NM+凈化柱（P/N：380-00925-16）；進(jìn)樣小瓶、移液器。

2.2 分析條件

2.2.1 5 種沙星的UHPLC 條件

色譜柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水B：甲醇；

梯度洗脫程序如下：

質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI，正負(fù)離子同時(shí)掃描掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；碰撞氣：氬氣鞘氣：氮?dú)饬魉伲?5 Arb；霧化氣：氮?dú)饬魉伲? Arb 輔助氣：氮?dú)饬魉伲? Arb；離子傳輸管溫度：350℃脫溶劑溫度：350℃。

表1

2.2.2 磺胺UHPLC 條件

色譜柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水，B：乙腈。

梯度洗脫程序如下：

質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI，正負(fù)離子同時(shí)掃描掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；碰撞氣：氬氣鞘氣：氮?dú)饬魉伲?0 Arb；霧化氣：氮?dú)饬魉伲? Arb 輔助氣：氮?dú)饬魉伲?0 Arb；離子傳輸管溫度：320℃脫溶劑溫度：350℃。

表2

2.2.3 氯霉素UHPLC 條件

色譜柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水，B：甲醇；

梯度洗脫程序如下：

質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI，正負(fù)離子同時(shí)掃描掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；碰撞氣：氬氣鞘氣：氮?dú)饬魉伲?0 Arb；霧化氣：氮?dú)饬魉伲? Arb 輔助氣：氮?dú)饬魉伲? Arb；離子傳輸管溫度：325℃脫溶劑溫度：400℃。

表3

2.2.4 甲硝唑UHPLC 條件

色譜柱：Hypersil GOLD Dim.（mm）：100×2.1；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：10μ0；柱溫：40℃；流動(dòng)相：A：0.1%甲酸水；B：甲醇。

梯度洗脫程序如下：

質(zhì)譜條件

離子化模式：ESI，正負(fù)離子同時(shí)掃描掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；碰撞氣：氬氣鞘氣：氮?dú)饬魉伲?5 Arb；霧化氣：氮?dú)饬魉伲? Arb 輔助氣：氮?dú)饬魉伲? Arb； 離子傳輸管溫度： 350℃脫溶劑溫度：350℃。

表4

2.3 樣品前處理

2.3.1 SHIMSEN QuEChERS 樣品提取

精確稱取豬肉樣品5.0 g，加5 mL 5%甲酸乙腈渦旋混勻30 s，加入SHIMSEN QuEChERS 多獸殘專用提取包 （5010-050123 QuEChERS Extract Tubes for Vet Drugs In Foods 50/p），渦旋混勻 30s，8000r/min離心5 min，取2 mL 上清液待凈化。

2.3.2 SHIMSEN QuEChERS 樣品凈化

將2 mL 提取液轉(zhuǎn)移至SHIMSEN QuEChERS多獸殘專用凈化包 （5010-015204 QuEChERS Dispersive。 Tubes for Vet Drugs In Foods 100/p）中，渦旋混合 30 s，8 000 r/min 離心 5 min，取上清液1mL，加200 μL 水渦旋混勻，室溫下氮吹至近干，加10%甲醇水定容至1 mL，超聲溶解，過(guò)0.22 μm 微孔濾膜，進(jìn)LC-MS/MS 分析。

2.3.3 SHIMSEN QVet-NM+樣品提取

精確稱取豬肉樣品5 g， 加入5 g 無(wú)水硫酸鈉、均質(zhì)子，震蕩提取1 min，加入10 mL 的1%醋酸乙腈溶液，劇烈震蕩提取10 min，8 000 r/min 離心5 min，上清液備用。

2.3.4 SHIMSEN QVet-NM+樣品凈化

準(zhǔn)確吸取5 mL 萃取液置于SHIMSEN QVet-NM+萃取套組， 以每秒1 滴流速加壓， 濾液過(guò)0.22 μm 濾膜，取 1 mL 濾液上機(jī)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品的MRM 譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1

3.2 豬肉中多種獸藥的LC-MS/MS SHIMSEN QuECh- ERS 檢測(cè)添加回收結(jié)果，見(jiàn)表5。

表5

3.3 豬肉中多種獸藥的LC-MS/MS SHIMSEN QVet- NM+ 檢測(cè)添加回收結(jié)果，見(jiàn)表6。

表6

4 結(jié)論

本文采用島津的 SHIMSEN QuEChERS 和SHIMSEN QVet-NM+產(chǎn)品對(duì)豬肉樣品進(jìn)行凈化，Hypersil GOLD 色譜柱進(jìn)行分離，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，對(duì)豬肉基質(zhì)中5 種沙星、氯霉素、甲硝唑、磺胺類(lèi)藥物進(jìn)行分析，其中SHIMSEN QVet-NM+在第一步提取時(shí)加入無(wú)水硫酸鈉易結(jié)塊，有可能對(duì)目標(biāo)物提取不充分。 該方法操作簡(jiǎn)單、分析速度快、重現(xiàn)性好，適用于豬肉中多獸藥殘留量的同時(shí)測(cè)定。