馬春秀，王利彥，呂慧玲，寇毅英

(青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青海 西寧 810001)

藏藥古方十味乳香散的降血尿酸作用效果、機(jī)制不明。本研究擬在高尿酸血癥動(dòng)物模型上，通過(guò)現(xiàn)代藥理學(xué)研究手段，觀(guān)察作用效果并初步探討可能作用機(jī)制。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物

十味乳香散由乳香250 g、決明子250 g、黃葵子250 g、木香250 g、巴夏嘎70 g、訶子250 g、毛訶子250 g、余甘子250 g、寬筋藤250 g、渣馴膏250 g組成，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻后備用，由青海省藏醫(yī)院制備。低、中、高十味乳香散劑量組混懸液的制備按照成人每公斤體重用量的10、20、30倍(即0.3、0.6、0.9g/kg，成人的推薦劑量為每日2.1g) 配置混懸液備用。

1.1.2 試劑、儀器設(shè)備

氧嗪酸鉀鹽(PO)購(gòu)自瑞士Adamas Reagent 公司，酵母膏購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司，尿酸檢測(cè)試劑盒(磷鎢酸法)、肌酐測(cè)定試劑盒(苦味酸法)和黃嘌呤氧化酶檢測(cè)試劑盒(比色法)由南京建成生物工程研究所提供，總蛋白測(cè)定試劑盒BCA購(gòu)自美國(guó)Pierce公司，別嘌呤醇片購(gòu)自浙江海正制藥有限公司，苯溴馬隆購(gòu)自成都華神制藥廠(chǎng)，DU800分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)Beckman公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD大鼠(250±20g)、雄性昆明種小鼠(22±2g)均購(gòu)自蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-2004-0006。

1.2 方法

1.2.1 觀(guān)測(cè)十味乳香散對(duì)正常健康大鼠血尿酸(SUA)水平影響的方法

將大鼠隨機(jī)分為4組(n=10)：正常組，十味乳香散低、中、高劑量組。正常組灌胃(生理鹽水)；十味乳香散低、中、高劑量組灌胃(低、中，高劑量的十味乳香散0.3、0.6、0.9g/kg)，每天1次，連續(xù)7 d，末次給藥后2 h于大鼠尾尖取血，取血前大鼠應(yīng)禁食不禁水12 h，取血后離心(3500 r/min)15 min取血清測(cè)定血清尿酸水平。

1.2.2 觀(guān)測(cè)十味乳香散對(duì)高尿酸血癥(尿酸酶抑制法)大鼠血尿酸(SUA)、血肌酐(SCr)、尿尿酸(UUA)、尿肌酐(UCr)影響的方法

將大鼠隨機(jī)分為7組(n=10)：正常組，模型組，十味乳香散低、中、高劑量組，別嘌呤醇陽(yáng)性組，苯溴馬隆陽(yáng)性組。正常組和模型組灌胃(生理鹽水)；十味乳香散低、中、高劑量組灌胃(0.3、0.6、0.9g/kg十味乳香散)；別嘌呤醇陽(yáng)性組灌胃(5mg/kg別嘌呤醇)；苯溴馬隆陽(yáng)性組灌胃(10mg/kg苯溴馬隆)；每天1次，連續(xù)7 d。第7 d時(shí)除正常組外，其余各組在末次給藥前l(fā) h于大鼠腹腔注射PO(250mg/kg)，給藥后2 h于大鼠尾尖取血，離心(3500r/min)15 min取血清測(cè)定血清SUA、血清SCr。以PO造模后5 h，取用烏拉坦麻醉取血后的大鼠尿液檢測(cè)UUA、UCr水平。

1.2.3 觀(guān)測(cè)十味乳香散對(duì)高尿酸血癥(酵母法)小鼠SUA及肝臟XOD活性影響的方法

將小鼠分為6組(n=10)：正常組，模型組，十味乳香散低、中、高劑量組，別嘌呤醇組。除正常組外，其余各組以酵母膏一天分兩次灌胃(30g/kg)，連續(xù)8 d，造模第2 d開(kāi)始灌胃給藥，正常組和模型組以生理鹽水灌胃；十味乳香散低、中、高劑量組以十味乳香散灌胃(0.3、0.6、0.9g/kg)；別嘌呤醇陽(yáng)性組以十味乳香散灌胃(5mg/kg)；每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后小鼠摘眼球取血分離血清，測(cè)定血清SUA、SCr水平，同時(shí)取肝臟稱(chēng)重、剪碎，加入生理鹽水，勻漿，離心，取上清液測(cè)定XOD活性。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 十味乳香散對(duì)正常健康大鼠SUA水平的影響結(jié)果

表1顯示，與正常組比較，經(jīng)十味乳香散低、中、高劑量(0.3、0.6、0.9g/kg)給藥干預(yù)后的大鼠SUA水平均顯著降低(P<0.05)。

表1 十味乳香散對(duì)正常健康大鼠SUA水平的影響結(jié)果

2.2 十味乳香散對(duì)PO所致高尿酸血癥大鼠SUA、UUA、SCr、UCr水平的影響結(jié)果

表2顯示，大鼠腹腔注射PO后SUA水平明顯高于正常組(P<0.05)，UUA與正常組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。別嘌呤醇陽(yáng)性組能明顯降低由PO升高的SUA水平(P<0.05)，并降低UUA水平(P<0.05)。苯溴馬隆陽(yáng)性組SUA水平降低(P<0.05)，UUA未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；十味乳香散各劑量組(0.3、0.6、0.9g/kg)能明顯降低PO所致高尿酸血癥大鼠SUA水平(P<0.05)，同時(shí)致UUA水平降低(P<0.05)。另外與正常組比較，模型組SCr、UCr未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05)，各藥物組除十味乳香散高劑量組UCr水平明顯降低(P<0.05)外，其余各組未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

表2 十味乳香散對(duì)PO所致高尿酸血癥大鼠SUA、UUA、SCr及UCr水平的影響結(jié)果

2.3 十味乳香散對(duì)酵母所致高尿酸血癥小鼠SUA、SCr及肝臟XOD活性的影響結(jié)果

表3顯示，與正常組比較，模型組連續(xù)灌胃給藥(酵母膏，30g/kg)后SUA及XOD活性升高(P<0.05)。與模型組比較，灌胃以低、中、高劑量的十味乳香散(0.3、0.6、0.9g/kg)和別嘌呤醇后，高尿酸血癥小鼠SUA水平明顯降低(P<0.05)，同時(shí)肝臟XOD水平被顯著性抑制(P<0.05)。

表3 十味乳香散對(duì)酵母所致高尿酸血癥小鼠SUA，SCr水平及肝臟XOD活性的影響

3.討論

高尿酸血癥是人體內(nèi)嘌呤代謝發(fā)生紊亂而引起的代謝性疾病。高尿酸血癥與高血壓、糖尿病、慢性腎功能不全，以及心血管疾病高度相關(guān)，尿酸升高可以直接或間接增加心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)和死亡風(fēng)險(xiǎn)[1-4]。據(jù)調(diào)查[5，6]，中國(guó)成年人高尿酸血癥的發(fā)病率為8.4%。

連續(xù)8天灌胃(酵母膏，2次/天，30g/kg)建立高尿酸血癥模型。當(dāng)大量酵母進(jìn)入機(jī)體后致嘌呤代謝紊亂。主要表現(xiàn)為黃嘌呤氧化酶活性增加，加速尿酸生成，造模機(jī)理與人類(lèi)嘌呤代謝紊亂引起高尿酸血癥機(jī)理一致[7]。腹腔注射PO(250mg/kg)建立急性大鼠高尿酸血癥模型，PO可抑制大鼠體內(nèi)尿酸酶活性，阻礙尿酸分解，此種模型在國(guó)際上的使用較為普遍[8]。

藏藥古方十味乳香散具有祛風(fēng)燥濕及干“黃水”的作用，用于濕疹、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等風(fēng)濕痹證[9]，對(duì)高尿酸血癥的影響未見(jiàn)報(bào)道。本研究顯示，十味乳香散可明顯降低動(dòng)物血和尿中的尿酸水平，并抑制肝臟XOD活性。結(jié)果提示十味乳香散通過(guò)抑制尿酸合成而產(chǎn)生降尿酸作用，其可能作用機(jī)制是抑制XOD活性。