文/秦燕飛

艾滋病稱之為獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），其病原體為人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV），又稱之為艾滋病病毒。艾滋病作為一類傳染性疾病，威脅我國群眾健康安全[1]。至2005年我國制定第一版艾滋病診斷指南，隨后2011年和2015年、2018年分別進行更新，對其內(nèi)容進行完善。目前艾滋病病毒1型（HIV-1）為目前艾滋病感染常見病原型，占據(jù)總發(fā)病人群95%以上[2]。當(dāng)人體感染艾滋病病毒后，其潛伏時限為8～9年，患者感染后臨床癥狀表現(xiàn)不顯著，其外表與常人相比較無差異，但HIV感染后會對人體免疫系統(tǒng)攻擊，侵犯并進入機體細胞后，清除率偏低，造成T4淋巴組織細胞受損，人體因免疫系統(tǒng)偏低并感染各類疾病，成為艾滋病患者死亡重要因素。而對感染者及其潛伏者診斷常見措施為體液病毒抗原及抗體檢測，優(yōu)勢為操作簡便，應(yīng)用普遍，以抗體檢測多見[3-4]。但HIV P24抗原及病毒基因測定在HIV感染檢測地位和重要性受到重視。文章就艾滋病實驗室診斷情況如下分析，現(xiàn)報道如下。

1 抗體檢測

1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗

酶聯(lián)免疫吸附試驗為一類方便篩查方式，目前應(yīng)用方便且范圍廣泛，而間接酶聯(lián)免疫吸附試驗中血清樣本中HIV抗原被固相載體包裹并相互反應(yīng)，酶標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體，與底物顯色反應(yīng)，可作為樣本是否存在HIV抗體方式。目前酶聯(lián)免疫吸附試驗中，其試劑發(fā)展至第4代[5]。完全病毒裂解產(chǎn)物歸為第1代試劑抗原，實施間接酶聯(lián)免疫吸附試驗后，可判斷是否存在抗體，因內(nèi)部檢測中雜質(zhì)較多存在敏感性、特異性限制，結(jié)果呈現(xiàn)假陽性。第2代則作為重組、合成多肽抗原，依舊選擇間接酶聯(lián)免疫吸附試驗進行抗體檢測，并對HIV-1、HIV-2水平檢測，提升敏感性、特異性[6]。由于第2代試劑基于基因工程抗原，以重組抗原載體組成部分問題，檢測期間假陽性偏高。第3代試劑抗原人工合成中，HIV抗原決定簇多肽，基于雙抗原夾心法檢測，分析優(yōu)勢上能檢測HIV抗原相關(guān)抗體亞型，檢測敏感性顯著提升，但仍然存在漏檢情況[7]。第4代則基于HIV抗原以及抗體聯(lián)合試劑，檢測P24抗原、HIV-1及HIV-2抗體，敏感度高，縮短HIV感染后檢測窗口期。目前常見為第3代試劑，第4代試劑被作為國家血源篩查。

1.2 膠體金快速檢測實驗

基于HIV特性，對檢測手段要求上不僅僅具有高度特異性及靈敏度，需要具備方便快捷。HIV檢測中應(yīng)用膠體金快速檢測實驗可短時間內(nèi)獲得結(jié)果，被廣泛用于急診檢測?；诎籋IV抗原顆粒凝集檢測抗體存在，依據(jù)凝集反應(yīng)判斷結(jié)果[8]。對該類方法結(jié)果判讀上，檢測區(qū)與質(zhì)控區(qū)同時顯示出一條紅線，則HIV抗體陽性，僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅線，則為HIV抗體陰性。此時檢測區(qū)與質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紅色條帶表明本次試驗開展無效。選擇膠體金快速檢測試驗干預(yù)，優(yōu)勢為操作簡便及結(jié)果易判定，可適用于單份標(biāo)本檢測。

2 HIV抗原檢測

HIV-1核心蛋白為P24抗原，當(dāng)HIV侵入機體后，此時機體內(nèi)P24水平會隨著病毒復(fù)制發(fā)展，患者早期樣本中，HIV-1P24抗原可被檢測，對樣本檢測期間，其時間早于HIV抗體，為此，臨床早期感染可應(yīng)用P24抗原判斷，縮短窗口期[9]。當(dāng)感染2～3周后可檢測出P24，抗體中和則減少游離抗原，造成抗原檢測結(jié)果影響，且機體并進入無癥狀感染期。疾病后期時，病毒復(fù)制能力增強，P24水平隨之上升，為此，對HIV早期診斷可選擇P24抗原檢測，其濃度變化可反應(yīng)患者病情進展。目前常見診斷方法包括放射免疫分析、酶聯(lián)免疫吸附試驗等有效手段[10]。但仍然存在假陽性可能，仍需進一步開展確證試驗。研究指出[11]，第四代酶聯(lián)免疫吸附試驗中聯(lián)合P24抗原檢測系統(tǒng)，結(jié)果顯示，其準(zhǔn)確性顯著高于單獨第四代酶聯(lián)免疫吸附試驗、P24抗原。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，隨著抗原檢測新方法不斷更新、應(yīng)用，如免疫復(fù)合物裂解檢測法、超敏感酶免疫測定法等。

3 HIV核酸檢測

HIV病毒研究、血液篩查中常見且廣泛定量核酸方式之一為反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）。對其原理分析：基于血漿中HIVRNA，基于病毒基因組幾個保守長末端重復(fù)序列、gag、int 和 pol區(qū)域設(shè)計HIV特異性引物，將亞型范圍擴大且覆蓋，經(jīng)PCR擴增后，并得到cDNA，基于序列特異性熒光探針，對每個擴增周期新生DNA均開展實時定量檢測。而目前最為廣泛兩種檢測方法為雅培Real time HIV-1 PCR 和羅氏 Cobas Taq-Man[12]。核酸序列擴增試驗為目標(biāo)核酸擴增法，為一類等溫擴增系統(tǒng)，對其原理分析上，系統(tǒng)內(nèi)混合酶系統(tǒng)體外模擬反轉(zhuǎn)錄病毒，可在細胞內(nèi)復(fù)制過程，如Bio Mérieux Nucli Sens Easy Q HIV-1 v2.0和Hologic Aptima HIV-1。對其檢測范圍為40～107拷貝/ml[13]。上述方式應(yīng)用上對A～G各亞型均起到較好反應(yīng)，對各種生物樣品測定，且各類抗凝劑均適用，對樣本提取、測定反應(yīng)上，仍需大量手工操作。

4 淋巴細胞亞群檢測

T淋巴細胞分類中，CD4＋代表輔助T細胞，CD8＋代表抑制細胞、殺傷T細胞。當(dāng)HIV感染后，人體共計靶細胞以CD4＋淋巴細胞為主，此時細胞減少，CD8＋水平上升，造成CD4＋/ CD8＋細胞比值倒置，以細胞免疫功能受損為表現(xiàn)[14]。當(dāng)HIV感染后，CD4＋T淋巴細胞計數(shù)反應(yīng)人體免疫狀態(tài)及其病程進展，并明確疾病分期及治療效果判斷、HIV感染者臨床并發(fā)癥。目前常用流式細胞數(shù)獲取CD4＋T淋巴細胞數(shù)絕對值[15]。因此，CD4＋/ CD8＋比值能評估患者病情嚴(yán)重程度、治療時機及預(yù)后情況，當(dāng)比值越低，則表明細胞免疫缺陷越嚴(yán)重。

5 小結(jié)

HIV實驗室技術(shù)被用于HIV感染診斷、流行病學(xué)調(diào)查及血液篩查等多個方面，對HIV感染預(yù)防控制、艾滋病臨床治療起著重要輔助作用。隨著現(xiàn)代醫(yī)療科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，HIV實驗室診斷逐漸向早期、快速、敏感及準(zhǔn)確方向發(fā)展，后續(xù)不斷發(fā)展一些新的技術(shù)可逐步應(yīng)用于上述領(lǐng)域，此時HIV診斷及治療技術(shù)上一個新的臺階。