李姣清， 黃勛和， 余史婷， 翁茁先，2， 張寶菁， 李威娜

（1.廣東省山區(qū)特色農(nóng)業(yè)資源保護與精準利用重點實驗室，廣東省五華三黃雞科技創(chuàng)新中心，嘉應學院生命科學學院，廣東梅州514015；2.湖南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，湖南長沙410128）

抗生素在一定濃度下能抑制和殺死細菌類微生物，抑制腸道有害菌繁殖，降低發(fā)病率，但不規(guī)范的使用也會導致病原微生物產(chǎn)生耐藥性，引發(fā)腸道菌群失衡，且其經(jīng)過消化吸收后會隨血液分布到機體的各個器官組織，使機體的免疫能力下降，影響其健康生長（方磊涵，2018；郭鵬等，2017）。 抗生素長期使用還會讓其中的有害成分沉積在畜禽體內(nèi)，嚴重危害到人體健康，世界各國分別在不同時期限制或禁止抗生素在動物飼料中的應用。 因此，尋找安全有效的抗生素替代品成為目前迫在眉睫的問題。 中草藥存在于大自然中，是我國傳統(tǒng)醫(yī)學預防疾病所用的藥物，既能抗病保健，提高生產(chǎn)性能，同時又具有低毒副作用、不易產(chǎn)生耐藥性、無藥物殘留等優(yōu)點，是一種理想的取代抗生素的綠色飼料添加劑（魏恒，2018；王清峰，2018）。 因此本試驗擬篩選出合適的中草藥復方制劑作為飼料添加劑，探索其對三黃雞育雛階段血液生化指標和免疫功能的影響，確定中草藥添加劑的最佳配伍組合和最佳劑量，為其作為有效的抗生素替代品應用于實際生產(chǎn)提供理論依據(jù)和實踐參考。

1 材料與方法

1.1 中草藥制劑的制備 試驗用復方中草藥以抗菌消炎、理氣消食、益脾健胃及增強免疫為組方原則配制。 中草藥添加劑主要成分為黃芪、人參、土炒白術、當歸、陳皮、山楂、甘草、柴胡、熟地、玄參、生地等，購于梅州市中醫(yī)院醫(yī)院。 采用水煎法提取中草藥有效成分，稱取藥材10.0 g，加10 倍量蒸餾水浸泡30 min， 加熱至沸騰文火保持30 min，用六層紗布過濾，藥渣再加8 倍量蒸餾水，加熱至沸騰文火保持30 min，六層紗布過濾，合并2次濾液， 濾液經(jīng)80 ℃恒溫水浴濃縮至原生藥量1.0 g/mL，115 ℃高壓滅菌20 min，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗動物分組及管理 健康的1 日齡五華三黃雞（150 羽），由廣東客家黃畜牧有限公司提供。基礎日糧適應性飼喂至7 d 后隨機分成5 組，每組3 個重復，每個重復10 羽。 試驗期共42 d。Ⅰ組為空白對照組，飼喂基礎日糧；Ⅱ組為抗生素組，在基礎日糧中按阿莫西林粉劑使用說明添加0.06%的量， 阿莫西林可溶性粉購自河南健恒動物藥業(yè)有限公司； Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅴ組分別在基礎日糧中添加0.7、1.0、1.3 g/kg 中草藥制劑。舍內(nèi)籠養(yǎng)，自由采食、飲水，自然通風光照，防疫程序按常規(guī)進行，1 日齡馬立克疫苗，7 日齡新城疫滴鼻，21 日齡肌肉注射新城疫油乳劑滅活苗。 基礎日糧組成分0 ～ 21 d和22 ～ 42 d 兩階段，參照我國肉雞標準（李連任，2013）配制，基礎日糧組成見表1。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集及指標測定

1.3.1 生長指標的測定 試驗期間每天早上8:30對試驗雞進行空腹稱重，記錄增重情況。

1.3.2 血液生化指標的測定 三黃雞42 日齡時，每個重復隨機抽取3 只雞，于翅靜脈采血，離心后吸取上層血清于4 ℃保存， 通過全自動生化分析儀進行血液指標檢測。

1.3.3 免疫器官指數(shù)的測定 三黃雞42 日齡時，每個重復選取3 只接近該重復平均體重的三黃雞屠宰，分離脾臟、胸腺、法氏囊，用濾紙吸干血水后稱鮮重，計算其免疫器官指數(shù)：

免疫器官指數(shù)=免疫器官質量 （g）/活體質量（kg）。

1.3.4 血清中球蛋白的測定 三黃雞42 日齡時，每重復組選取3 只接近該重復平均體重的三黃雞雞，通過翅靜脈采血2 mL 于離心管中，并分離血清，置-20 ℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定血清中免疫球蛋白A （IgA） 、 免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM ） 含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 數(shù)據(jù)處理 本試驗所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS 22.0 進行單因素方差分析和Duncan’s 法進行多重比較，結果用“平均值±標準誤“表示，以P < 0.05 為差異顯著判斷標準。

2 結果與分析

2.1 中草藥飼料添加劑對三黃雞體重的影響由表2 可知， 中草藥Ⅳ組三黃雞平均日增重較對照組比提高了11.94%，差異顯著（P < 0.05），同時也明顯優(yōu)于抗生素處理（P < 0.05）；中草藥處理Ⅳ組的三黃雞成活率高于對照組， 但與抗生素組相比差異不明顯（P > 0.05），由此可知，基礎日糧中添加適當比例的復方中草藥制劑在三黃雞生長上可以達到和抗生素同樣的促生長效果。

2.2 中草藥飼料添加劑對三黃雞血液生化指標的影響 由表3 可知， 中草藥飼料添加劑可以有效增加三黃雞血液中總蛋白和白蛋白的含量，其中試驗Ⅳ組較對照組和抗生素組相比血清中總蛋白分別增加15.3%、13.5%，差異顯著（P < 0.05）；試驗Ⅳ組血清白蛋白含量與對照組比顯著提高17.6%（P ＜0.05）； 在膽固醇和甘油三酯方面，試驗Ⅳ組顯著低于其他處理組（P < 0.05）；此外試驗組與對照組相比，反映肝功能的谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶含量差異不明顯（P ＞0.05）。

表2 中草藥飼料添加劑對三黃雞體重的影響

表3 中草藥飼料添加劑對三黃雞血液生化指標的影響

2.3 中草藥飼料添加劑對三黃雞免疫器官指數(shù)的影響 由表4 可知， 在三黃雞的基礎日糧中添加不同比例的復方中草藥制劑可影響其免疫器官的發(fā)育， 其中復方中草藥添加Ⅳ組的胸腺和法氏囊發(fā)育指數(shù)與對照組和抗生素相比顯著提高（P <0.05）；試驗Ⅳ組脾臟發(fā)育指數(shù)和法氏囊發(fā)育指數(shù)與對照組相比， 分別提高了11.31%、12.77%（P <0.05）；試驗結果顯示，抗生素對胸腺、脾臟、法氏囊的發(fā)育稍有抑制作用， 但與對照組相比差異不明顯（P > 0.05）。

表4 中草藥飼料添加劑對三黃雞免疫器官指數(shù)的影響

2.4 中草藥飼料添加劑對三黃雞血液非特異性抗體水平的影響 由表5 可知， 復方中草藥添加Ⅳ組血液中IgG 含量顯著高于對照組和抗生素組，分別提高了11.03%、16.05%；復方中草藥添加Ⅳ組血液中IgM 含量較對照組和抗生素組分別提高了17.39%、18.42%； 但血液中IgA 含量在試驗期間各組含量變化無明顯差異（P > 0.05）。 由此可見， 本試驗的復方中草藥制劑可以有效提高三黃雞的非特異免疫能力。

表5 中草藥飼料添加劑對三黃雞血液中非特異性抗體水平的影響 g/L

3 討論

3.1 復方中草藥對三黃雞生長性能的影響 中草藥含有糖類、皂苷類、生物堿、揮發(fā)性物質和有機酸等多種生物活性成分， 在畜禽生產(chǎn)中應用不僅可以預防和治療疾病、 增強機體免疫力和抗病力，還可以補充動物所需營養(yǎng)物質、提高食欲、促進畜禽生長。本試驗中，復方中草制劑組方中的黃芪具有補氣固表的功效，人參可以補脾益肺，土炒白術能健脾益氣，陳皮可理氣健脾，柴胡可解熱抗炎；玄參能解毒散結，生地和甘草可清熱解毒，山楂歸脾、胃和肝經(jīng)，具有消食散瘀、行氣散結和補脾消積的功效， 上述的中草藥配伍為“補中益氣湯”，達到“與陰求陽”的功效。 李姣清等（2020）試驗研究結果表明， 復方中草藥添加到黃羽雞基礎日糧中與對照組相比可以顯著增加黃羽肉雞體重，降低料重比；錫建中等（2015）試驗結果表明，復方中草藥添加到肉雛雞飼料中可以顯著促進雞的生長。本試驗研究結果表明，在三黃雞日糧中添加不同濃度的上述復方中草藥制劑可顯著提高雞生長性能，降低死亡率。

3.2 復方中草藥對三黃雞血清生化指標和肝功能的影響 血液是動物機體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，其各項指標與機體健康狀況密切相關，血液各種化合物含量如果發(fā)生異常變化就會導致機體出現(xiàn)相應的病癥。雷曉軍等（2010）試驗結果表明，添加了復方中草藥制劑的日糧能提高肉仔雞血清總蛋白和白蛋白的含量， 表明肉雞對物質消化吸收的能力增強；于翠平等（2014）報道，添加中草藥飼料添加劑的日糧可極顯著降低肉雞的膽固醇以及甘油三酯的含量， 從而有利于維持機體脂類的正常代謝。本試驗結果顯示，基礎日糧中添加復方中草藥制劑能不同程度地提高三黃雞血清中總蛋白和白蛋白的含量，降低膽固醇和甘油三酯含量，從而說明該復方中草藥制劑可有效促進三黃雞的生長。 肝臟是動物的重要器官，不僅對動物的消化、代謝、排泄和血液循環(huán)有著密切的關系，而且是動物重要的解毒器官，谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶通常是作為衡量肝功能的有效指標， 當毒物或藥物性肝損害時， 轉氨酶活力往往顯著增高。 本試驗顯示， 雞血清中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶的含量與對照組相比均無明顯差異（P ＞0.05） ，說明在日糧中添加本試驗的復方中草藥制劑對雞肝功能無不良影響。

3.3 復方中草藥制劑對三黃雞免疫功能的影響胸腺、脾臟、法氏囊是雞重要的免疫器官，其器官發(fā)育狀態(tài)可在一定程度上反映機體免疫功能的強弱，免疫器官相對質量的增加，說明機體細胞的免疫功能增強。方磊涵等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥的復方多糖對肉仔雞的免疫器官發(fā)育指數(shù)有明顯的提高；石念進等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥復方（黃芪、黨參、茯苓等組成）組雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著高于對照組， 較好地促進了雛雞的免疫器官發(fā)育，有力地增強其免疫力。 本試驗結果表明，日糧中添加不同濃度的復方中草藥制劑能夠提高三黃雞各免疫器官的相對質量，以試驗Ⅳ組（1.0 g/kg復方中草藥制劑）的效果最好。

免疫球蛋白是機體所產(chǎn)生的具有抗體活性的一類蛋白， 能與抗原發(fā)生特異性結合。 賈玉剛等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥飼料添加劑可以顯著提高藏雞血液中IgG 和IgM 的含量， 起到較好的免疫增強作用；Cheng 等（2011）研究表明，飼喂黃芪麻杏石甘湯可以顯著提高被支氣管炎病毒感染的肉雞血液中l(wèi)gA 的水平，提高機體的抗病力。本試驗結果也發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，飼料中添加復方中草藥制劑可以顯著提高三黃雞血液中IgG 和IgM含量， 這表明本試驗中的中草藥復方制劑具有增強機體免疫能力的功效。

4 小結

飼料中添加復方中草藥添加劑可以促進三黃雞增質量，降低集約化舍飼的死亡率，增強機體免疫功能，達到或接近抗生素的添加效果，具有良好的替抗前景。