王運盛，羅 毅，國欣欣，李祥翔，普天春，趙素芬，盧 巖，張成林,,*

(1.北京動物園，北京 100044；2.圈養(yǎng)野生動物技術(shù)北京市重點實驗室)

在野生動物飼養(yǎng)管理工作中，疾病防治工作是其重要的組成部分，而眾多的致病因素中，腫瘤較為少見，但同樣不能忽視。近年來，隨著國內(nèi)圈養(yǎng)野生動物數(shù)量的增加以及野生動物診療工作的深入，腫瘤發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的跡象。然而對于珍惜野生動物來說，如何快速對腫瘤進行確診的同時，能夠盡可能的降低腫瘤取材對動物的影響，成為了現(xiàn)階段需要關(guān)注的問題。

本文以北京動物園圈養(yǎng)犀牛皮膚腫瘤的微創(chuàng)穿刺活檢技術(shù)應(yīng)用為例，通過組織病理學診斷，對該病例進行探討。以期為今后珍惜野生動物腫瘤取材及病理學診斷提供對應(yīng)思路和診療方案。

1 材料與方法

1.1 病料(病例概述)

本病例為北京動物園圈養(yǎng)犀牛，最初發(fā)現(xiàn)該犀角的角質(zhì)層出現(xiàn)輕微壞死、脫落，隨后經(jīng)臨床獸醫(yī)治療，略有穩(wěn)定，但創(chuàng)面出現(xiàn)潰瘍趨勢，有形成感染灶的風險。考慮到持續(xù)創(chuàng)面刺激對犀牛造成不利影響，同時為了防止病變進一步加重；需要對該腫物進行病理學診斷，并根據(jù)病理診斷結(jié)果對犀牛健康狀態(tài)進行評估。隨后進行了角基部活檢，穿刺采樣后進行病理學觀察診斷。

1.2 試驗方法

1.2.1 穿刺活組織取材 犀牛手術(shù)前1天進行隔離觀察，禁食16 h，手術(shù)前對角基部創(chuàng)面進行全面消毒。主治獸醫(yī)采用穿刺針進行活組織穿刺采樣，采樣結(jié)束后及時止血，并外敷止血藥。取材全程犀牛狀態(tài)平穩(wěn)，犀牛采樣前后未發(fā)生不良反應(yīng)。

1.2.2 病料前期處理 采樣后將病料迅速投入10%的福爾馬林液，進行病理切片前處理。經(jīng)固定、修塊后可見病料大小為5×1mm，呈灰黃色，質(zhì)地硬實，偶見出血(圖1)。

圖1 犀牛角基部活檢病料

1.2.3 H.E.染色 石蠟切片分別經(jīng)二甲苯脫蠟，無水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色10 min，

1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，水洗返藍15 min；再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水后，伊紅染色1 min，95%乙醇洗滌，再經(jīng)無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。切片放置于37 ℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢。光學顯微鏡下觀察組織病理學變化情況。

2 結(jié)果與分析

低倍鏡下瘤組織被纖維結(jié)締組織分割成島嶼狀(圖2A)，并伴隨壞死、炎性細胞浸潤、小血管生成(圖2B)。高倍鏡下觀察，島嶼內(nèi)既有基底樣細胞團塊又有鱗狀細胞的分化。小島的邊緣為排列致密的基底樣細胞，而中央為鱗狀細胞，增生的鱗狀上皮表現(xiàn)出從基底細胞到角質(zhì)細胞的良好分化，可見角化珠的形成，同時角化珠壞死，內(nèi)有中性粒細胞浸潤(圖2C，圖2D)。同時高倍鏡下可見基底細胞出現(xiàn)大量細胞核異型性，如X型、Ⅱ型(圖2E、圖2F)。

圖2 犀牛角基部病理學觀察

3 診斷

經(jīng)組織病理學診斷，犀牛角基部腫物為：基底樣鱗狀細胞癌(Basosquamous Carcinoma)。同時由于基底樣鱗狀細胞癌的持續(xù)存在，造成患部長期炎癥反應(yīng)。

4 討論

基底樣鱗狀細胞癌是形態(tài)組織學特性介于基底細胞癌和鱗狀細胞癌之間的一種惡性程度較低的腫瘤，主要由含有鱗狀細胞分化灶的基底樣細胞群構(gòu)成。現(xiàn)有資料顯示該腫瘤不轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除是最有效的治療方案。但如果切除不充分，腫瘤可能在手術(shù)部位復發(fā)。從發(fā)病率來說，基底樣鱗狀細胞癌很罕見，多發(fā)于中老年動物，目前沒有發(fā)現(xiàn)有性別差異。多發(fā)于頭部、頸部還有后肢。該腫瘤發(fā)生于皮內(nèi)，多數(shù)伴隨潰瘍灶出現(xiàn)。

活檢組織病理診斷，是指應(yīng)診斷、治療的需要，從患病動物體內(nèi)或體外切取、鉗取或穿刺等取出病變組織，進行病理學檢查的技術(shù)。針對動物腫瘤診斷工作，過去的關(guān)注點多集中于使役生產(chǎn)動物，如奶牛白血病，雞馬立克氏病等；而在圈養(yǎng)野生動物，關(guān)于腫瘤疾病的研究、報道則極為少見。而由于珍惜野生動物的特殊性，在保證動物存活的前提下通過手術(shù)方式進行腫瘤摘除、病理診斷以及術(shù)后護理則更加困難。因此，將穿刺活檢技術(shù)在珍惜野生動物病理診斷工作進行應(yīng)用就顯得尤為重要，在本文中，在保證犀牛安全的前提下，采用穿刺活檢技術(shù)，將取材損傷降到了最低的同時，保證了病理診斷工作的完成，采樣過程平穩(wěn)，穿刺前后犀牛狀態(tài)一致。

5 結(jié)論

本研究采穿刺活檢技術(shù)，結(jié)合病理學觀察，對犀牛角基部進行病理學診斷，最終確診為基底樣鱗狀細胞癌，并根據(jù)病理學診斷結(jié)果制定相應(yīng)后續(xù)治療方案，取得了不錯的效果。此病例的完成，為今后珍惜野生動物腫瘤的微創(chuàng)取樣以及病理診斷和治療工作提供了較為可靠的經(jīng)驗和方案。