王 雪，瞿發(fā)林，戚偉利，錢 薇

外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)和輔助性T細(xì)胞17(Th17)是近年來新發(fā)現(xiàn)的CD4+T淋巴細(xì)胞的兩個(gè)亞群，且兩者存在復(fù)雜的功能相關(guān)關(guān)系[1-5]。本研究分析了外周血Treg/Th17比值平衡對替比夫定治療的CHB患者效果的影響，為臨床進(jìn)一步優(yōu)化CHB患者的抗病毒治療提供一定的臨床數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2019年2月～2020年3月我院收治的CHB患者123例，男101例，女22例；年齡為22～57歲，平均年齡為(37.5±7.2)歲；體質(zhì)指數(shù)(BMI)為19.5～27.5 kg/m2，平均為(23.1±3.3)kg/m2；血清HBeAg陽性98例，HBV DNA載量為4.1～8.1 lg cps/mL，平均為(6.5±1.7)lg cps/mL；門診就診的乙型肝炎病毒攜帶者112例，男93例，女19例；年齡為22～59歲，平均年齡為(37.8±7.9)歲；BMI 為19.8～26.5 kg/m2，平均為(22.5±3.2)kg/m2。CHB和病毒攜帶者符合慢性乙型肝炎防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。另選擇在我院進(jìn)行健康體檢的志愿者95例，男82例，女13例；年齡為21～58歲，平均年齡為(36.9±7.5)歲；BMI 為19.0～26.5 kg/m2，平均為(22.6±3.2)kg/m2。三組人群性別和年齡比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。排除肝硬化、惡性腫瘤、妊娠或哺乳期婦女、存在心、腦血管疾病者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)同意，所有研究對象簽署知情同意書。

1.2 治療方法 給予CHB患者替比夫定(北京諾華制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20070028)600 mg口服，1次/d，連續(xù)治療48 w。經(jīng)抗病毒治療48 w，血清HBV DNA載量與基線比，下降幅度<2 lg copies/ml者被判定為不應(yīng)答。

1.3 指標(biāo)檢測 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量(試劑盒購于東北制藥集團(tuán)股份有限公司)；使用美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的X7型全自動生化分析儀檢測天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)；采用ELISA法檢測血清HBeAg(試劑盒購于上海信帆生物科技有限公司)；使用貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司生產(chǎn)的Gallios型流式細(xì)胞儀檢測外周血Treg和Th17細(xì)胞百分比，并計(jì)算Treg/Th17比值。

2 結(jié)果

2.1 三組人群外周血Treg和Th17細(xì)胞百分比及Treg/Th17比值比較 CHB患者外周血Treg和Th17百分比及Treg/Th17比值均顯著高于病毒攜帶者或健康人(P<0.05，表1)。

表1 三組人群外周血Treg和Th17細(xì)胞及Treg/Th17比值比較

2.2 CHB患者對治療的應(yīng)答情況 在治療12 w、24 w和48 w，CHB患者血清ALT復(fù)常率、HBeAg陰轉(zhuǎn)率和HBV DNA陰轉(zhuǎn)率見表2。

表2 123例CHB患者對治療的應(yīng)答率(%)

2.3 應(yīng)答與不應(yīng)答組有關(guān)因素比較 本組123例CHB患者經(jīng)替比夫定治療48 w后，有21例(17.1%)患者出現(xiàn)治療不應(yīng)答；不應(yīng)答組復(fù)治、服藥依從性差、基線血清ALT、AST、HBV DNA載量、Treg細(xì)胞百分比和Treg/Th17比值與應(yīng)答組比，差異顯著(P<0.05，表3)。

表3 應(yīng)答與不應(yīng)答組有關(guān)因素比較

2.4 影響替比夫定治療的CHB患者不應(yīng)答的多因素分析 以復(fù)治、服藥依從性、基線HBV DNA載量、血清ALT水平、Treg細(xì)胞百分比和Treg/Th17比值為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，復(fù)治、基線HBV DNA載量、血清ALT水平和Treg/Th17比值均為影響替比夫定治療應(yīng)答的因素(OR=3.695、OR=3.232、OR=3.866、OR=4.039，P均<0.05，表4)。

2.5 外周血Treg細(xì)胞/Th17細(xì)胞比值對替比夫定治療CHB患者治療不應(yīng)答的預(yù)測價(jià)值 經(jīng)ROC分析顯示，血Treg/Th17比值預(yù)測替比夫定治療CHB患者不應(yīng)答的最佳截?cái)帱c(diǎn)為0.83，AUC值為0.923(95%CI：0.860～0.963)，其判斷的靈敏度為81.0%，特異度為87.3%，準(zhǔn)確度為91.1%(圖1)。

圖1 血Treg/Th17比值預(yù)測替比夫定治療CHB患者應(yīng)答的ROC分析

表4 影響替比夫定治療應(yīng)答的多因素Logistic回歸分析

3 討論

致使HBV持續(xù)感染的主要原因可能是由于病毒感染機(jī)體后促使人體抗病毒免疫功能出現(xiàn)異常，但其確切的免疫學(xué)機(jī)制尚不明確[7，8]。Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞均為CD4+T淋巴細(xì)胞亞型，相關(guān)研究報(bào)道[9，10]發(fā)現(xiàn)Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞與CHB患者接受核苷(酸)抗病毒治療的效果有關(guān)。故而，探討CHB患者外周血Treg/Th17比值平衡及其對替比夫定治療效果的影響具有重要的臨床意義。

本研究結(jié)果表明，CHB患者外周血Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞及Treg/Th17比值均顯著高于病毒攜帶者或健康人，提示CHB患者存在細(xì)胞免疫功能異常。相關(guān)研究表明[11，12]，CHB的發(fā)生和發(fā)展過程實(shí)質(zhì)上是機(jī)體免疫系統(tǒng)與病毒之間相互作用的過程。Treg細(xì)胞可抑制免疫反應(yīng)，在免疫平衡、維持自身免疫耐受等方面具有重要的作用[13，14]。Th17細(xì)胞具有促炎作用，其主要分泌白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-17等細(xì)胞因子，與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)，參與機(jī)體的損傷過程[15，16]。當(dāng)機(jī)體處于穩(wěn)定或無炎癥損傷時(shí)，Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞處于動態(tài)平衡狀態(tài)，但若機(jī)體出現(xiàn)炎癥或損傷等情況時(shí)，Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞分化發(fā)生改變，致使Treg/Th17比值失衡，進(jìn)而導(dǎo)致自身免疫性疾病或腫瘤的發(fā)生[17，18]。

本研究123例CHB患者經(jīng)替比夫定治療后治療不應(yīng)答發(fā)生率為17.1%，與既往報(bào)道相近[19]，進(jìn)一步說明經(jīng)替比夫定抗病毒治療的CHB患者不應(yīng)答發(fā)生率較高，需引起臨床醫(yī)生的重視。本研究結(jié)果顯示，不應(yīng)答組復(fù)治、服藥依從性、血清ALT水平低、基線HBV DNA載量高、Treg細(xì)胞和Treg/Th17比值顯著不同于應(yīng)答組，經(jīng)Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，復(fù)治、基線HBV DNA載量、血清ALT水平和Treg/Th17比值均為影響CHC患者在替比夫定治療后不應(yīng)答的獨(dú)立預(yù)測因素，需加強(qiáng)入組篩選，逐一控制各項(xiàng)危險(xiǎn)因素的不良影響，以減少治療不應(yīng)答發(fā)生率。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)[20]，復(fù)治和血清ALT水平等為CHB患者經(jīng)替比夫定治療后出現(xiàn)不應(yīng)答的危險(xiǎn)因素，在臨床上需引起重視。本研究經(jīng)ROC分析顯示，外周血Treg/Th17比值預(yù)測替比夫定治療CHB患者不應(yīng)答的最佳截?cái)帱c(diǎn)為0.83，其AUC為0.923，預(yù)測的靈敏度為81.0%，特異度為87.3%，準(zhǔn)確度為91.1%，提示應(yīng)用Treg/Th17比值評估替比夫定治療CHB患者效果具有較高的臨床價(jià)值，可作為早期檢測指標(biāo)，對替比夫定治療的CHB患者進(jìn)行早期的監(jiān)測并積極采取有效的治療措施，以提高臨床治療效果。