范華

（上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司，上海200444）

1 材料與方法

1.1 儀器

運(yùn)濤Lumiart-II-3 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀（合肥運(yùn)濤光電科技有限公司）。

1.2 試劑

長(zhǎng)沙中生眾捷生物技術(shù)有限公司的胃泌素17 檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）（批號(hào)：2020110112-2）及配套的校準(zhǔn)品（批號(hào)：2020110112-2）和質(zhì)控品（批號(hào)：2020110112-2），試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均在有效期內(nèi)使用，符合廠家說(shuō)明書和技術(shù)要求的指標(biāo)。

1.3 評(píng)價(jià)方法

1.3.1 精密度評(píng)價(jià)。按照CLSI EP5-A3[1]指南文件制訂方案：6 個(gè)濃度水平，3 個(gè)儀器系統(tǒng)，5 天實(shí)驗(yàn)，每天測(cè)定1 批，每批每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定5 次，計(jì)算重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度和再現(xiàn)性。

1.3.2 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)。采用回收試驗(yàn)[2]進(jìn)行評(píng)價(jià)：選擇人源性樣品（濃度為1.21pmol/L）為基礎(chǔ)樣本；取900μL 基礎(chǔ)樣本和100μL 濃度為12.30pmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為回收樣品1；取900μL 基礎(chǔ)樣本和100μL 濃度為48.00pmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為回收樣品2；取900μL 基礎(chǔ)樣本和100μL 濃度為200.00pmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為回收樣品3?；A(chǔ)樣品、每份回收樣品重復(fù)測(cè)定3 次，取平均值，計(jì)算回收率，在85～115 范圍內(nèi)回收率符合要求。

1.3.3 分析靈敏度評(píng)價(jià)

1.3.3.1 檢出限（LOD）。參考CLSI EP17-A2[3]指南文件制訂方案：2 個(gè)空白樣品、2 個(gè)檢測(cè)出限樣品、1 個(gè)儀器系統(tǒng)，3 天實(shí)驗(yàn)，每天測(cè)定1 批，每批每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定5 次。在設(shè)定兩類錯(cuò)誤水平條件：α=0.05，β=0.05 時(shí)的最低檢出限。

1.3.3.2 定量限（LOQ）。參考CLSI EP17-A2 指南文件制訂方案：選擇G-17 低水平樣品1 份（3.5pmol/L），用校準(zhǔn)品S0（0pmol/L）按1:2、1:4、1:8、1:16、1:32 和1:64 進(jìn)行倍比稀釋，作為6 個(gè)定量限濃度樣品、3 天實(shí)驗(yàn)，每天測(cè)定1 批，每批每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次，分別計(jì)算原倍樣品和6 個(gè)定量限濃度樣品的濃度平均值，標(biāo)準(zhǔn)差和CV，以濃度平均值和CV 建立數(shù)學(xué)模型，取CV 為10%（廠家聲明的精密度要求）時(shí)對(duì)應(yīng)樣品的濃度值作為定量限。

1.3.4 線性范圍驗(yàn)證。參考CLSI EP6-A2[4]指南文件制訂方案：用低濃度和高濃度線性樣品各1 份，按照等比例關(guān)系稀釋成11 個(gè)系列濃度樣本。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定3 次，記錄結(jié)果。以三次測(cè)量的平均值為實(shí)測(cè)值和計(jì)算的預(yù)期值進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析，將所得數(shù)據(jù)擬合為一階、二階和三階多項(xiàng)式，評(píng)估所檢測(cè)的濃度范圍是否為線性。

1.3.5 參考區(qū)間驗(yàn)證。參考CLSI EP28-A3c[5]指南文件制訂方案：測(cè)定20 份表觀健康人樣本，驗(yàn)證試劑盒給定的參考區(qū)間的適用性。若20 份樣本檢測(cè)結(jié)果在參考區(qū)間的人數(shù)≥18 份，則驗(yàn)證通過(guò)，否則需要重新驗(yàn)證或確認(rèn)。

1.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。采用SPSS 22.0、Analyse-it 和Minitab 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05 為差異具有顯著性的意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度評(píng)價(jià)結(jié)果

低、中、高水平樣品分別標(biāo)記為P1、P2、P5，同時(shí)3 個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)檢測(cè)的低、中、高水平的質(zhì)控品分別標(biāo)記為Q3、Q4、Q6；P1、P2、Q3、Q4、P5、Q6 樣本測(cè)定的精密度結(jié)果見(jiàn)表1。G-17 濃度在1～50pmol/L 范圍內(nèi)，該檢測(cè)方法的重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度和再現(xiàn)性均符合廠家要求＜10%。

表1 實(shí)驗(yàn)室的精密度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.2 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)結(jié)果

見(jiàn)表2，根據(jù)相關(guān)公式計(jì)算回收率，添加三個(gè)水平的回收率分別為98.4%、103.8%、96.4%，均在85.0%～115.0%范圍內(nèi)，符合該儀器的性能要求。

表2 回收試驗(yàn)結(jié)果

2.3 分析靈敏度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.3.1 檢出限（LOD）

G-17 空白樣本測(cè)試數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，需按照非參數(shù)法評(píng)估空白限（LOB），低濃度樣本符合正態(tài)分布，采用參數(shù)法評(píng)估檢出限（LOD）。由表3 結(jié)果和圖1 可得知LOB 為0.04pmol/L，LOD 為0.07pmol/L，符合聲明的檢出限≤0.50pmol/L 的要求。

表3 空白限（LOB）和檢出限（LOD）

2.3.2 定量限（LOQ）

根據(jù)要求CV 具有或最接近10%所對(duì)應(yīng)濃度值即為G17 的定量限，根據(jù)表4 結(jié)果和圖2 模型可計(jì)算在CV 最接近10%的時(shí)候G-17 的預(yù)期濃度值為0.26pmol/L，即LOQ 為0.26pmol/L，符合聲明的定量限≤1.00pmol/L 的要求。

2.4 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果

圖1 空白限（LOB）和檢出限（LOD）分布圖

表4 定量限（LOQ）

11 個(gè)系列濃度水平G-17 樣品測(cè)定均值分別為0.03、6.52、10.74、14.50、18.50、23.89、28.40、35.97、42.08、44.37 和49.94pmol/L，計(jì)算SDr=0.398，CVr=1.2%, 小于設(shè)定的允許集合誤差目標(biāo)2%。以線性樣本的稀釋度作為X，實(shí)測(cè)濃度均值作為Y，對(duì)數(shù)據(jù)組進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析和線性檢驗(yàn)，得到一階方程Y=0.9966X+0.06276；二階方程中的b2的P 值為0.0668；三階方程中b2、b3的P 值分別為0.153 和0.260。結(jié)果顯示二階和三階多項(xiàng)式中的回歸系數(shù)與0 進(jìn)行比較，均無(wú)顯著性差異（p＞0.05），故該數(shù)據(jù)組具有線性，為一階線性方程。

2.5 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

20 名表觀健康者G-17 檢測(cè)結(jié)果均在試劑盒聲明的參考區(qū)間內(nèi)（1-7pmol/L），通過(guò)驗(yàn)證。

3 討論

胃泌素包括胃泌素源、甘氨酸、延伸型的胃泌素和酰胺化胃泌素多種類型。胃泌素17（Gastrin17，G-17）是屬于胃泌素中分泌的激素類型一致，一種重要的胃腸激素，它主要由G 細(xì)胞分泌的胃腸激素。G 細(xì)胞是典型的開放型細(xì)胞，以胃竇部最多，其次是胃底、十二指腸和空腸等處。人胰島的D 細(xì)胞亦能分泌胃泌素。它能夠調(diào)節(jié)消化系統(tǒng)的功能，維持消化道黏膜的結(jié)構(gòu)完整，有重要的作用。目前人體有95%以上有生物活性的胃泌素就是α 酰胺化胃泌素[6]，主要含有兩種G17 和G34，而G17 占有80%到90%。如果胃泌素17 偏高，可能影響胃的消化吸收功能，而導(dǎo)致出現(xiàn)胃腸道的疾病，比如胃炎，胃潰瘍等。因此G-17是反映胃黏膜損傷情況的重要指標(biāo)。以胃泌素17 作為核心指標(biāo)的人體血清胃功能檢測(cè)項(xiàng)目可以有效地減少胃癌患病風(fēng)險(xiǎn)，大幅度地提高胃癌疾病的早診以及早治概率，對(duì)于各種胃病的預(yù)防和治療都具有重要的積極意義。血清G-17 檢測(cè)可以反映胃竇部黏膜萎縮情況[7]。血清G-17 水平取決于胃內(nèi)酸度及胃竇部G 細(xì)胞數(shù)量。因此，高胃酸以及胃竇部萎縮患者的空腹血清G-17 濃度較低。與血清PG 檢測(cè)相結(jié)合，血清G-17 濃度檢測(cè)可以診斷胃竇（G-17 水平降低）或僅局限于胃體（G-17 水平升高）的萎縮性胃炎。當(dāng)人體內(nèi)胃泌素17 處于低值狀態(tài)時(shí)，通常提示患者的胃部存在一些高酸的狀況。而當(dāng)胃泌素17 處于高值狀態(tài)時(shí)，則提示患者的胃內(nèi)部存在一些炎癥，患者可能表現(xiàn)出一些高胃泌素血癥的發(fā)病癥狀。這種情況可能跟幽門螺旋桿菌感染、胃潰瘍以及藥物影響有關(guān)系。另外，胃泌素17 的變化與患者的胃部受到飲食刺激以及患上其他疾病也有一定的聯(lián)系。

圖2 精密度曲線圖

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示化學(xué)發(fā)光磁微粒免疫法檢測(cè)G-17 的精密度、準(zhǔn)確度、分析靈敏度、線性范圍和參考區(qū)間等各項(xiàng)性能指標(biāo)均符合要求。精密度是反映檢測(cè)系統(tǒng)整體性能的基本指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)參考了CLSI EP5-A3 文件，用不同濃度的G-17 樣本和質(zhì)控品對(duì)重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度和再現(xiàn)性等3 種精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)，G-17 重復(fù)性分別為2.1%、2.0%、3.6%、2.8%、1.8%和2.5%，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度分別為5.0%、2.5%、3.8%、2.8%、2.0%和3.4%，再現(xiàn)性分別為5.5%、4.0%、5.4%、3.0%、2.9%和4.2%，其CV 結(jié)果均小于廠家的聲明結(jié)果，符合要求。檢測(cè)系統(tǒng)的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)是均勻樣本的一系列測(cè)量結(jié)果中系統(tǒng)測(cè)量誤差的性能特征，一般可采用分析參考物質(zhì)、方法學(xué)比對(duì)和回收試驗(yàn)，本研究采用低、中、高三個(gè)水平的回收率（98.4%、103.8%和96.4%）和平均回收率（99.5%），均在廠家可接受范圍內(nèi)，符合要求。分析靈敏度是評(píng)價(jià)檢測(cè)系統(tǒng)的一個(gè)重要性能指標(biāo)，能很大程度上體現(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)能力，包括空白限（LOB）、檢出限（LOD）和定量限（LOQ）；尤其G-17 在低濃度水平有重要臨床意義，其檢測(cè)方法的下限尤為重要，檢出限和定量限是評(píng)估檢測(cè)方法下限的指標(biāo)，空白限是建立和驗(yàn)證檢出限時(shí)的必要條件。本研究的LOB為0.04pmol/L，LOD 為0.07pmol/L，LOQ 為0.26pmol/L，均符合廠家的聲明要求，表明G-17 在該檢測(cè)系統(tǒng)具有很好的檢測(cè)方法下限。線性范圍是性能評(píng)價(jià)的關(guān)鍵指標(biāo)，CLSI EP6-A2 文件表明要求線性區(qū)間的建立需要對(duì)線性試驗(yàn)進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析，并進(jìn)行線性檢驗(yàn)。本研究表明磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)G-17 在線性范圍0.03～49.94pmol/L，通過(guò)線性檢測(cè)，最適方程為一階直線方程。本研究根據(jù)CLSI EP28-A3c 文件，進(jìn)行了G-17 的參考區(qū)間驗(yàn)證，其參考區(qū)間在1～7pmol/L 的驗(yàn)證通過(guò)，符合廠家聲明。總之，在運(yùn)濤Lumiart-Ⅱ-3 發(fā)光測(cè)定儀檢測(cè)G-17，對(duì)其主要性能指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，驗(yàn)證結(jié)果符合廠家聲明，具有良好的性能，符合臨床質(zhì)量要求。