吳 洋，程 鋼

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，合肥 230022)

爐甘石依沙吖啶洗劑是皮膚科的常用制劑，在國內(nèi)醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)用廣泛[1-3]，成分包括爐甘石、氧化鋅、乳酸依沙吖啶和甘油等，用于治療丘疹、濕疹、蕁麻疹等皮膚炎癥，療效確切；醫(yī)院皮膚科醫(yī)生也經(jīng)常將該制劑作為個體化給藥的基質(zhì)溶液，可添加氯霉素、地塞米松等水針劑，治療其他皮膚疾患，使其適用范圍進一步拓展。乳酸依沙吖啶是該制劑的主要成分之一，含量為1 g·L-1，質(zhì)量標準收載于《安徽省醫(yī)院制劑規(guī)范》1999年版[4]，含量測定方法采用紫外分光光度法(UV法)，本實驗在參考文獻方法[1,5-8]的基礎(chǔ)上，建立了高效液相色譜(HPLC)法測定爐甘石依沙吖啶洗劑中乳酸依沙吖啶的含量，并在此基礎(chǔ)上對制劑進行12個月的穩(wěn)定性考察，為制劑有效期的確定提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀：包括G1310A四元泵、G1314B VWD檢測器、G1379B真空脫氣機、7725i手動進樣器、Agilent 1200化學(xué)工作站(美國Agilent公司)；FA 2004萬分之一電子天平(上海天平儀器廠)；B3200S-T型超聲清洗器(必能信超聲有限公司)；pHS-3C型酸度計(上海雷磁儀器廠)；DH64型電熱恒溫干燥箱(上海醫(yī)療器械七廠)。

1.2試藥 乳酸依沙吖啶對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號100290-201002，質(zhì)量分數(shù)為94.3%)；甲醇(色譜純，美國Tedia公司)；滅菌注射用水(湖南科倫制藥有限公司)；爐甘石依沙吖啶洗劑(本院制劑室自制，批準文號：皖藥制字H20070013，批號：20181113、20181212、20190123)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1HPLC法測定乳酸依沙吖啶的含量

2.1.1色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.5 g·L-1十二烷基磺酸鈉溶液-甲醇(30∶70)(磷酸調(diào)節(jié)pH值為 3.30)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：269 nm；柱溫：30 ℃，進樣量：20 μL。理論塔板數(shù)以乳酸依沙吖啶峰計算不小于3 000。

2.1.2溶液的制備 對照品溶液：精密稱取乳酸依沙吖啶對照品8.75 mg，置于100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液2 mL，置于50 mL量瓶中，用流動相稀釋到刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為3.30 mg·L-1的對照品溶液。

供試品溶液：精密吸取爐甘石依沙吖啶洗劑2 mL，置于25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取上述溶液2 mL，置于50 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，靜置10 min，吸取上清液，用0.45 μm有機系濾頭過濾，棄去初濾液，即得。

陰性對照溶液：按照處方配制不含乳酸依沙吖啶的空白爐甘石洗劑，按照上述供試品溶液的制備方法操作，即得。

2.1.3專屬性和系統(tǒng)適用性實驗 分別取2.1.2項下制備的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20 μL，按照2.1.1項下色譜條件分析，記錄色譜圖，見圖1。由圖1可知，乳酸依沙吖啶峰形良好，保留時間約為11.5 min，樣品中其他成分和輔料對乳酸依沙吖啶測定無干擾，理論塔板數(shù)按照乳酸依沙吖啶峰計算不小于3 000。

圖1 HPLC圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照溶液；1.乳酸依沙吖啶。Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference soloution；B.sample solution；C.negative control solution;1.ethacridine lactate.

2.1.4線性關(guān)系考察 分別精密量取2.1.2項下制備的對照品儲備液1、2、3、4、5、6 mL，置于100 mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，得質(zhì)量濃度分別為0.83、1.65、2.48、3.30、4.12、4.95 mg·L-1的系列對照品溶液，按照2.1.1項下色譜條件依次進樣20 μL，測定峰面積。以峰面積(y)為縱坐標、質(zhì)量濃度(x)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為y=186.95x-0.212 6(r=0.999 9)，線性范圍為0.83～4.95 mg·L-1。

2.1.5精密度實驗 日內(nèi)精密度:分別取2.1.4項下制備的低、中、高質(zhì)量濃度(1.65、3.30、4.95 mg·L-1)的對照品溶液各20 μL，按照2.1.1項下色譜條件各重復(fù)進樣3次，進樣間隔時間為4 h，記錄峰面積，計算低、中、高質(zhì)量濃度的乳酸依沙吖啶的日內(nèi)精密度RSD值，分別為0.85%、0.30%、0.53%(n=3)。

日間精密度：取2.1.4項下制備的低、中、高質(zhì)量濃度(1.65、3.30、4.95 mg·L-1)的對照品溶液各20 μL，每日進樣1次，連續(xù)測定3 d，記錄峰面積，計算低、中、高質(zhì)量濃度的乳酸依沙吖啶的日間精密度RSD值，分別為1.52%、1.30%、1.63%(n=3)。

2.1.6穩(wěn)定性實驗 取2.1.2項下制備的供試品溶液，在制備后0、2、4、6、8、12 h各測定1次峰面積，結(jié)果RSD值為0.75%(n=6)，表明供試品溶液在制備后12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7重復(fù)性實驗 取批號為20181113的爐甘石依沙吖啶洗劑，按照2.1.2項下方法制備供試品溶液6份，分別進樣分析，計算乳酸依沙吖啶含量的RSD值為1.53%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8回收率實驗 按照處方配制不含乳酸依沙吖啶的空白爐甘石洗劑6份，每份10 mL，分別加入乳酸依沙吖啶對照品10.0 mg，搖勻，制得模擬洗劑樣品，按照2.1.2項下方法制備供試品溶液，進樣測定峰面積，代入標準曲線求得乳酸依沙吖啶含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率實驗結(jié)果 (n=6)Tab.1 Results of recovery test (n=6)

2.1.9樣品含量測定 取爐甘石依沙吖啶洗劑樣品3批，按照2.1.2項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按照2.1.1項下色譜條件進樣，測定峰面積，按外標法計算乳酸依沙吖啶含量，結(jié)果顯示，3批爐甘石依沙吖啶洗劑中乳酸依沙吖啶的含量分別為0.991、0.980、0.971 g·L-1，3批樣品含量的RSD值分別為0.76%、0.96%、1.53%(n=3)，符合質(zhì)量標準中乳酸依沙吖啶的含量限度要求(標示量的90.0%～110.0%)。

3 爐甘石依沙吖啶洗劑的長期穩(wěn)定性考察

3.1考察方法與項目 根據(jù)《中國藥典》2015年版四部9001條規(guī)定，取制劑3批，市售包裝，在室溫(25±2) ℃、相對濕度為60%±10%的條件下避光放置12個月，分別于生產(chǎn)后第0、3、6、9、12個月末取樣，按穩(wěn)定性重點考察項目進行檢測，根據(jù)混懸型洗劑的特點，其重點考察項目確定為性狀、含量、再分散性和沉降體積比[9]。

3.2性狀考察 爐甘石依沙吖啶洗劑的初始性狀為粉紅色帶微黃色混懸液，3批留樣制劑分別于生產(chǎn)后第0、3、6、9、12個月末與同批號原料新鮮配制的爐甘石依沙吖啶洗劑合格品進行外觀比色，并觀察是否產(chǎn)生棕色沉淀，結(jié)果見表2。

3.3含量考察 依據(jù)制劑質(zhì)量標準[4]，本制劑含鋅化合物以氧化鋅(ZnO)計不得少于140 g·L-1；含乳酸依沙吖啶(C15H15N3O·C3H6O3)應(yīng)為標示量(1 g·L-1)的90.0%～110.0%。按照新建立的HPLC法測定3批留樣制劑第0、3、6、9、12個月末的乳酸依沙吖啶含量；同時根據(jù)原質(zhì)量標準測定留樣制劑中的氧化鋅含量，結(jié)果見表2。

3.4再分散性考察 將3批留樣制劑分別取10 mL，置于10 mL具塞量筒中，密封筒口，靜置24 h使其沉降，然后將具塞量筒倒置翻轉(zhuǎn)(一正一反為1次)，記錄沉降物分散完全所需的翻轉(zhuǎn)次數(shù)[3,10]。于第0、3、6、9、12個月末分別取樣測定，結(jié)果見表2。

表2 長期穩(wěn)定性考察結(jié)果(25 ℃，避光)Tab.2 Results of long-term stability study (25 ℃，protected from light)

3.5沉降體積比(F值)測定 將3批留樣制劑分別取10 mL，置于10 mL具塞量筒中，密封筒口，同時振搖1 min，記錄沉降前原始高度H0，計時，于10、30 min及1、2、3、6、24、48 h測定沉降物高度H，計算F值,F=H÷H0[3,10]。于第0、3、6、9、12個月末分別取樣測定，結(jié)果見表3。

表3 3批留樣制劑的沉降體積比(F值)考察結(jié)果Tab.3 Results of the sedimentation rate (F value) in 3 samples

4 討論

4.1含量測定方法改進的必要性 爐甘石依沙吖啶洗劑是醫(yī)院傳統(tǒng)制劑，在皮膚科用藥中有著不可替代的作用。原質(zhì)量標準中采用UV法測定乳酸依沙吖啶含量，在長期實踐中發(fā)現(xiàn)，該方法測定結(jié)果偏低，容易對樣品含量造成誤判。究其原因，是因為該制劑中含爐甘石和氧化鋅固體顆粒，在過濾時容易對乳酸依沙吖啶產(chǎn)生吸附，雖然用0.05 mol·L-1硫酸溶液沖洗濾紙，但不能完全溶解固體顆粒，導(dǎo)致濾液中乳酸依沙吖啶的含量偏低。冬季因氣溫低，固體顆粒溶解度差，吸附更多，測定結(jié)果經(jīng)常達不到含量低限，同時也使長期穩(wěn)定性考察無法順利進行。筆者曾參考文獻實驗改良后的UV法[11]，即先用高濃度硫酸溶液(1 mol·L-1)溶解樣品，再用水稀釋定容后過濾，方法回收率有所提高，但仍無法解決冬季含量偏低的問題，由此可見，改進其含量測定方法是十分必要的。

4.2HPLC色譜條件的優(yōu)化及方法的優(yōu)點 有關(guān)HPLC法測定乳酸依沙吖啶原料及其制劑的含量已有較多文獻報道[1,7-10]，筆者以甲醇-乙腈-水(60∶37∶3)以及含1 g·L-1庚烷磺酸鈉的磷酸鹽緩沖液∶乙腈(70∶30)為流動相[1]，并試用Agilent Eclipse XDB-C18和Diamonsil C182種色譜柱，均產(chǎn)生較嚴重的拖尾現(xiàn)象，因乳酸依沙吖啶具有2個芳香胺基結(jié)構(gòu)，C18對其有強保留，甲醇-水系統(tǒng)和乙腈-水系統(tǒng)均較難洗脫[5]，采用0.5 g·L-1十二烷基磺酸鈉溶液-甲醇(30∶70)(磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.30)流動相較易洗脫，峰形良好。本研究中樣品前處理采用2步稀釋，較好地解決了固體顆粒的吸附問題，雖然未用硫酸液溶解爐甘石和氧化鋅顆粒，但第2步稀釋后樣品濃度已降低300倍以上，靜置后取上清液過濾，固體顆粒對乳酸依沙吖啶的吸附可忽略不計。該方法專屬性強，準確度高，可較好地控制制劑質(zhì)量。

4.3長期穩(wěn)定性考察結(jié)果分析 爐甘石依沙吖啶洗劑在臨床使用已超過30年，生產(chǎn)工藝成熟，安全性、有效性均有保障，制劑中乳酸依沙吖啶易見光分解使混懸液變色甚至產(chǎn)生沉淀，故成品采用聚乙烯瓶加紙盒避光包裝，在穩(wěn)定性考察中未再進行加速實驗和影響因素實驗(如光照等)。由表3和表4可知，在12個月內(nèi)，3批樣品的性狀、含量、沉降體積比變化不大，每個考察時間點48 h內(nèi)沉降速率基本一致，說明混懸液穩(wěn)定性未發(fā)生改變；重新翻轉(zhuǎn)次數(shù)在3、6、9、12個月末與考察初期基本一致，說明混懸液未形成不易分散的結(jié)塊，再分散性較好。含量測定結(jié)果表明，3批留樣制劑12個月內(nèi)含量變化很小(<1.0%)，說明室溫條件下藥物穩(wěn)定，根據(jù)《中國藥典》2015年版規(guī)定，未做95%可信限統(tǒng)計分析[9]。綜上所述，爐甘石依沙吖啶洗劑在12個月內(nèi)穩(wěn)定性好，藥品說明書中標注的1年有效期切實可行。

4.4爐甘石原料的現(xiàn)狀及對制劑質(zhì)量和穩(wěn)定性的影響 爐甘石屬礦物類中藥材，《中國藥典》2015年版一部規(guī)定其基源為碳酸鹽類礦物方解石菱鋅礦，主含碳酸鋅[12]，臨床應(yīng)用需經(jīng)煅制、水飛炮制后方可使用，但礦物藥作為不可再生資源，隨著不斷開采，我國的少數(shù)幾個菱鋅礦已日漸枯竭，而市場用量在不斷增大，供需矛盾使爐甘石市場偽品率日漸增高，近年來已達60%以上[13]。為保護自然資源，同時保證爐甘石的可持續(xù)供應(yīng)，國內(nèi)多年來一直在開展人工合成爐甘石的研究和實踐。研究表明，爐甘石的藥理作用與其成分與粒度相關(guān)，顆粒越小，抑菌性和收斂性越強[14-15]，爐甘石所含成分中抑菌活性強弱為Zn5(CO3)2(OH)6>ZnO>ZnCO3，生品含Zn5(CO3)2(OH)6較多，炮制品因經(jīng)過煅燒，Zn5(CO3)2(OH)6等分解成ZnO，但因粒徑變小，抑菌效果強于生品[16]?；瘜W(xué)合成爐甘石粉是通過硫酸鋅和碳酸氫銨或碳酸鈉合成Zn5(CO3)2(OH)6，干燥后再添加少量氧化鐵著色而成[17]，其特點是既保持了與生品相同的主成分和抗菌活性，又保持了與炮制品相似的較小粒度，還避免了天然藥物中鉛、鎘等毒性元素的危害。隨著合成工藝的提高，爐甘石粉的質(zhì)量不斷提升，化學(xué)合成品在國內(nèi)爐甘石原料藥市場占比越來越高。

國內(nèi)生產(chǎn)爐甘石粉有3個廠家，分別為上海某廠、湖南某廠和南昌某廠，我單位在配制制劑時均有應(yīng)用。3個廠家產(chǎn)品的顏色、性狀和粒度各不相同，湖南廠家顏色淺、粒度細，南昌廠家顏色深、粒度大，上海廠家居中。在臨床應(yīng)用和穩(wěn)定性考察中獲知，南昌廠家原料因顆粒較粗，配制的制劑用于皮膚時砂礫感較強，患者不易接受；湖南廠家原料最細膩，配制的制劑基本無皮膚刺激感，在穩(wěn)定性考察中，F(xiàn)值較大，初配成的混懸液穩(wěn)定性好，但由于粉末太細，一旦與氧化鋅聚合則不易分離，在長期貯存時，容易產(chǎn)生黏壁和瓶底板結(jié)現(xiàn)象，再分散性不好。因此，本研究選用上海廠家的原料進行了長期穩(wěn)定性實驗，這也是在不改變處方前提下的相對最佳結(jié)果。也有文獻報道，爐甘石洗劑中加入卡波姆、羥丙甲基纖維素、殼聚糖等新型無毒助懸劑，可較好地改變混懸劑的穩(wěn)定性[18-20]，改善黏壁和板結(jié)現(xiàn)象，這也是今后改良處方、提高制劑質(zhì)量、進一步滿足患者需求的研究方向。