朱曉燕 謝琳 譚薇

1遵義醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院 遵義市第一人民醫(yī)院眼科 563002；2陸軍軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院眼科，重慶 400042

朱曉燕現(xiàn)在貴州省人民醫(yī)院眼科，貴陽 550002；謝琳現(xiàn)在重慶醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院眼科 401120

抗青光眼手術是青光眼降眼壓的主要治療方式之一，而濾過通道結(jié)膜瘢痕形成是手術失敗的主要原因，失敗率為15%～30%[1]。因此，通過抑制瘢痕化提高抗青光眼手術的成功率仍是眼科研究的重要方向之一。臨床上廣泛應用絲裂霉素C、5-氟尿嘧啶減輕青光眼術后瘢痕化，提高濾過術的成功率，但仍然存在較多的并發(fā)癥，如愈合延遲、術后淺前房、濾過泡滲漏及角膜毒性等，嚴重影響手術效果[2-3]。臨床上尚缺乏有效的、毒性作用和不良反應小的藥物以減少瘢痕形成，延長濾過泡生存時間。因此如何預防和減少術后結(jié)膜瘢痕形成仍然是青光眼手術治療的一大難題，也是研究的重點之一。整合素屬于一類跨膜蛋白，由2個亞基通過非共價鍵組成異源二聚體，是細胞表面重要的黏附分子和介導細胞與細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)相互作用的重要分子之一，在創(chuàng)傷愈合、癌細胞的轉(zhuǎn)移以及纖維化相關疾病中發(fā)揮重要作用[4-5]。整合素ανβ3亞型是分布較廣泛的ECM受體，包括1個相對分子質(zhì)量為125 000的αν亞基和1個相對分子質(zhì)量為105 000的β3亞基，在創(chuàng)面愈合的重塑期發(fā)揮重要作用，可以結(jié)合并激活多種細胞因子，參與細胞增生、遷移及分化[5]。研究發(fā)現(xiàn)，在硬皮病來源的成纖維細胞中，轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)的促纖維化作用是通過整合素ανβ3介導的[6-7]，整合素ανβ3可與TGF-β Ⅱ型受體結(jié)合參與促成纖維細胞增生作用[8]。研究已證實TGF-β可顯著促進青光眼濾過術后結(jié)膜組織瘢痕形成[9-11]，然而目前關于TGF-β與整合素ανβ3之間的相互作用關系尚不明確，各研究報道結(jié)論有很大差異。整合素ανβ3在眼結(jié)膜組織瘢痕形成中的作用尚不清楚。本研究擬觀察整合素ανβ3在青光眼大鼠手術模型中手術區(qū)結(jié)膜組織的表達變化，并探討其在濾過術后瘢痕形成中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物及分組 選取SPF級6～8周齡雄性Sprague Dawley(SD)大鼠55只(陸軍軍醫(yī)大學動物中心提供)，體質(zhì)量250～350 g，均在12 h明暗循環(huán)、室溫22～25 ℃、相對濕度為(50±5)%的環(huán)境中飼養(yǎng)。排除因發(fā)生晶狀體損傷、前房出血或微管脫落、移位手術失敗的大鼠15只，采用隨機單位組設計分組法將造模成功大鼠分為對照組、TGF組、LM609組和TGF+LM609組，每組10只。實驗遵循《陸軍軍醫(yī)大學實驗動物管理條例》，遵從《善待實驗動物指導性意見》的相關倫理學規(guī)定，經(jīng)陸軍軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院倫理委員會審核批準[批文號：醫(yī)研倫審(2017)第06號]。

1.1.2主要試劑及儀器 質(zhì)量分數(shù)0.4%鹽酸奧布卡因滴眼液、左氧氟沙星滴眼液(日本參天制藥有限公司)；質(zhì)量分數(shù)0.25%氯霉素滴眼液(安徽環(huán)球藥業(yè)股份有限公司)；質(zhì)量分數(shù)10%水合氯醛[生工生物工程(上海)股份有限公司]；黏彈劑(美國博士倫公司)；直接紅80、固綠FCF、苦味酸(美國Sigma公司)；人重組TGF-β2(美國Pepro Tech公司)；ECL發(fā)光液、整合素ανβ3受體阻斷劑LM609(美國Millipore公司)；組織固定液(深圳欣博盛生物科技有限公司)；兔抗整合素αν單克隆抗體(ab179475)、兔抗整合素β3單克隆抗體(ab119992)、小鼠抗整合素ανβ3單克隆抗體(ab7166)(美國Abcam公司)；羊抗兔HRP標記二抗、山羊抗鼠HRP標記二抗、蘇木精-伊紅染色試劑盒、細胞裂解液(北京中杉金橋生物技術有限公司)。靜脈穿刺微管系統(tǒng)(美國Fine Science Tools公司)；顯微鏡、石蠟組織切片機、倒置熒光顯微鏡(德國Leica公司)；數(shù)碼照相系統(tǒng)(美國SPOT公司)；超低溫冰箱(日本Sanyo公司)；臺式低溫高速離心機(德國Heraeus公司)；掃描分析軟件系統(tǒng)(美國Labworks Analysis Software公司)；手術顯微鏡(蘇州六六視覺科技股份有限公司)；Tonolab眼壓計(芬蘭Icare公司)；眼科手術顯微器械(蘇州醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 方法

1.2.1大鼠濾過性手術模型的建立 以大鼠右眼為手術眼，術前使用0.4%鹽酸奧布卡因滴眼液點術眼3次，10%水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉(0.3 ml/100 g)大鼠，質(zhì)量分數(shù)0.5%碘伏溶液常規(guī)消毒術眼周圍，0.25%氯霉素滴眼液沖洗結(jié)膜囊3次，以穹隆部為基底制作約2 mm×2 mm結(jié)膜瓣，對照組、TGF組、LM609組、TGF+LM609組分別采用質(zhì)量分數(shù)0.9%氯化鈉溶液棉片、TGF-β2(2 mg/ml)溶液棉片、LM609(40 μg/ml)溶液棉片、TGF-β2(2 mg/ml)+LM609(40 μg/ml)溶液棉片處理結(jié)膜瓣2 min；0.9%氯化鈉溶液沖洗，30G針頭穿刺前房，注入少量黏彈劑維持前房，將2 mm微管植入前房，末端埋于結(jié)膜瓣下，角膜緣固定微管1針，10-0縫線縫合結(jié)膜瓣，術后予以左氧氟沙星滴眼液點術眼。

1.2.2眼壓監(jiān)測及濾過泡形態(tài)觀察 每組選取8只大鼠，分別于術前及術后3 d、1周、2周采用iCARE眼壓計測量眼壓，測量6次取平均值，正常大鼠眼壓測量值的穩(wěn)定性較差，因此采用同一只大鼠術前與術后的測量值比率進行比較，術后平均眼壓比率=術后眼壓/術前眼壓×100%；術后3 d、1周、2周采用裂隙燈顯微鏡檢查手術區(qū)結(jié)膜及角膜組織的充血水腫情況、濾過泡形態(tài)和前房情況等，通過眼前節(jié)拍照記錄結(jié)膜濾過泡形態(tài)變化，由同一醫(yī)師標記濾過泡區(qū)域3次，采用ImageJ(1.8.0)軟件計算濾過泡平均面積，分別計算出每組術后3 d及術后2周濾過泡面積，濾過泡生存比率=術后2周濾過泡面積/術后3 d濾過泡面積×100%。

1.2.3蘇木精-伊紅染色、苦味酸-天狼星紅染色法觀察手術區(qū)組織炎性改變及纖維化程度 每組選取3只大鼠，術后2周腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛麻醉大鼠，采用頸椎脫臼法處死大鼠，摘取大鼠眼球，置于組織固定液(質(zhì)量分數(shù)4%多聚甲醛+乙酸+冰醋酸)中固定24 h。平行視軸切去眼球的1/3，注意保護手術區(qū)域，繼續(xù)固定12 h，置于體積分數(shù)55%乙醇中過夜，梯度乙醇(60%、70%、80%、90%、100%)脫水，二甲苯透明5 min，浸蠟1 h，石蠟包埋，連續(xù)5 μm厚石蠟切片，37 ℃烤片過夜。取石蠟切片按照試劑盒說明書進行蘇木精-伊紅染色，觀察各組手術區(qū)球結(jié)膜組織的炎癥反應；另取石蠟切片，質(zhì)量分數(shù)0.1%直接紅80、0.1%固綠FCF和1.2%苦味酸混合液中37 ℃避光孵育1 h，去離子水沖洗切片1～2遍，吹干玻片，倒置顯微鏡下觀察并拍照記錄，Ⅰ型膠原呈黃色或紅色，Ⅲ型膠原呈綠色，觀察手術區(qū)球結(jié)膜組織纖維化程度及膠原纖維沉積情況。

1.2.4Western blot法檢測手術區(qū)結(jié)膜組織整合素αν、β3的相對表達量 每組選取3只大鼠，同1.2.3方法摘取大鼠眼球，剪取濾過手術區(qū)的結(jié)膜組織，加入組織細胞裂解液，將組織研磨碎，移入EP管中，離心半徑13.5 cm，4 ℃條件下1 000 r/min離心10 min，將上清液移入新的EP管中，測定蛋白濃度，調(diào)整樣品蛋白濃度一致，加入上樣緩沖液，煮沸10 min。各樣本取相同的蛋白量20 μg進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，將蛋白轉(zhuǎn)印到PVDF膜，質(zhì)量分數(shù)5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，兔抗整合素αν一抗(1∶ 5 000)、兔抗整合素β3一抗(1∶ 1 000)4 ℃孵育過夜，洗膜后羊抗兔HRP標記二抗(1∶ 1 000)室溫孵育1 h，ECL發(fā)光試劑曝光檢測結(jié)果。每個樣本重復檢測3次，采用凝膠圖像分析系統(tǒng)對蛋白條帶進行灰度值轉(zhuǎn)換，以β-actin為內(nèi)參，計算各目的蛋白的相對表達量。

1.2.5免疫組織化學染色法檢測整合素ανβ3定位表達情況 將組織石蠟切片置于60 ℃烤箱中烤片2 h，梯度脫蠟，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution，PBS)浸洗3次，5 min/次，0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)微波加熱至沸騰，抗原修復30 min；自然冷卻后PBS浸洗3次，5 min/次，體積分數(shù)3% H2O2溶液室溫孵育10 min，PBS浸洗3次，5 min/次，體積分數(shù)10%山羊血清溶液室溫封閉30 min；滴加小鼠抗整合素ανβ3一抗(1∶ 200)，4 ℃孵育過夜；PBS浸洗3次，5 min/次，滴加山羊抗鼠HRP標記二抗(1∶ 100)，室溫孵育30 min，PBS浸洗3次，5 min/次；滴加適當比例的HRP標記鏈霉卵白素，室溫孵育30 min，PBS浸洗3次，滴加DAB顯色液顯色15 s～3 min，顯微鏡下觀察組織呈褐色，立即放入水中終止，蘇木素染液進行核復染2～3 min，用水沖洗3～7 min，返藍后快速鹽酸乙醇分化數(shù)秒，自來水沖洗5 min，將切片吹干后，中性樹脂封片，倒置顯微鏡下觀察并拍照記錄。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。檢測指標數(shù)據(jù)經(jīng)Shapira-Wilk檢驗符合正態(tài)分布，以mean±SD表示，經(jīng)Levene檢驗方差齊。采用完全隨機分組實驗設計，組間總體比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠濾過術后平均眼壓比率比較

各組大鼠術后第3天眼壓均較術前明顯降低，術后1～2周逐漸恢復至術前水平。術后2周，對照組、TGF組、LM609組和TGF+LM609組平均眼壓比率分別為(101.80±4.44)%、(103.90±5.65)%、(94.10±7.45)%和(100.60±4.61)%，總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=4.571，P=0.010)，其中TGF組和TGF+LM609組平均眼壓比率均大于對照組，TGF組平均眼壓比率大于TGF+LM609組，差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)；LM609組平均眼壓比率均小于對照組、TGF組和TGF+LM609組，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)(圖1)。

圖1 大鼠濾過術后2周各組平均眼壓比率比較 F=4.571，P=0.010.與對照組比較，aP<0.05；與TGF組比較，bP<0.05；與LM609組比較，cP<0.05(單因素方差分析，LSD-t檢驗，n=8) TGF：轉(zhuǎn)化生長因子；LM609：整合素ανβ3受體阻斷劑Figure 1 Comparison of the mean intraocular pressure ratio among various groups at 2 weeks after filtering surgery F=4.571,P=0.010.Compared with the control group,aP<0.05;compared with the TGF group,bP<0.05;compared with the LM609 group,cP<0.05 (One-way ANOVA,LSD-t test,n=8) TGF:transforming growth factor;LM609:integrin ανβ3 receptor antagonist

2.2 各組大鼠濾過術后結(jié)膜濾泡形態(tài)改變及濾過泡生存比率比較

濾過術后第3天，各組均可觀察到隆起的、微白的濾過泡。術后第2周，對照組和TGF+LM609組濾過泡變?yōu)楸馄綘?，球結(jié)膜組織稍有增厚且有新生血管長入，球結(jié)膜下可見包裹的微管末端；TGF組球結(jié)膜組織明顯增厚，并有大量血管長入；LM609組濾過泡形態(tài)較術后3 d明顯局限，球結(jié)膜組織未見明顯增厚，且LM609組結(jié)膜組織血管化較其他各組明顯減少(圖2)。對照組、TGF組、LM609組和TGF+LM609組濾過泡生存比率分別為(17.24±4.51)%、(8.80±2.35)%、(31.04±6.83)%和(15.86±4.67)%，總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=37.720，P<0.05)，其中TGF組濾過泡生存比率明顯低于對照組、LM609組和TGF+LM609組，LM609組濾過泡生存比率明顯高于對照組和TGF+LM609組，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，對照組與TGF+LM609組濾過泡生存比率比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.860)。

圖2 各組大鼠濾過術后3 d、2周結(jié)膜濾過泡形態(tài) 濾過術后3 d，各組均可觀察到隆起的、微白的囊泡樣濾過泡。術后2周，對照組和TGF+LM609組濾過泡變?yōu)楸馄綘?，球結(jié)膜組織稍有增厚且有新生血管長入，球結(jié)膜下可見包裹的微管末端；TGF組球結(jié)膜組織明顯增厚充血，并有大量的血管長入其中；LM609組濾過泡形態(tài)較術后3 d明顯局限 TGF：轉(zhuǎn)化生長因子；LM609：整合素ανβ3受體阻斷劑Figure 2 Morphology of conjunctival filtering blebs in various groups at 3 days and 2 weeks after filtering surgery On the third day after surgery,the raised and tinted white filtering blebs were found in each group.Two weeks after operation,the filtering blebs became flat,and the bulbar conjunctiva tissue was thickened with neovascularization,and wrapped end of the microtubule could be seen under the bulbar conjunctiva in the control group and TGF+LM609 group;the conjunctival tissue in the TGF group was obviously thickened and congested with neovascularization;more significantly localized filtering bleb than that on the third day after operation was found in the LM609 group TGF:transforming growth factor;LM609:integrin ανβ3 receptor antagonist

2.3 各組大鼠濾過術后2周濾過泡通道結(jié)膜組織的膠原沉積情況

對照組可見球結(jié)膜組織增厚，球結(jié)膜可見少許紅色膠原纖維沉積；TGF組可見結(jié)膜組織仍有明顯的炎癥反應，中性粒細胞、單核巨噬細胞浸潤，大量成纖維細胞增生，球結(jié)膜下全層均可見致密的紅色膠原纖維沉積。LM609組及TGF+LM609組炎性細胞均較TGF組減少，可見部分成纖維細胞增生，球結(jié)膜下可見較疏松的紅色Ⅰ型膠原纖維及部分呈綠色的Ⅲ型膠原纖維(圖3)。

圖3 各組大鼠濾過術后2周手術區(qū)組織炎性改變及纖維化程度的比較(HE，苦味酸-天狼星紅 ×200，標尺=100 μm) 蘇木精-伊紅染色結(jié)果可見各組手術區(qū)結(jié)膜組織中大量炎性細胞聚集，成纖維細胞增生；苦味酸-天狼星紅染色顯示各組手術區(qū)結(jié)膜組織膠原沉積；TGF組可見結(jié)膜組織下全層致密的紅色膠原纖維沉積，LM609組及TGF+LM609組可見結(jié)膜下組織較為疏松的紅色Ⅰ型膠原纖維以及部分呈綠色的Ⅲ型膠原組織 TGF：轉(zhuǎn)化生長因子；LM609：整合素ανβ3受體阻斷劑Figure 3 Inflammatory changes and the degree of fibrosis in the operative area of rats in various groups at 2 weeks after filtering surgery(HE,picric acid-sirius red ×200,bar=100 μm) A large number of inflammatory cells and the proliferation of fibroblasts were found in the conjunctiva in the operation area by hematoxylin-eosin staining.The collagen deposition in the conjunctiva in the operation area was found by picric acid-sirius red staining.The dense red collagen fiber deposition was found in the TGF group,and the loose red type Ⅰ collagen fibers and some green type Ⅲ collagen fibers were found in the LM609 group and the TGF+LM609 group TGF:transforming growth factor;LM609:integrin ανβ3 receptor antagonist

2.4 各組大鼠濾過術后2周手術區(qū)球結(jié)膜組織整合素αν、β3相對表達量比較

對照組、TGF組、LM609組和TGF+LM609組術后2周手術區(qū)球結(jié)膜組織整合素αν相對表達量分別為0.11±0.03、0.77±0.12、0.06±0.02和0.23±0.13，整合素β3相對表達量分別為0.09±0.06、0.63±0.08、0.12±0.04和0.13±0.05，各組間手術區(qū)結(jié)膜組織整合素αν、β3相對表達量總體比較差異均有統(tǒng)計學意義(F=56.550、93.380，均P<0.05)；TGF組手術區(qū)結(jié)膜組織整合素αν、β3相對表達量明顯高于對照組、LM609組和TGF+LM609組，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，LM609組整合素αν、β3相對表達量與對照組及TGF+LM609組比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。對照組與TGF+LM609組整合素αν、β3相對表達量比較差異均無統(tǒng)計學意義(P=0.240、0.090)(圖4)。

圖4 Western blot檢測各組大鼠濾過術后2周手術區(qū)球結(jié)膜組織中整合素αν、β3表達變化的比較 A：各組整合素αν、β3蛋白表達電泳圖 B：各組整合素αν蛋白相對表達量比較 F=56.550，P<0.05.與對照組比較，aP<0.05；與TGF組比較，bP<0.05(單因素方差分析，LSD-t檢驗，n=3) C：各組整合素β3蛋白相對表達量比較 F=93.380，P<0.05.與對照組比較，aP<0.05；與TGF組比較，bP<0.05(單因素方差分析，LSD-t檢驗，n=3) 1：對照組；2：TGF組；3：LM609組；4：TGF+LM609組 β-actin:β-肌動蛋白Figure 4 Comparison of integrin αν and β3 expression levels in the rat conjunctival tissue in the operation area at 2 weeks after filtering surgery among various groups by Western blot A:Electrophoretogram of integrin αν and β3 protein expression among various groups B:Comparison of integrin αν relative expression levels among various groups F=56.550,P<0.05.Compared with the control group,aP<0.05;compared with the TGF group,bP<0.05 (One-way ANOVA,LSD-t test,n=3) C：Comparison of integrin β3 relative expression level among various groups F=93.380,P<0.05.Compared with the control group,aP<0.05;compared with the TGF group,bP<0.05 (One-way ANOVA,LSD-t test,n=3) 1:Control group;2:TGF group;3:LM609 group;4:TGF+LM609 group

2.5 各組大鼠濾過術后2周結(jié)膜組織整合素ανβ3表達及定位情況

對照組結(jié)膜組織可見大量整合素ανβ3陽性細胞，主要集中在手術區(qū)結(jié)膜組織；TGF組結(jié)膜組織全層均可見大量整合素ανβ3陽性細胞，角膜緣切口及微管周圍分布較多；LM609組和TGF+LM609組結(jié)膜組織整合素ανβ3陽性細胞數(shù)量明顯少于對照組和TGF組；TGF+LM609組結(jié)膜組織整合素ανβ3陽性細胞主要集中在微管周圍組織中(圖5)。

圖5 免疫組織化學染色檢測各組大鼠濾過術后2周手術區(qū)結(jié)膜組織整合素ανβ3定位表達情況(DAB ×400，標尺=20 μm) TGF組可見手術區(qū)結(jié)膜組織中大量整合素ανβ3陽性細胞(箭頭)，LM609組及TGF+LM609組陽性細胞(箭頭)數(shù)量均明顯減少 A：對照組 B：TGF組 C：LM609組 D：TGF+LM609組Figure 5 Expression of integrin ανβ3 in rat conjunctival tissues in the operation area at 2 weeks after filtering surgery by immunohistochemical staining (DAB ×400,bar=20 μm) In the TGF group,there were a large number of integrin ανβ3-positive cells (arrow) in the conjunctival tissue in the operation area,and the number of the positive cells (arrow) was significantly decreased in the LM609 group and the TGF+LM609 group A:Control group B:TGF group C:LM609 group D:TGF+LM609 group

3 討論

整合素家族在各種組織中均有表達，介導細胞及細胞外基質(zhì)之間的反應，調(diào)控細胞分化、增生與凋亡的各個過程，其中整合素ανβ3受體存在于破骨細胞、血管平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞和某些腫瘤組織中的新生血管內(nèi)皮細胞膜，參與細胞與基質(zhì)、細胞之間的黏附，在腫瘤生長、局部浸潤、轉(zhuǎn)移以及新生血管生長過程中起著重要作用[12-16]。Soldi等[12]研究發(fā)現(xiàn)，整合素ανβ3介導內(nèi)皮細胞與細胞外基質(zhì)之間的黏附，對血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)受體2的激活至關重要，整合素ανβ3協(xié)同強化VEGF-A165引起的VEGF受體2磷酸化及促有絲分裂作用，參與VEGF-A165對VEGF受體2的激活，從而促進血管的生成。在新生血管形成過程中，整合素與骨橋蛋白有協(xié)同作用，也可以誘導成纖維細胞聚集、增加細胞黏附侵襲能力，因此整合素也被稱為新生血管的標志之一[16]。

研究表明整合素ανβ3在血管形成過程中與多種細胞因子具有協(xié)同作用，如堿性成纖維細胞生長因子、TGF-β、基質(zhì)金屬蛋白酶等，其中TGF-β是目前較為確定能上調(diào)整合素表達的因子[8,15]。在肝臟、肺臟等臟器纖維化的相關研究中發(fā)現(xiàn)整合素ανβ3可能在其中發(fā)揮調(diào)控膠原合成及肌成纖維細胞形成的重要作用[5,17-18]。有研究報道，在人的肺成纖維細胞中，整合素ανβ3與TGF-β Ⅱ型受體結(jié)合參與細胞增生的作用[5]。整合素ανβ3可能介導了肝臟星狀細胞向肌成纖維細胞的表型轉(zhuǎn)化，在肝纖維化過程中發(fā)揮重要作用[17]。在硬皮病來源的成纖維細胞中，TGF-β的促纖維化作用是通過整合素ανβ3介導[18]。本實驗中大鼠青光眼濾過術后結(jié)膜組織成纖維細胞大量表達整合素ανβ3，TGF-β2可促進整合素αν、β3的表達，可能與術后結(jié)膜組織新生血管長入有關，在結(jié)膜瘢痕形成過程中起著重要作用。

目前關于TGF-β與整合素ανβ3之間相互作用的關系尚無定論。一些研究者認為TGF-β能促進整合素ανβ3的表達，但也有研究者認為TGF-β不能促進整合素ανβ3,或者能促進整合素αν表達但不能促進整合素β3的表達[6]。本研究結(jié)果顯示，TGF-β2能促進大鼠濾過術后結(jié)膜組織中整合素αν、β3的表達和成纖維細胞中整合素ανβ3的表達。研究報道整合素ανβ3特異性阻斷劑LM609可抑制結(jié)締組織生長因子誘導的平滑肌肌動蛋白、I型及III型膠原表達，并抑制成纖維細胞的收縮[19]。本研究結(jié)果也顯示，LM609可抑制大鼠濾過術后結(jié)膜組織中整合素αν、β3的表達，減少術后結(jié)膜組織膠原的沉積。Paikal等[20]研究發(fā)現(xiàn)，整合素α3、α2和α5特異性抗體可抑制人Tenon囊成纖維細胞的增生和遷移。

本研究結(jié)果顯示，TGF-β2可以促進大鼠濾過術后結(jié)膜組織中整合素ανβ3的表達，結(jié)膜組織瘢痕形成顯著，組織血管化，顯著降低濾過泡生存率；抑制整合素ανβ3表達后，術后結(jié)膜組織膠原沉積及組織血管化均明顯減少，濾過泡生存延長，提示TGF-β2可能通過整合素ανβ3參與結(jié)膜瘢痕形成過程，為術后抗瘢痕形成提供依據(jù)，但其具體作用機制仍有待進一步研究。

利益沖突本研究為遵義醫(yī)科大學第三附屬醫(yī)院眼科和陸軍軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院眼科聯(lián)合完成項目，所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明朱曉燕：設計實驗，研究實施，文稿書寫；謝琳：指導實驗進展，對文稿審閱修改；譚薇：設計實驗，指導實驗進展，審閱文稿