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熒光免疫層析法檢測(cè)2019-nCoV特異性抗體用于新冠病毒感染篩查價(jià)值探討

2021-04-04 04:33:30李齊光徐令清鐘國(guó)權(quán)
當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2021年7期
關(guān)鍵詞:層析核酸特異性

李齊光,徐令清,鐘國(guó)權(quán)

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第六醫(yī)院/清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東 清遠(yuǎn) 511518)

2019年12 月,我國(guó)武漢開始爆發(fā)一種新型肺炎,導(dǎo)致這種肺炎的病毒被世衛(wèi)組織正式命名為2019 新型冠狀病毒(2019-nCoV)[1]。我國(guó)是疫情爆發(fā)的第一個(gè)重災(zāi)區(qū),但目前在我國(guó)疫情已得到初步有效控制,我國(guó)已進(jìn)入復(fù)工、復(fù)產(chǎn)、復(fù)學(xué)階段,然而在全球范圍內(nèi)新型冠狀病毒感染患者數(shù)量仍在劇增。鑒于目前嚴(yán)峻的國(guó)際疫情形勢(shì),疑似病毒感染病例的確診為疫情防控的重要環(huán)節(jié)。

在疫情初期,我國(guó)科學(xué)家們迅速利用已有的科學(xué)方法檢測(cè)出了這一新型冠狀病毒的核酸序列。核酸檢測(cè)也成為確診病毒感染的關(guān)鍵證據(jù),然而,核酸檢測(cè)存在對(duì)檢測(cè)要求較高、漏診率高,靈敏度低等不足。而目前檢驗(yàn)科常規(guī)采用的方法是熒光定量PCR 檢測(cè)2019-nCoV 核酸,此方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件、設(shè)施、人員要求高,并且影響因素多、操作步驟多、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),檢出率低,在許多醫(yī)院并不具有進(jìn)行核酸檢測(cè)的條件。隨著對(duì)疾病認(rèn)識(shí)的深入和診療經(jīng)驗(yàn)的積累,為進(jìn)一步加強(qiáng)早診早治,中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的最新版《新型冠狀病毒肺炎診療方案(第七版)》已明確將2019-nCoV 特異性抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)、病毒基因測(cè)序共同列為疑似病例確診的病原學(xué)證據(jù)之一[3]。熒光免疫層析法是特異性抗體檢測(cè)方法的重要組成部分,本研究基于2 322 例利用免疫熒光層析法進(jìn)行特異性抗體檢測(cè)的檢測(cè)結(jié)果分析,探討熒光免疫層析法檢測(cè)2019-nCoV特異性抗體IgM和IgG用于新冠肺炎篩查價(jià)值,為新型冠狀肺炎的抗體診斷提供依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年2月至2020年10月某醫(yī)院2 322例診療患者利用免疫熒光層析法進(jìn)行2019-nCoV 特異性抗體IgM和IgG檢測(cè)的臨床資料。

1.2 方法 所有研究對(duì)象均采集空腹靜脈血3 mL(EDTA 抗凝血),將血漿分離后進(jìn)行2019-nCoV特異性抗體IgM和IgG檢測(cè)。熒光層析法試劑盒由廣州萬(wàn)孚生物科技有限公司提供,檢測(cè)儀器為配套的FS-301干式熒光免疫分析儀,檢測(cè)結(jié)果以測(cè)試熒光值與內(nèi)置質(zhì)控?zé)晒庵档谋戎祦肀硎荆礈y(cè)試熒光值/內(nèi)置質(zhì)控?zé)晒庵?,cutoffindex,COI),樣本中的2019-nCoV IgM或IgG抗體的量與熒光強(qiáng)度成正相關(guān),COI為1.0~1.1時(shí)記為疑似陽(yáng)性,>1.1記為陽(yáng)性,<1.0記為陰性。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄光免疫層析法2019-nCoV抗體檢測(cè)結(jié)果,包括陽(yáng)性率、疑似陽(yáng)性率。觀察2019-nCov 特異性抗體IgG檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.00統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性分析,計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示。

2 結(jié)果

2.1 在2019-nCoV 特異性抗體IgM 和IgG 檢測(cè)中免疫熒光層析法的檢測(cè)結(jié)果 2 322 例樣本中,采用萬(wàn)孚熒光免疫層析法試劑盒檢測(cè)出IgM 或IgG 抗體陽(yáng)性28 例,陽(yáng)性率為1.21%;2019-nCoV 特異性抗體 IgG 檢測(cè)陽(yáng)性 9 例,陽(yáng)性率為0.78%,疑似陽(yáng)性4 例,疑似陽(yáng)性率為0.17%;在特異性抗體IgM 檢測(cè)陽(yáng)性共19 例,陽(yáng)性率為1.18%,疑似陽(yáng)性共 6 例,疑似陽(yáng)性率為0.26%

2.2 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本年齡分布統(tǒng)計(jì)2019-nCov 特異性抗體IgG 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡>45 歲的比例為61.54%(1 429/2 322);2019-nCov 特異性抗體IgM 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡>45歲的比例為72.00%(1 672/2 322)。

3 討論

與武漢肺炎相關(guān)的病毒經(jīng)過中國(guó)武漢病毒研究所的對(duì)該病毒的全基因組序列進(jìn)行研究之后證實(shí)這是一種全新冠狀病毒[4]。基因序列特征與SARS-CoV 和MERS-CoV 相似,但也具有顯著不同。新型冠狀病毒的外膜具有突起,形似皇冠,主要通過飛沫經(jīng)呼吸道傳播,但也可經(jīng)接觸傳播,已有研究證實(shí)甚至可以通過糞便等排泄物傳播。其臨床表現(xiàn)與肺炎癥狀相似,主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、無力、呼吸困難等癥狀,部分患者可能伴有胃腸道癥狀,嚴(yán)重者甚至可能導(dǎo)致急性呼吸窘迫綜合征,最終死亡[5]。此外,新型冠狀病毒感染具有傳播迅速,傳染力強(qiáng)的特點(diǎn),雖然目前根據(jù)病毒結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)并篩選可能藥物,部分化學(xué)藥物已進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)并得到抗新冠病毒效果,但其在體內(nèi)是否具有相當(dāng)?shù)幕钚匀孕柩芯?。同時(shí),對(duì)已有的中醫(yī)方劑進(jìn)行篩選,著重考察前期治療中效果明顯的方案,對(duì)患者進(jìn)行中西醫(yī)結(jié)合治療,盡可能提高救治率。此外,進(jìn)一步深入開展病毒結(jié)構(gòu)和各蛋白功能及位點(diǎn)的研究,以期盡快研制出特異性高的抗體及疫苗。因此,在戰(zhàn)勝新型冠狀肺炎病毒的過程中,對(duì)于疑似患者的確診以及普通人群的檢測(cè)是疫情防控的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)室檢查手段以病原學(xué)檢測(cè)為主,包括核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)、CT診斷。

新型冠狀病毒的遺傳物質(zhì)為RNA,屬于RNA 病毒,針對(duì)RNA 病毒的診斷,核酸檢測(cè)是主要的病原學(xué)檢測(cè)手段,且常常被作為“金標(biāo)準(zhǔn)”。其中較成熟的核酸檢測(cè)手段有實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、依賴核酸序列擴(kuò)增(NASBA)、重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA)和基因芯片等[6]。核酸檢測(cè)具有高通量、特異性較強(qiáng)、取材少等優(yōu)點(diǎn),但核酸檢測(cè)結(jié)果除了患者樣品自身因素外,還受許多因素的影響,例如保溫時(shí)間、操作環(huán)境、樣品保存等,靈敏度較弱,對(duì)于操作條件要求較高,成本高,并不是大多數(shù)醫(yī)院都具有條件進(jìn)行核酸檢測(cè),還可能存在一定的感染風(fēng)險(xiǎn)。目前還在臨床上發(fā)現(xiàn),用核酸檢測(cè)也存在一定的漏檢率。因此,僅憑借核酸檢測(cè)結(jié)果并不能滿足新型冠狀肺炎病毒感染診斷的需求。

血清學(xué)檢測(cè)也是病毒感染檢測(cè)的重要實(shí)驗(yàn)方法之一,對(duì)于核酸檢測(cè)之后的結(jié)果具有很好的輔助檢測(cè)功能。一旦發(fā)生病毒感染,機(jī)體的免疫系統(tǒng)會(huì)迅速啟動(dòng)免疫防御功能。針對(duì)進(jìn)入機(jī)體的病原體所產(chǎn)生的抗原,主要由T淋巴細(xì)胞發(fā)揮作用。血清學(xué)檢測(cè)的原理是抗原抗體的特異性結(jié)合免疫反應(yīng)。在病毒感染早期,機(jī)體內(nèi)的特異性抗體以IgM 為主,提示病毒現(xiàn)行感染或新近感染;機(jī)體進(jìn)行再次免疫應(yīng)答時(shí)產(chǎn)生的主要抗體是IgG,提示病情進(jìn)入恢復(fù)期或存在既往感染[7]。關(guān)于特異性抗體檢測(cè)在新型冠狀病毒感染的應(yīng)用價(jià)值分析,目前已有相當(dāng)多的學(xué)者進(jìn)行了大量分析,說明了其雖不能單獨(dú)作為診斷依據(jù),但能作為核酸檢測(cè)重要輔助檢測(cè)方式的應(yīng)用價(jià)值。血清學(xué)檢測(cè)作為重要的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段,所需的材料簡(jiǎn)單易選材,保存和運(yùn)輸、操作條件要求不高,因此,對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求低,并且抗體穩(wěn)定性較高沒有器官組織特異性,在一定程度上可以彌補(bǔ)核酸檢測(cè)的漏檢率[8]。

本研究中,通過對(duì)2 322 例患者進(jìn)行熒光免疫層析法檢測(cè),對(duì)2019-nCoV特異性抗體IgM和IgG的數(shù)據(jù)記錄,可以發(fā)現(xiàn)在這2322 例樣本中,特異性抗體總陽(yáng)性率為1.21%,其中2019-nCoV 特異性抗體IgG 檢測(cè)中,陽(yáng)性率為0.78%;在特異性抗體IgM 中,陽(yáng)性率為1.18%;疑似陽(yáng)性檢出率分別為0.17%和0.26%。IgM 和IgG 的陽(yáng)性檢測(cè)率和疑似陽(yáng)性檢出率差別不大,且檢出率均不高。此外針對(duì)陽(yáng)性檢出的個(gè)體資料進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)2019-nCov 特異性抗體IgG 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡>45歲的比例為61.54%;2019-nCov 特異性抗體IgM 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的樣本中年齡>45歲的比例為72.00%。即說明特異性抗體檢測(cè)陽(yáng)性和疑似陽(yáng)性的人群中,中老年人的比例稍高。原因可能在于中老年人的機(jī)體免疫能力較弱,血液中可能存在較多某些可能使紅細(xì)胞發(fā)生溶血的物質(zhì),造成假陽(yáng)性。此外,老年人大多存在一些基礎(chǔ)疾病,可能服用某些藥物,導(dǎo)致體內(nèi)血液中存在一些異常蛋白抗體或特殊物質(zhì),從而影響抗體檢測(cè),造成假陽(yáng)性[9-10]。

綜上所述,在新型冠狀病毒的檢測(cè)中,核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)均具有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),兩者結(jié)合能夠提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和效率,降低漏檢率和假陽(yáng)性,有利于新型冠狀病毒感染的早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療,有效控制疫情。熒光免疫層析法這一技術(shù)用于一般人群抗體檢測(cè)特異性高,假陽(yáng)性率低。因此,熒光免疫層析技術(shù)檢測(cè)新型冠狀病毒抗體水平可作為核酸補(bǔ)充手段用于一般人群篩查。

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