肖善勢，張愛菊，羅偉，郝雅賓，費晨陽，周志明*

(1.浙江省淡水水產(chǎn)研究所中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所浙江研究中心 農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點實驗室浙江省淡水水產(chǎn)遺傳育種重點實驗室，浙江 湖州 313001； 2.湖州湖旺水產(chǎn)種業(yè)有限公司，浙江 湖州 313000)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)是鱸形目、太陽魚科、黑鱸屬的一種肉食性魚類，原產(chǎn)美國密西西比河流域，于1983年引進中國，具有生長快速、抗病強、營養(yǎng)豐富且味道鮮美的特點，是我國重要的名優(yōu)淡水養(yǎng)殖品種[1-2]。大口黑鱸優(yōu)鱸3號是以大口黑鱸優(yōu)鱸 1號與大口黑鱸北方亞種引進群體作為親本選育出的新品種，其生長速度更快，比優(yōu)鱸1號平均提高17.1%[3]。目前，大口黑鱸人工繁殖多是半人工的形式，即自然交配產(chǎn)卵、人工孵化[4]，而水溫是人工孵化的關(guān)鍵因素之一。有研究[5-6]表明，水溫可通過影響孵化酶的分泌及活性來影響孵化率：過低水溫會放緩胚胎的發(fā)育速度；較高水溫會影響胚胎的分裂、分化，降低孵化酶的活性。因此，設(shè)置適宜的孵化水溫十分重要。至今，有關(guān)水溫對魚類胚胎發(fā)育影響的研究較多[7-11]，但由于大口黑鱸產(chǎn)黏性卵，繁殖時親魚將卵產(chǎn)在魚巢上，受精卵計數(shù)困難，不利于計算孵化率和出苗率，有關(guān)大口黑鱸優(yōu)鱸3號最適孵化溫度的研究較少[4]。因此，本研究通過設(shè)置不同的溫度梯度和孵化裝置，探究大口黑鱸優(yōu)鱸3號胚胎孵化的適宜水溫及裝置，以期為提高大口黑鱸優(yōu)鱸3號孵化率和出苗率提供一定的數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 受精卵的獲取

試驗在湖州湖旺水產(chǎn)種業(yè)有限公司的繁殖基地進行，親魚在公司溫棚中培育。受精卵的獲取采用人工魚巢、自然交配產(chǎn)卵的方式獲得。將兩片50 cm×30 cm的棕片用鐵絲固定在一起做成魚巢，用竹片將魚巢固定在親魚池池底，以魚巢能平鋪在池底為準(zhǔn)。魚巢距離岸邊約1.5 m，魚巢間距1.0～1.5 m。待觀察到親魚產(chǎn)卵后將棕片取出，計數(shù)受精卵。

1.2 方法

試驗設(shè)20、22、24、26和28 ℃共5個孵化用水溫度梯度。孵化用水為基地沉淀池水經(jīng)過濾、滅菌處理后的水，置于60 L加蓋泡沫箱中。用加熱棒進行控溫，水溫變化幅度不超過0.5 ℃。試驗開始前一天將水溫加熱到設(shè)計溫度，并開啟增氧泵24 h連續(xù)曝氣，孵化期間孵化水體溶氧在7 mg·L-1以上，pH 7.5～8.5。

取出后的棕片置于盆中，輕輕抖動棕片使黏附在其上的受精卵掉落，每300粒受精卵為一組置于泡沫箱中的孵化裝置。孵化裝置為自制孵化框(用80目篩絹網(wǎng)黏附在直徑25 cm的帶孔塑料筐內(nèi)，框內(nèi)外水體可自由交換，以保證孵化框內(nèi)溶氧充足)和孵化盆(直徑20 cm的不銹鋼盆)。為避免水體溫差過大對受精卵造成的應(yīng)急反應(yīng)，將泡沫箱內(nèi)水體溫度在2 h內(nèi)緩慢從26 ℃逐步升/降到設(shè)置溫度。孵化框組和孵化盆組分別設(shè)2次和3次重復(fù)。為保證水中溶氧充足，孵化盆組每4 h換水1次，更換用水為泡沫箱中的水。計算孵化率和出苗率[12]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用Excel 2013和SPSS 20.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。采用獨立樣本t檢驗和單因素方差分析，P< 0.05為差異顯著，P< 0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 對受精卵孵化時間的影響

觀察發(fā)現(xiàn)，在孵化盆組中試驗4 h，26 ℃處理胚胎發(fā)育已至肌節(jié)效應(yīng)期；28 ℃處理胚胎多數(shù)在肌節(jié)效應(yīng)期，同時，有少量受精卵達到心跳期。試驗12 h，28 ℃處理已全部出膜；26 ℃處理發(fā)育至出膜期，僅少數(shù)未出膜；24 ℃處理胚胎處于出膜期，但未出膜數(shù)量明顯多于26 ℃處理；22 ℃處理仍處于心跳期，僅少量出膜；20 ℃處理處于心跳期，未發(fā)現(xiàn)出膜仔魚。試驗23 h，僅20 ℃處理少量未出膜，其他各處理均已完全出膜。孵化盆和孵化框的大口黑鱸優(yōu)鱸3號受精卵在20～28 ℃水溫下均可孵化，但各溫度處理孵化所需時間不同，隨著水溫的升高仔魚出膜所需時間逐漸變短，28 ℃處理出膜最快。

2.2 對受精卵孵化率和出苗率的影響

試驗結(jié)果(圖1)顯示，2種孵化裝置的孵化率不同，整體上隨著水溫的增高，孵化率呈先升高、后降低的趨勢。除26 ℃水溫處理孵化框組孵化率高于孵化盆組外，其他各溫度下均低于孵化盆組。但獨立樣本t檢驗分析發(fā)現(xiàn)，孵化裝置對孵化率的影響無顯著差異。孵化盆中各溫度處理出膜仔魚在24～72 h陸續(xù)死亡，導(dǎo)致各溫度處理平游仔魚數(shù)量為0。孵化盆組中孵化率最大值和最小值分別出現(xiàn)在24和26 ℃處理，為67.3%和39.4%。

圖1 在孵化盆和孵化框裝置下不同水溫處理的孵化率

采用孵化框孵化時，20～26 ℃處理孵化率和出苗率均呈增加趨勢，在26 ℃達到最大值，分別為66.0%和62.5%(圖1～2)；在28 ℃水溫下孵化率和出苗率均最低，分別為27.2%和23.5%。多重比較發(fā)現(xiàn)，28 ℃處理孵化率同24和26 ℃處理孵化率之間差異顯著，其余各處理之間差異不顯著；26 ℃處理與20、22和28 ℃處理之間出苗率差異顯著，24與28 ℃處理出苗率之間差異顯著，其余各處理之間出苗率差異不顯著。

圖2 在孵化框裝置下不同水溫處理的出苗率

3 小結(jié)與討論

魚類屬于變溫動物，其整個生活史都不同程度地受到水溫的影響。水溫是決定魚類胚胎發(fā)育時間、孵化率、出苗率的重要因子。在一定水溫范圍內(nèi)，胚胎發(fā)育速度與孵化水溫成正比，當(dāng)水溫升高時，發(fā)育加快；而當(dāng)水溫降低時則發(fā)育緩慢[13]。胡振禧等[14]研究發(fā)現(xiàn)，斑鱖胚胎發(fā)育最適水溫為20～26 ℃，在此溫度區(qū)間通過提高水溫可縮短孵化時間，但當(dāng)水溫達28 ℃時，孵化率顯著下降。也有研究[15]報道，大口黑鱸在17～28 ℃水溫下可自然繁殖。本研究共設(shè)5個溫度處理，發(fā)現(xiàn)水溫在20～28 ℃時，大口黑鱸優(yōu)鱸3號受精卵均可孵化，同時，溫度越高胚胎發(fā)育越快，出膜時間越短，與四川華鳊(Sinibramataeniatus)[16]、拉薩裸裂尻魚(Schizopygopsisyounghusbandi)[17]、大口黑鱸(Micropterussalmoides)[18]和條石鯛(Oplegnathusfasciatus)[19]等的胚胎發(fā)育對水溫的響應(yīng)一致。由此說明，在不影響孵化率的情況下，可以適當(dāng)提高水溫來縮短大口黑鱸優(yōu)鱸3號受精卵孵化時間。試驗結(jié)果顯示，各溫度處理下優(yōu)鱸3號孵化時數(shù)小于吳慶龍等[20-21]的研究結(jié)果。分析可能是由于以下3個原因造成：1)人工控溫使親魚池水溫保持在25 ℃上下，水溫較高；2)采集魚巢前受精卵在高水溫環(huán)境下已經(jīng)開始發(fā)育；3)試驗中為避免胚胎應(yīng)激反應(yīng)，逐步升/降溫的過程中也可能對孵化時長造成一定的影響。

孵化盆和孵化框?qū)Ψ趸实挠绊懖町惒伙@著。但孵化盆組出膜仔魚陸續(xù)死亡，出苗率為0，可能是由于孵化盆水體過小，沒有形成一定的水流，單個仔魚占據(jù)的水體空間過小導(dǎo)致的結(jié)果；也可能是由于初孵仔魚喜側(cè)臥于魚巢[20]，而孵化盆表面過于光滑，與天然魚巢差異過大所致。說明在孵化盆中的小水體靜水條件下可進行大口黑鱸優(yōu)鱸3號的受精卵孵化，但不宜作為初孵仔魚培育裝置。

試驗表明，孵化框的孵化效果較好，水溫26 ℃時孵化率和出苗率均達最大值，分別為66.0%和62.5%。24和26 ℃處理孵化率、出苗率差異不顯著，當(dāng)水溫達28 ℃時孵化率和出苗率顯著低于24和26 ℃處理。馮曉宇等[4]研究認為，大口黑鱸優(yōu)鱸1號孵化期間水溫可控制在20～26 ℃，最佳孵化水溫為22～24 ℃，與本研究結(jié)果基本一致，但最適孵化水溫略低于本研究的24～26 ℃，可能與大口黑鱸多次產(chǎn)卵有關(guān)，不同批次的受精卵質(zhì)量不同。魚類胚胎孵化受孵化酶的影響，而水溫則是影響孵化酶分泌及活性的重要物理因子，在適宜水溫之內(nèi)，提高水溫可刺激孵化酶的分泌、加快孵化進程，但過高的水溫會降低孵化酶的活性甚至是不可逆性的失活，導(dǎo)致胚胎畸形、死亡、無法出膜[22-24]。同時，較高的水溫也不利于初孵仔魚對卵黃囊的利用、生長和器官分化，導(dǎo)致初孵仔魚體長較短[25-27]，進而影響出苗率。因此，研究認為，24～26 ℃是大口黑鱸優(yōu)鱸3號的適宜孵化溫度，在孵化時可盡量提高水溫縮短胚胎發(fā)育時間。