翟曉虎 ， 曹 斌 ， 賀衛(wèi)華 ， 祝正高 ， 張春莉

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院 , 江蘇 泰州 225300 ； 2. 江蘇珀可醫(yī)療科技有限公司 , 江蘇 泰州 225300)

犬瘟熱(Canine distemper，CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus, CDV)感染引起的急性、高度接觸性傳染病[1]。CDV可以感染犬科、貓科、浣熊科以及非靈長類等動物[2-3]。CDV主要侵害動物的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)[4]，幼齡動物易感，幼犬感染后死亡率較高[5-6]。動物接種疫苗是控制該傳染病的最有效途徑，主要接種的疫苗有滅活苗和弱毒苗，以弱毒苗為主[7]。

目前，動物醫(yī)院注射疫苗的方式仍以普通帶針頭注射器為主，而有些犬、貓對疼痛比較敏感，注射后經(jīng)常會出現(xiàn)一些副作用。無針注射可以降低因注射疼痛而出現(xiàn)的并發(fā)癥，得到臨床獸醫(yī)的認可。無針注射是指進行藥物注射時利用機械裝置產(chǎn)生的推力瞬間將藥液穿過皮膚表皮細胞，像水花均勻分布在皮下或皮內(nèi)的注射方法[8]。如今人醫(yī)有關(guān)無針注射技術(shù)的報道主要集中在胰島素的注射和瘢痕組織藥物注射治療[9-10]。其用于疫苗接種方面可表現(xiàn)為注射效率高、避免交叉感染、抗原分散高和降低動物疼痛感等優(yōu)點。周海龍等[11]對豬瘟活疫苗無針注射的免疫效果進行了評價，而有關(guān)犬無針注射疫苗免疫效果評價的文獻并未查到。本試驗采用無針注射接種犬瘟熱疫苗，觀察注射時疼痛反應(yīng)、副作用并評估免疫效果。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 年齡為42～45日齡健康拉布拉多犬和金毛巡回獵犬，均斷奶且未注射任何疫苗,來自江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院寵物繁育中心。

1.2 試驗材料 衛(wèi)佳伍疫苗(含犬瘟熱抗原Snyder hill株)，購自泰州欣牧寵物用品有限公司(批號：300628A)；犬瘟熱病毒抗體(CDV Ab)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒，購自上海聯(lián)碩生物科技有限公司(貨號：AE93755Ca，批號：201911)；有針注射器；無針注射器(型號：POK-P-I)，由江蘇珀可醫(yī)療科技有限公司提供。

1.3 試驗方法 將30只42～45日齡幼犬隨機分成3組，每組10只；第1組采用有針注射器注射1頭份衛(wèi)佳伍疫苗，第2組使用無針注射器注射1頭份衛(wèi)佳伍疫苗，第3組使用無針注射器注射1/2頭份衛(wèi)佳伍疫苗。第2組、第3組無針注射接種時CO2氣體壓力為1.5 MPa。首免后14 d和28 d，再用同樣的接種劑量和接種途徑進行二免和三免。

1.4 比較2種注射方法接種疫苗后對動物的影響 采用有針注射器和無針注射器接種疫苗后，分別于接種后10 min、30 min、1 h、6 h和12 h觀察疫苗接種部位有無出現(xiàn)紅、腫、熱、痛等炎癥反應(yīng)；觀察注射后幼犬疼痛反應(yīng)、有無藥液滲出；觀察疫苗注射后1 d、3 d和5 d幼犬的食欲、精神狀態(tài)，比較無針注射器和有針注射器接種疫苗后對幼犬的影響。

1.5 CDV抗體檢測 衛(wèi)佳伍疫苗首免后14 d、二免后14 d、三免后14 d頸靜脈采血，分離血清，按照犬瘟熱病毒抗體(CDV Ab)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒操作步驟進行檢測，在450 nm波長處測定OD值，將OD值帶入標準品制作的直線回歸方程，計算每只犬產(chǎn)生的CDV抗體濃度。

1.6 統(tǒng)計分析 用SPSS軟件統(tǒng)計每組犬在免疫后同一時間節(jié)點產(chǎn)生抗體濃度，結(jié)果以平均值±標準差表示，分析各組之間的差異，確定無針注射器對犬瘟熱疫苗免疫效果的影響。

2 結(jié)果

2.1 不同接種方法接種衛(wèi)佳伍疫苗后對犬的影響 2種注射方法接種疫苗后均未出現(xiàn)食欲減退、精神萎靡、藥液滲出等現(xiàn)象。結(jié)果顯示(表1)，有針注射接種疫苗后1只犬接種部位皮膚出現(xiàn)輕微炎癥反應(yīng)，12 h后消失；有針注射接種疫苗時，針刺入皮膚到藥液注射完畢，8只犬出現(xiàn)掙扎和呻吟等疼痛反應(yīng)，而無針注射接種疫苗時，只在接種瞬間因設(shè)備內(nèi)部擊發(fā)裝置撞擊時產(chǎn)生的聲響，犬會出現(xiàn)立耳等集中注意力表現(xiàn)，并無疼痛反應(yīng)。

表1 不同接種方法接種疫苗對犬的影響Table 1 Effects of different vaccination methods on dogs

2.2 各組CDV抗體濃度比較 分別于首免后14 d、 二免后 14 d和三免后14 d采血分離血清，檢測血液里CDV抗體濃度，根據(jù)上海聯(lián)碩生物科技有限公司犬瘟熱病毒抗體(CDV Ab)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒說明書，當測得抗體濃度大于12 ng/L 時，判斷該樣本抗體呈陽性，具有保護作用。結(jié)果顯示(圖1)，采用有針注射方法接種1頭份疫苗和無針注射方法接種1頭份、1/2頭份疫苗，首免、二免和三免后14 d所測的抗體濃度均能達到保護水平。首免后14 d、二免后14 d和三免后14 d所測抗體水平，無針注射方法略高于有針注射。二免后14 d 后體內(nèi)產(chǎn)生的抗體水平大于首免后14 d，說明第2次加強免疫可繼續(xù)提高抗體水平，但是三免后14 d，3種注射方法抗體水平均呈現(xiàn)下降趨勢，但仍可達到保護水平。

圖1 免疫后CDV抗體濃度檢測Fig.1 Detection of CDV antibody concentration after immunization注：小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同或無標記表示差異不顯著(P>0.05)Note: Different lowercase letter superscripts show significant difference (P<0.05)，same letter or no letter superscript show no significant difference (P>0.05)

3 討論

3.1 無針注射接種疫苗的有效性 2種注射方法接種衛(wèi)佳伍疫苗后，首免后14 d的CDV濃度均達到最低有效濃度，具有保護作用，說明犬采用無針注射接種疫苗是有效的；本試驗首免后14 d、二免后14 d和三免后14 d對比2種注射方法抗體生成濃度，無針注射組抗體水平略高；無針接種1/2頭份疫苗和有針注射1頭份疫苗相比，相同階段無針注射1/2頭份疫苗產(chǎn)生的抗體水平略高，這可能是因為無針注射藥液進入體內(nèi)瞬間分散，這種分散的抗原有利于與免疫細胞的接觸，生成相對較多的抗體。周海龍等[11]也曾報道，無針注射1/2頭份豬瘟活疫苗和使用有針注射器注射1頭份疫苗產(chǎn)生抗體相當。本試驗檢測三免后14 d的CDV抗體濃度低于首免后14 d、二免后14 d。其原因是按照該疫苗免疫程序接種，二免后抗體水平已經(jīng)很高，第3次免疫中和了部分抗體，導(dǎo)致血清抗體濃度下降，但仍大于12 ng/L，具有保護作用。

3.2 無針注射的安全性 本試驗采用的2種接種疫苗方法，無針注射后沒有出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡及注射部位炎癥反應(yīng)等副作用，而且明顯降低犬疼痛感，說明采用無針注射器接種疫苗是安全的。朱文勇等[12]在無針皮內(nèi)免疫接種Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究中也評估了無針接種sIPV疫苗是安全的。

綜上所述，采用無針注射器給犬接種疫苗是安全的、有效的，而且最大的優(yōu)點是降低了動物注射時的疼痛感，進而減小了獸醫(yī)人員給犬接種疫苗時被犬咬傷的風(fēng)險，可代替普通注射器進行疫苗接種。