魏慶雙 梁 吉 祁美慧 姜 凡 孫忠人 吳建麗△

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150001；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

血管新生是一個(gè)動(dòng)態(tài)的復(fù)雜生物學(xué)過程，是多種細(xì)胞因子對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞綜合調(diào)控的結(jié)果，在生長(zhǎng)發(fā)育、創(chuàng)傷愈合、冠心病、腦卒中、脊髓損傷等生理和病理修復(fù)過程中發(fā)揮著重要作用［1］。血管屬于中醫(yī)學(xué)“血脈”“血絡(luò)”“經(jīng)絡(luò)”范疇，是人體氣血運(yùn)行的載體，其中絡(luò)脈中的血絡(luò)與微血管具有相似的結(jié)構(gòu)和功能。針灸具有活血通經(jīng)、消瘀散結(jié)的功效，是治療缺血性疾病的重要外治法?，F(xiàn)代研究表明［2］，針灸能調(diào)整毛細(xì)血管袢排列、血流速度、血液黏度等改善微循環(huán)，還能促進(jìn)毛細(xì)血管新生，建立有效側(cè)支循環(huán)維持營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣供應(yīng)，降低缺血區(qū)細(xì)胞損傷程度。本文將近年來針刺促進(jìn)血管新生的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行歸納和總結(jié)，現(xiàn)綜述如下。

1 血管新生概述

血管新生是指新生的毛細(xì)血管從已存在的血管中出芽與再塑的過程，包括出芽和套疊兩種方式。出芽方式是指新生的毛細(xì)血管在原有血管基礎(chǔ)上發(fā)芽，呈線性向缺氧源方向生長(zhǎng)，直至與其他血管相連、融合成新的微血管網(wǎng)［3］；套疊方式是指原有微血管內(nèi)皮細(xì)胞向管腔內(nèi)延伸、連接形成雙分子層，繼而基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)在雙分子層中心穿孔，誘導(dǎo)周細(xì)胞遷入形成微柱，最終把原血管縱向分為兩條新的毛細(xì)血管［4］。血管重建時(shí)，兩種新生方式常常同時(shí)存在。有研究指出［5］，皮膚修復(fù)早期血管新生以芽生為主，中期以后出現(xiàn)套疊式新生，腦血管新生模式以芽生為主，而肺血管以非芽生為主。

血管新生的過程可分為初期、增生期和成熟期3個(gè)階段。初期，在組織損傷或炎癥介質(zhì)的刺激下，血管誘導(dǎo)因子分泌增多，啟動(dòng)血管新生現(xiàn)象。增生期，微血管細(xì)胞外基質(zhì)降解，管腔壁上細(xì)胞粘附性下降，內(nèi)皮細(xì)胞開始向周圍組織增遷移和侵入。成熟期，內(nèi)皮細(xì)胞分化、延伸形成新的血管腔，微血管網(wǎng)密度增大，經(jīng)過修飾后發(fā)育為有功能的成熟微血管。缺血缺氧后，局部組織發(fā)生血管新生抑制現(xiàn)象，導(dǎo)致代謝產(chǎn)物堆積和氧分供應(yīng)不足，引起細(xì)胞腫脹甚至壞死。

2 針灸促進(jìn)血管新生的相關(guān)機(jī)制

2.1 針灸對(duì)血管新生相關(guān)細(xì)胞的調(diào)控

毛細(xì)血管由內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞和基底膜構(gòu)成。血管新生時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞間連接形成的毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)并不穩(wěn)定，而周細(xì)胞募集、遷移到內(nèi)皮細(xì)胞管腔外保證了新生血管床的穩(wěn)定性，促進(jìn)了新生血管的成熟，兩種細(xì)胞相互聯(lián)系共同新生血管的形態(tài)和功能。

2.1.1 針灸調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管新生 血管內(nèi)皮細(xì)胞主要來源于兩部分，一為骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）的分化，二是原有內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂。組織受損發(fā)出的信號(hào)會(huì)促使骨髓EPCs動(dòng)員、遷移至外周循環(huán)參與血管新生。有研究認(rèn)為循環(huán)中EPCs數(shù)量可作為缺血性疾病臨床預(yù)后獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。蔡紹皙等［6］觀察電針對(duì)腦缺血大鼠外周血EPCs的影響，發(fā)現(xiàn)造模48 h后針刺組EPCs數(shù)量升高，說明針刺可以通過動(dòng)員EPCs的誘導(dǎo)缺血部位血管新生。謝宸宸等［7］采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD34+標(biāo)記的EPCs數(shù)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電針可激活和募集骨髓EPCs數(shù)量并動(dòng)員EPCs釋放到外周血中，促進(jìn)腦缺血功能恢復(fù)。金哲峰等［8］采用vWF和Ki67雙標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)電針組在腦梗死12 h后即出現(xiàn)血管內(nèi)皮有絲分裂，增殖時(shí)間明顯早于模型組，提示電針可能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，建立側(cè)支循環(huán)恢復(fù)腦血流，減輕神經(jīng)損傷。姜桂寧［9］采用植塊法培養(yǎng)急性心肌缺血大鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電針內(nèi)關(guān)穴后內(nèi)皮細(xì)胞活力增強(qiáng)，而凋亡率明顯降低。可見，針灸既能調(diào)控內(nèi)源性EPCs增殖、遷移、分化為內(nèi)皮細(xì)胞，又可直接促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂，構(gòu)建新的毛細(xì)血管網(wǎng)，改善缺血缺氧狀態(tài)。

2.1.2 針灸調(diào)控周細(xì)胞促進(jìn)血管新生 血管新生早期，周細(xì)胞募集到血管壁周圍以縫隙連接、緊密連接、釘-槽復(fù)合體和黏著斑的方式緊貼在內(nèi)皮細(xì)胞基底面，對(duì)管壁給予物理支持，保證新生血管床的穩(wěn)定性，還能旁分泌血管誘導(dǎo)因子與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行對(duì)話，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和定向遷移，影響新生血管出芽的速度和方向，而血管新生后期周細(xì)胞會(huì)抑制內(nèi)皮細(xì)胞分化，促進(jìn)新生微血管逐漸成熟。研究表明［10］，缺血性疾病血管功能低下的主要原因?yàn)樾纬傻墓芮蝗狈χ芗?xì)胞的包繞和固定，穩(wěn)定性差，容易發(fā)生碎裂和降解。張虹等［11］探討電針瞳子髎、胰俞和三陰交穴治療糖尿病視網(wǎng)膜血管病變機(jī)制，結(jié)果顯示造模后視網(wǎng)膜血管壁周細(xì)胞腫脹明顯，有影細(xì)胞樣改變，數(shù)量較少，而針刺組周細(xì)胞扁平，核橢圓，突起較多，數(shù)量明顯增多，提示針刺能促進(jìn)周細(xì)胞增殖提高微血管穩(wěn)定性而改善視網(wǎng)膜血管病變。張洪俠等［12］在兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，模型組新生血管以單層內(nèi)皮細(xì)胞為主，而電針組新生血管壁上周細(xì)胞顯著增多，推測(cè)電針可能加快周細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的募集，催化血管成熟從而發(fā)揮穩(wěn)定斑塊的效應(yīng)。

2.2 針灸對(duì)血管新生相關(guān)因子的影響

血管新生過程受到多種血管誘導(dǎo)因子和抑制因子的調(diào)控［13］。正常生理狀態(tài)下，兩種功能相反因子的動(dòng)態(tài)平衡使微血管數(shù)量保持在一個(gè)穩(wěn)定的范圍，不會(huì)發(fā)生過度增生；在缺血缺氧或炎癥刺激下，血管誘導(dǎo)因子大量分泌，平衡狀態(tài)被打破就會(huì)刺激新血管的形成。常見的血管新生誘導(dǎo)因子包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、促血管生成素、血小板源性生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、胰島素生長(zhǎng)因子等；血管新生抑制因子則包括內(nèi)皮抑素、基質(zhì)金屬蛋白酶、血管抑素等。

2.2.1 針灸對(duì)血管新生誘導(dǎo)因子的調(diào)控 VEGF是一類調(diào)控血管和淋巴管生成的小分子蛋白肽，常以二聚體形式存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞中，能催化合成蛋白水解酶，降解基底膜為血管新生做準(zhǔn)備，還能結(jié)合細(xì)胞膜上VEGF受體CVEGFR促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，誘導(dǎo)血管新生［14］。昝興淳等［15］觀察針康法對(duì)大腦中動(dòng)脈腦缺血大鼠血管新生相關(guān)因子的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)針刺聯(lián)合康復(fù)訓(xùn)練后腦內(nèi)VEGF、VEGFR表達(dá)量和CD34+陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯高于模型組，表明針刺能促進(jìn)VEGF分泌加快缺血區(qū)微血管重建，改善局部腦血流，從而縮小腦梗死體積。黃馨儀等［16］制備急性腦出血模型觀察針刺內(nèi)關(guān)和水溝穴對(duì)血管新生的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)針刺促血管新生與VEGF在血腦屏障的高表達(dá)有關(guān)。徐文博等［17］發(fā)現(xiàn)針刺內(nèi)關(guān)和心俞穴可以升高急性心肌梗死患者的血漿中VEGF的含量，促進(jìn)心肌血管新生，減少心肌纖維凋亡。馬重兵等［18］治療噪音性耳聾大鼠的實(shí)驗(yàn)表明，針刺三焦經(jīng)穴能改善噪聲導(dǎo)致的聽力損害，其機(jī)制可能與針刺促進(jìn)VEGF表達(dá)，增加耳蝸新生血管改善供氧有關(guān)。

促血管生成素（Ang）是一組特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，家族成員中對(duì)管狀分化和修復(fù)起關(guān)鍵作用的為Ang-1，其受體是帶有免疫球蛋白和表皮生長(zhǎng)因子同源結(jié)構(gòu)域的Tie受體，二者結(jié)合后可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化成具有遷移能力的頂細(xì)胞，向周圍延伸形成偽足圍成管腔，并募集周細(xì)胞支撐管壁，保證新生血管的成熟性和穩(wěn)定性［19］。此外，Ang還能抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，增加細(xì)胞連接的緊密性，減少血管萎縮和退化，維持新生血管的穩(wěn)定性。邵妍等［20］觀察眼針對(duì)腦缺血模型大鼠缺血半暗袋內(nèi)新生血管的影響，發(fā)現(xiàn)眼針組Ang-1和Tie-2蛋白表達(dá)與mRNA水平明顯高于模型組，說明眼針可能通過啟動(dòng)Ang/Tie-2信號(hào)軸，促進(jìn)血管新生建立側(cè)支循環(huán)改善腦血流。石學(xué)慧等［21］采用巨刺法干預(yù)腦缺血模型，結(jié)果表明針刺人中、百會(huì)穴可有效改善腦缺血區(qū)神經(jīng)元的損傷程度，其機(jī)制可能與增加大腦皮質(zhì)內(nèi)Ang-1表達(dá)，促進(jìn)血管新生有關(guān)。李超然等［22］對(duì)皮膚壓瘡模型進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)電針傍刺可調(diào)節(jié)Ang-1、Ang-2的釋放，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間。

血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF）是由血小板脫顆?；蚪M織細(xì)胞釋放的一種分泌蛋白，其中PDGF-B是生理性和病理血管新生中起關(guān)鍵性作用，常以二聚體的形式作用于周細(xì)胞表面的PDGFR-β受體，促進(jìn)周細(xì)胞有絲分裂、募集至毛細(xì)血管外壁，維持血管結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性［23］，還能刺激周細(xì)胞分泌VEGF促使內(nèi)皮細(xì)胞分裂誘導(dǎo)管腔形成，增殖的內(nèi)皮細(xì)胞又能釋放PDGF-B提高周細(xì)胞存活率。賈藍(lán)羽等［24］觀察電針?biāo)疁涎▽?duì)腦梗死大鼠不同時(shí)間點(diǎn)血管新生的效應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電針干預(yù)后3、6 h，PDGF-B mRNA和蛋白表達(dá)均高于模型組，提示電針能促使PDGF-B表達(dá)時(shí)相前移加快血管新生。桑鵬等［25］研究證實(shí)針刺可以提高腦梗死大鼠腦干內(nèi)PDGF-B和PDGFR-β的表達(dá)，且針刺陽(yáng)經(jīng)的作用最強(qiáng)，推測(cè)促進(jìn)PDGF-B釋放，加快血運(yùn)重建可能是針刺改善偏癱痙攣狀態(tài)的重要機(jī)制。

2.2.2 針灸對(duì)血管新生抑制因子的調(diào)控 內(nèi)皮抑素（ES）是膠原蛋白碳末端的降解片段，是已知最強(qiáng)的內(nèi)源性血管生成抑制因子。ES能與膜表面的整合蛋白結(jié)合，降低局部黏著斑激酶活性，下調(diào)MAPK信號(hào)通路抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移，使細(xì)胞周期停止，影響內(nèi)皮細(xì)胞存活。ES還能干擾血管誘導(dǎo)因子對(duì)酪氨酸激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制抗凋亡基因表達(dá)從而促使內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。李斯亮等［26］以腦缺血大鼠模型為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)電針可明顯促進(jìn)腦缺血大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)，縮小梗死面積，其機(jī)制可能與電針抑制ES對(duì)血管新生的負(fù)反饋調(diào)節(jié)，增加血管新生的數(shù)量，改善腦部微循環(huán)有關(guān)。王歡等［27］采用眼針干預(yù)腦缺血再灌注模型大鼠，發(fā)現(xiàn)眼針可明顯抑制缺血區(qū)ES的表達(dá)，說明眼針可能通過抑制ES促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，誘導(dǎo)血管生成減輕腦損傷。

血管抑素（AS）是纖維蛋白溶解酶原溶解后的片段，可與內(nèi)皮細(xì)胞表面的ATP酶相結(jié)合，降低細(xì)胞內(nèi)的pH值，觸發(fā)細(xì)胞凋亡。研究表明［28］，AS能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，抑制遷移形成管腔，但對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂沒有影響。唐強(qiáng)等［29］采用頭穴叢刺聯(lián)合康復(fù)訓(xùn)練治療永久腦缺血大鼠，結(jié)果顯示針康法能降低造模3、7、14 d后AS蛋白的表達(dá)，提高大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）能降解細(xì)胞外基質(zhì)膠原鏈和纖溶酶原，產(chǎn)生內(nèi)源性血管抑制因子，發(fā)揮抗血管新生作用。黃馨儀等［16］采用免疫組化檢測(cè)MMPs在腦缺血大鼠組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)針刺內(nèi)關(guān)、水溝穴后血腦屏障MMP-2和MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)明顯減少，針刺能促進(jìn)血管新生減輕腦細(xì)胞損傷。

2.3 針灸對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控

血管新生誘導(dǎo)因子與內(nèi)皮細(xì)胞或周細(xì)胞膜上的酪氨酸激酶受體結(jié)合后，將引起受體構(gòu)象改變，在近膜段發(fā)生磷酸化，進(jìn)而激活下游信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂和存活，促進(jìn)偽足形成，增強(qiáng)細(xì)胞外基質(zhì)粘附性，引導(dǎo)相鄰偽足粘接形成環(huán)狀血管結(jié)構(gòu)。

2.3.1 針灸對(duì)細(xì)胞增殖和存活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控血管新生誘導(dǎo)因子與酪氨酸激酶受體結(jié)合后，在近膜段發(fā)生磷酸化，激活下游的PI3K/Akt、RAS/RAF、PLCγ 1/PKC等信號(hào)通路，從而提高血管內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞的增殖和存活率。于杰等［30］用艾灸治療壓瘡的實(shí)驗(yàn)表明，艾灸能促進(jìn)CD31+PCNA+標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞新生血管數(shù)量的增多，提高創(chuàng)面RAS mRNA和蛋白表達(dá)，上調(diào)RAF和ERK磷酸化水平，說明艾灸可能激活RAS/RAF/ERK通路促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)血管新生。胥虹貝等［31］以腦缺血再灌注模型為研究對(duì)象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電針能增加骨髓p-Akt和eNOS含量及骨髓和外周血EPCs數(shù)量，抑制劑阻斷PI3K后，缺血區(qū)微血管密度降低，提示電針能上調(diào)PI3K/Akt/eNOS通路，動(dòng)員骨髓EPCs至外周血，促進(jìn)腦血管再生。張江松等［32］也發(fā)現(xiàn)電針百會(huì)、水溝穴能提高腦缺血組織PKC磷酸化水平，提高內(nèi)皮存活率和構(gòu)象改變，誘導(dǎo)血腦屏障結(jié)構(gòu)開放。

2.3.2 針灸對(duì)細(xì)胞偽足和血管網(wǎng)絡(luò)形成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控 血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂后，Rho家族（如Rac和Cdc等蛋白）接收上游血管誘導(dǎo)因子信號(hào)后引導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞伸出特殊的絲狀或板狀偽足，并通過調(diào)控肌動(dòng)蛋白活性影響其形態(tài)變化，促使絲狀偽足在細(xì)胞外基質(zhì)區(qū)相互連接、融合形成環(huán)狀血管，建立新的血管網(wǎng)絡(luò)。研究表明［33］，激活Rac/Cdc42信號(hào)通路能提高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外管腔形成能力且增強(qiáng)血管的穩(wěn)定性。譚峰等［34］證實(shí)大腦中動(dòng)脈閉塞后Rac-1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平降低會(huì)引起遠(yuǎn)離梗死灶的頸髓發(fā)生繼發(fā)性損傷，而電針百會(huì)和大椎穴能上調(diào)皮層和頸髓Rac-1的表達(dá)，促進(jìn)缺血區(qū)內(nèi)皮細(xì)胞偽足形成和再生，參與神經(jīng)功能修復(fù)。張柳娟等［35］采用免疫印跡和組化技術(shù)檢測(cè)脊髓損傷節(jié)段Cdc42的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)夾脊電針能增加Rho家族下游因子Cdc42蛋白表達(dá)，促進(jìn)偽足的生長(zhǎng)和延伸，但是否特異性增強(qiáng)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞連接強(qiáng)度還需進(jìn)一步證實(shí)。

3 結(jié)語(yǔ)

內(nèi)皮細(xì)胞是血管新生過程中形成管壁的主要成分，而周細(xì)胞對(duì)成管后的內(nèi)皮細(xì)胞有重要的支撐作用，兩種細(xì)胞在血管新生誘導(dǎo)因子的作用下，激活胞質(zhì)下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，發(fā)生有絲分裂和遷移，形成結(jié)構(gòu)完整且形態(tài)穩(wěn)定的新生血管，實(shí)現(xiàn)血管由“少到多”的生物學(xué)過程。目前研究發(fā)現(xiàn)，針灸治療心肌梗死、腦卒中及脊髓損傷等缺血性疾病能正向促進(jìn)微血管新生，加快血運(yùn)重建，改善局部缺血缺氧狀態(tài)，其發(fā)揮效應(yīng)的作用靶點(diǎn)主要是通過調(diào)節(jié)促進(jìn)和抑制血管新生因子比例，作用于鄰近微血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞，進(jìn)而激活細(xì)胞增殖、分化和連接通路，誘導(dǎo)血管生成。

近年來，通過針灸對(duì)缺血性模型的干預(yù)，其促血管新生的機(jī)制研究已取得一定進(jìn)展，但仍有許多問題尚未解決：1）周細(xì)胞是支撐管腔、促進(jìn)新生血管發(fā)育成熟的重要組分，但目前針刺對(duì)周細(xì)胞的研究較少，僅觀察其在微血管壁的形態(tài)學(xué)改變，而未能明確其增殖狀態(tài)與新生微血管密度的關(guān)系，后續(xù)研究可考慮應(yīng)用熒光雙標(biāo)標(biāo)記周細(xì)胞觀察其增殖和存活率，并結(jié)合微血管密度檢測(cè)，進(jìn)一步揭示針刺調(diào)控周細(xì)胞對(duì)血管新生作用的規(guī)律；2）針灸刺激腧穴后是由何種物質(zhì)或信號(hào)傳遞至病變部位誘導(dǎo)微血管新生的機(jī)制還尚未可知，是否與腧穴局部微環(huán)境物質(zhì)變化的體液調(diào)節(jié)或電信號(hào)改變的神經(jīng)傳導(dǎo)有關(guān)需要進(jìn)一步驗(yàn)證，建議借助質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)腧穴與病變部位的組織液成分差異，或通過電生理技術(shù)觀察動(dòng)作電位變化探索其效應(yīng)機(jī)制；3）相同疾病下，選擇不同腧穴、針刺手法、電針刺激頻率、治療次數(shù)對(duì)血管新生的時(shí)間點(diǎn)和發(fā)育成熟是否產(chǎn)生影響，仍需深入研究；4）血管新生過程涉及的因子和信號(hào)通路較多，機(jī)制較為復(fù)雜，但針灸促血管新生機(jī)制研究的深度還不夠，建議采用高通量測(cè)序或基因芯片技術(shù)篩選出與針刺干預(yù)相關(guān)的差異分子，在功能驗(yàn)證后進(jìn)一步闡釋其作用機(jī)理。