周 波

中醫(yī)藥為我國(guó)人民自古以來(lái)與疾病作斗爭(zhēng)積累起來(lái)的寶貴財(cái)富，因地理和歷史等諸多因素影響，目前中藥品種混亂，給中藥鑒定帶來(lái)了困難。傳統(tǒng)中藥鑒定方法通過(guò)來(lái)源分析、理化鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別，基層普及較廣，并且能夠系統(tǒng)鑒別出不同中藥間的差別，被稱為中藥鑒別的四大基礎(chǔ)方法[1]。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，多學(xué)科新理論在中藥鑒定領(lǐng)域逐漸應(yīng)用，直接推動(dòng)了中藥鑒定的發(fā)展。

1 中藥鑒定現(xiàn)代方法

1.1 紫外光譜紫外光譜分析能夠?qū)χ兴幗M分中的含量及不飽和程度造成的紫外圖譜吸收曲線，通過(guò)曲線變化可對(duì)中藥進(jìn)行定性鑒別[2]。紫外光譜鑒定適用于無(wú)法單純采用傳統(tǒng)鑒別，仍有較高相似度的中藥材，典型的代表藥物為懷牛膝和牛膝，屬于多年生草本，容易發(fā)生以次充好情況，并且2種藥物均有條子粗壯、含油較多等特點(diǎn)，采用顯微鑒定無(wú)法進(jìn)行有效區(qū)分，若采用遺傳學(xué)鑒定又需要花費(fèi)較大的人力物力，采用紫外光譜鑒別通過(guò)吸收曲線能夠進(jìn)行很好的區(qū)分[3]。

1.2 色譜分析色譜分析鑒定中藥材，通過(guò)提取藥材中的含量和化學(xué)組成，能夠定性鑒別，鑒別速度較快，并且具有高分離性的特點(diǎn)。采用色譜分析法能夠?qū)⑼嗡幉闹械募?xì)微差異進(jìn)行鑒別，但是需要消耗較高的成本，不利于在基層推廣，并且在鑒定試驗(yàn)中需要損傷藥材[4]。色譜分析主要可分為薄層色譜、高效液相色譜和氣相色譜3種，在色譜分析法中，應(yīng)用度最高的為高效液相色譜，其具有檢測(cè)誤差小、重現(xiàn)性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，常常被應(yīng)用于藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)、科研院所、藥廠中?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》中將大部分藥物的高效液相色譜收錄，也是建議與質(zhì)譜等檢測(cè)方式結(jié)合應(yīng)用，可使檢測(cè)方法得以拓展，逐步增加應(yīng)用范圍[5]。色譜分析方法皂搓相對(duì)復(fù)雜，檢測(cè)結(jié)果需要花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，建議專業(yè)人員進(jìn)行。

1.3 電腦圖像分析電腦圖像分析法鑒定藥材利用高科技電子產(chǎn)品通過(guò)對(duì)曲率驅(qū)動(dòng)擴(kuò)散成像進(jìn)行分析中藥外觀，利于鑒定檢測(cè)數(shù)量較大的藥材。電腦圖像分析法應(yīng)用時(shí)間較晚，但不受檢測(cè)環(huán)境限制，又因其為電子產(chǎn)品，目前應(yīng)用范圍較廣。電腦圖像分析法對(duì)藥材外觀能夠進(jìn)行細(xì)致分析，但在重要性之分析上存在局限性，在藥廠應(yīng)用此種鑒定方法較多[6]。電腦圖像分析法與人工鑒定方法比較效率大大提高。中藥材山茱萸多采用此種方法鑒定分析，山茱萸具有降糖作用，在種植過(guò)程中會(huì)進(jìn)行嫁接繁殖，容易受到病蟲(chóng)害，在入藥前中藥鑒定十分重要，應(yīng)用電腦圖像分析對(duì)山茱萸進(jìn)行鑒定，能夠?qū)ζ淙胨庍m應(yīng)證、完整度進(jìn)行快速判斷，并且結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確。

1.4 遺傳學(xué)標(biāo)記鑒別遺傳標(biāo)記物鑒別技術(shù)是對(duì)中藥材基因進(jìn)行直接分析，以鑒定其所屬物種。雖然該種鑒定方法的應(yīng)用時(shí)間不暢，但具有對(duì)樣本影響小、方法簡(jiǎn)便、鑒別成本低等特點(diǎn)。在現(xiàn)代中藥鑒定方法中屬于應(yīng)用較廣的技術(shù)。當(dāng)歸的鑒別多采用遺傳標(biāo)記法鑒別，入藥部分為當(dāng)歸的根部，具有補(bǔ)血、潤(rùn)腸、活血的作用。當(dāng)歸在我國(guó)具有較長(zhǎng)的種植歷史，早在唐朝就有當(dāng)歸種植的記載，因當(dāng)歸多生長(zhǎng)在干旱地區(qū)，外表較粗糙，在顯微鏡觀察下無(wú)法進(jìn)行有效鑒別，需要進(jìn)行遺傳學(xué)標(biāo)記方法鑒別[7]。采用遺傳學(xué)標(biāo)記鑒別能夠直接與已知當(dāng)歸樣本中的藥材序列進(jìn)行比對(duì)，直接鑒別藥材品質(zhì)和真?zhèn)巍?/p>

1.5 電泳鑒別電泳是鑒定和分離混合物中帶電粒子的方法。電泳法對(duì)于蛋白質(zhì)含量較多或多肽含量豐富的中藥具有較高靈敏度和專屬性，被廣泛應(yīng)用在中藥鑒定的電泳種類為聚丙烯酰胺凝膠電泳，但是因?yàn)槭艿絻x器和技術(shù)的限制不能廣泛應(yīng)用[8]。凝膠電泳能夠準(zhǔn)確鑒別鹿角和鹿茸，鹿茸的總氨基酸是通過(guò)多肽形式存在，而鹿角中沒(méi)有檢出較多的多肽物質(zhì)。醋酸纖維素薄膜電泳能夠準(zhǔn)確檢測(cè)蛤蚧和其偽品的區(qū)別，聚丙烯酰胺凝膠電泳與醋酸纖維素膜電泳比較操作性不強(qiáng)，樣品處理操作較復(fù)雜。毛細(xì)管電泳和膠束毛細(xì)管電泳對(duì)甘草皂甙、麻黃堿、芍藥甙進(jìn)行鑒別，對(duì)相關(guān)中成藥的成分進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。用等速電泳可鑒別不同蛇毒成分，蛇毒摻偽及不同產(chǎn)地的蛇毒均可采用電泳圖譜進(jìn)行區(qū)分，但是新鮮毒液和毒液凍干粉無(wú)明顯差異。

1.6 聚類分析法隨著計(jì)算機(jī)科學(xué)和模糊數(shù)學(xué)技術(shù)不斷應(yīng)用到中藥鑒定領(lǐng)域，聚類分析法也隨之產(chǎn)生。聚類分析法的最簡(jiǎn)單形式為二維模型，以樣品的相似系數(shù)作為分類依據(jù)[9]。通過(guò)對(duì)麥冬多樣品測(cè)定其中鈣、鎂含量，通過(guò)建立二維平面模型，將被鑒別分為兩類大葉麥冬、麥冬。黃芪樣本的多個(gè)薄層色譜解析形成以數(shù)量化矩陣為代表，將正品和偽品加以區(qū)分。而主成分分析方法通過(guò)將測(cè)定結(jié)果以數(shù)學(xué)形式變換，以尋找主因子對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行鑒別。沉香可進(jìn)行GLC分析，以色譜結(jié)果分析其每個(gè)樣品的主成分，并包括4類其檢測(cè)結(jié)果與多色譜方法的檢測(cè)結(jié)果一致。三層人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)可對(duì)非圖示識(shí)別，通過(guò)對(duì)蟾酥樣品的提取并建立三維圖形以區(qū)分樣品的分類。另外，聚類分析法還能反應(yīng)中藥色譜鑒別、顯微鑒別、性狀鑒別、光譜鑒別的數(shù)量化特征，通過(guò)計(jì)算機(jī)進(jìn)行決策分類。

1.7 X射線衍射法X射線衍射法通過(guò)對(duì)中藥材中單一成分的鑒定而被應(yīng)用于中藥鑒別，該方法與圖譜鑒別方法比較具有重新性更好、指紋性更強(qiáng)、操作更簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。美國(guó)藥典已經(jīng)把X射線衍射法列為鑒別藥品的方法，我國(guó)新藥審核也對(duì)一二類新藥進(jìn)行X射線衍射譜[10]。在20世紀(jì)80年代X射線衍射法被應(yīng)用在中藥鑒定中，只局限應(yīng)用于定性識(shí)別中，另外結(jié)合材料科學(xué)的物相分析，通過(guò)衍射圖譜的歸屬以鑒別中藥。對(duì)信石、滑石、石膏、白礬的易混中藥粉末進(jìn)行分析，該方法也被應(yīng)用在牛黃清心丸的成分研究中，也能夠準(zhǔn)確區(qū)分雄黃和朱砂的主要成分。也有學(xué)者采用X射線衍射法鑒別不同產(chǎn)地的淫羊藿中藥，并對(duì)其進(jìn)行定量分析，系統(tǒng)通過(guò)建立道地中藥鑒定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行準(zhǔn)確的定量識(shí)別。

1.8 生物效價(jià)測(cè)定法對(duì)于活性物質(zhì)不明確的中藥，活性測(cè)定和生物效價(jià)的評(píng)價(jià)質(zhì)量十分常用，臨床中對(duì)有抗菌效價(jià)、抗凝血活性、免疫作用、降壓物質(zhì)、異常毒性等中藥材生物活性堿性檢測(cè)，可通過(guò)凝聚檢測(cè)法、溶血檢查法、過(guò)敏反應(yīng)檢查法等[11]。例如可采用抗凝血酶活性檢測(cè)技術(shù)評(píng)價(jià)中藥水蛭的生物活性，可采用薄層自顯像技術(shù)以鑒別地黃，達(dá)到薄層色譜分離顯色的目的。另外，還可檢測(cè)供試品的抗氧化程度。生物熱動(dòng)力學(xué)也可測(cè)定中藥生物效價(jià)以鑒別中藥，不同中藥在微生物生長(zhǎng)代謝作用下顯示的熱動(dòng)力學(xué)參數(shù)和熱功率譜圖大不相同，在板藍(lán)根鑒別中通過(guò)對(duì)大腸桿菌、痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌進(jìn)行觀察，以鑒別板藍(lán)根的真?zhèn)巍?/p>

1.9 免疫鑒定在含有大量蛋白質(zhì)的中藥材中，不同中藥所含的蛋白具有特異性，免疫鑒別可對(duì)動(dòng)植物所含的特異性蛋白通過(guò)制備特異抗體進(jìn)行鑒別，與樣品的特異抗原結(jié)合而產(chǎn)生沉淀以鑒別中藥的真?zhèn)?。免疫鑒定技術(shù)適用于比較接近或存在親緣關(guān)系的動(dòng)物藥的鑒別[12]。例如虎骨、豹骨可通過(guò)免疫電泳法和瓊脂免疫擴(kuò)散法進(jìn)行鑒定，并且能夠準(zhǔn)確鑒定出樣品具體為金錢(qián)豹、雪豹、云豹的具體物種明細(xì)，說(shuō)明免疫鑒定方法具有較強(qiáng)的特異性。

2 中藥鑒定的新技術(shù)

傳統(tǒng)中藥鑒定方法包括形狀、理化性質(zhì)、顯微鑒別、來(lái)源分類等，隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，逐漸完善了新的中藥鑒定方法[13]。在新的鑒定方法中不但能夠保證臨床用藥的安全性，還有利于推動(dòng)中藥鑒定學(xué)的發(fā)展。中藥材的品種多種多樣，品種之間的形態(tài)和組織變化也成千上萬(wàn)，并且均具有較為復(fù)雜的化學(xué)成分，由于中藥材的品種較多需要進(jìn)行大規(guī)模系統(tǒng)分析才能進(jìn)行準(zhǔn)確運(yùn)用和把握。隨著信息技術(shù)、計(jì)算機(jī)科學(xué)、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的不斷發(fā)展，中藥鑒定技術(shù)得以向信息化、系統(tǒng)化方向邁進(jìn)[14]。分子生物學(xué)、核磁共振、紫外光譜、電泳分析、智能技術(shù)等技術(shù)均會(huì)被應(yīng)用于中藥鑒別中。蛋白質(zhì)組學(xué)、生物基因組學(xué)、代謝組學(xué)等多種生物技術(shù)的興起，有利于逐步建立從局部到整體的鑒別方法，以豐富當(dāng)代鑒定思路，以正確的思路認(rèn)識(shí)中藥質(zhì)量?；谏飳W(xué)的思路和方法聯(lián)合中藥整體模式開(kāi)展的生物鑒定方法，可提高中藥材品質(zhì)，使得中藥鑒別技術(shù)和內(nèi)容不斷豐富，形成能夠適應(yīng)國(guó)際發(fā)展的中藥鑒定體系。

3 小結(jié)

中藥材鑒定方法的研究為了鑒別中藥的真?zhèn)魏蛢?yōu)劣，傳統(tǒng)中藥鑒定方法通過(guò)來(lái)源分析、理化鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別。隨著科學(xué)理論、理化技術(shù)、計(jì)算機(jī)科學(xué)、生物學(xué)等多學(xué)科不斷發(fā)展交流，使中藥鑒定方法更加系統(tǒng)和完善[15]?，F(xiàn)代中藥鑒定方法包括紫外光譜色譜分析、電腦圖像分析、遺傳學(xué)標(biāo)記鑒別、電泳鑒別、聚類分析法、X射線衍射法、生物效價(jià)測(cè)定法等。建議在中藥鑒定技術(shù)發(fā)展時(shí)可與傳統(tǒng)鑒定技術(shù)相結(jié)合，使鑒定技術(shù)獲得更合理的發(fā)展，有利于逐步建立從局部到整體的鑒別方法，以豐富當(dāng)代鑒定思路、保證中藥材的臨床應(yīng)用，以造福廣大患者。