★ 鄭海珍（江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 南昌 330006）

針灸作為中醫(yī)學(xué)的重要組成部分，因其簡(jiǎn)、便、效、廉的特性逐漸被國(guó)內(nèi)外認(rèn)可。為更好地繼承與發(fā)揚(yáng)針灸事業(yè)，針灸效應(yīng)機(jī)制的研究是其中的重要環(huán)節(jié)。近年來(lái)，圍繞信號(hào)通路研究針灸效應(yīng)已是研究熱點(diǎn)，可以更靶向地反應(yīng)針灸作用機(jī)制。Rho信號(hào)通路是經(jīng)典的分子信號(hào)軸，圍繞該信號(hào)通路對(duì)針灸效應(yīng)的研究較多。因此，本文綜合概述近10年P(guān)ubMed和CNKI數(shù)據(jù)庫(kù)的相關(guān)文獻(xiàn)，以期為臨床和科研工作提供參考。

1 Rho信號(hào)通路

在Ras相關(guān)單體GTP酶中，小G蛋白R(shí)ho GTP酶是目前研究最多的。Rho相關(guān)卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）是迄今功能最明確的Rho效應(yīng)物。ROCK活化后可調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種行為與功能，包括收縮、游走粘附以及生長(zhǎng)分裂等。Rho/ROCK信號(hào)通路分子包括Rho GTP酶、ROCK和肌球蛋白磷酸酶（MYPT）。Rho被外界信號(hào)激活后，發(fā)生膜轉(zhuǎn)位，將信號(hào)傳遞給ROCK使其分子中的854位絲氨酸和697位蘇氨酸磷酸化而激活，再依次將其底物MYPT磷酸化而使之失活。失活的MYPT不能將肌球蛋白輕鏈（MLC）脫磷酸，使胞質(zhì)MLC磷酸化水平上升，肌球肌動(dòng)蛋白交聯(lián)增加，進(jìn)而促進(jìn)肌動(dòng)蛋白微絲骨架聚合、平滑肌收縮［1］。

2 針灸對(duì)不同疾病下Rho信號(hào)通路的作用

2.1 腦缺血再灌注損傷 林秀華［2］發(fā)現(xiàn)腦缺血再灌注模型（CIRI）大鼠ROCK活性增強(qiáng)，針刺能明顯抑制其ROCK的表達(dá)。譚峰等［3］發(fā)現(xiàn)電針可能是通過(guò)下調(diào)腦梗死大鼠中樞神經(jīng)生長(zhǎng)抑制因子RhoA的表達(dá)來(lái)發(fā)揮腦保護(hù)作用。陳浩［4］發(fā)現(xiàn)電針能明顯上調(diào)CIRI模型大鼠缺血腦組織內(nèi)PRG5蛋白表達(dá)水平、PRG5陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，下調(diào)RhoA蛋白表達(dá)，進(jìn)而改善神經(jīng)缺損和運(yùn)動(dòng)功能。陳素輝［5］發(fā)現(xiàn)電針百會(huì)、足三里能顯著下調(diào)CIRI大鼠RhoA/ROCK通路及其下游靶分子MLC1、MYPT1的表達(dá)，減輕軸突損傷，且作用與ROCK激酶抑制劑法舒地爾相當(dāng)。此外，研究發(fā)現(xiàn)，電針可下調(diào)急性腦梗死大鼠紋狀體、橋腦Nogo-A/RhoA中樞神經(jīng)再生抑制信號(hào)通路RhoA和ROCK2等蛋白及其mRNA的表達(dá)，抑制神經(jīng)軸突損傷［6-7］。針刺聯(lián)合康復(fù)治療能顯著改善局灶性腦缺血后大鼠神經(jīng)功能，或與下調(diào)大鼠缺血區(qū)皮層和海馬中Nogo信號(hào)通路RhoA、ROCK2表達(dá)有關(guān)［8-9］。

2.2 脊髓及神經(jīng)損傷 董傳菲［10］發(fā)現(xiàn)夾脊電針（EA）結(jié)合神經(jīng)松動(dòng)術(shù)可下調(diào)新西蘭家兔坐骨神經(jīng)損傷后NogoA和RhoA的表達(dá)，加快坐骨神經(jīng)損傷恢復(fù)。XiaoW P等［11］發(fā)現(xiàn)，與脊髓損傷（SCI）組比較，EA、ROCK阻斷劑Y27632和EA+Y27632處理組脊髓中Nogo-A、NgR、RhoA、ROCK2 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低，MLCP mRNA和蛋白表達(dá)升高，p-MYPT1蛋白表達(dá)降低，p-MYPT1/MYPT1比值和caspase3表達(dá)降低，改善了下肢運(yùn)動(dòng)功能，EA+Y27632處理優(yōu)于EA或Y27632單獨(dú)處理。遲蕾［12］也發(fā)現(xiàn)夾脊EA可降低急性SCI大鼠微環(huán)境內(nèi)RhoA、Nogo-A、ROCK2、MLC等抑制因子表達(dá)，促進(jìn)軸突再生，效果與ROCK2抑制劑Fasudil類似。Min Y等［13］發(fā)現(xiàn)EA可抑制SCI后RhoA和ROCK2的mRNA和蛋白表達(dá)，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)；單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂促進(jìn)了SCI后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，但不影響RhoA和ROCK2的表達(dá)；二者聯(lián)合并沒(méi)有進(jìn)一步改善運(yùn)動(dòng)功能，也沒(méi)有抑制RhoA和ROCK2的表達(dá)。Wu M F等［14］采用EA刺激急性SCI大鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BBB運(yùn)動(dòng)量表和斜面測(cè)試評(píng)分明顯升高，脊髓組織中凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯減少，電針組大鼠的RhoA、Nogo-A mRNA和蛋白表達(dá)水平均較未予電針組降低，提示電針治療可減少SCI神經(jīng)元凋亡，降低RhoA、Nogo-A mRNA和蛋白的表達(dá)，從而促進(jìn)神經(jīng)功能修復(fù)。

2.3 阿爾茨海默病史 史寶光等［15］用電針刺激快速老化SAMP8小鼠的百會(huì)、腎俞、太溪穴8周后發(fā)現(xiàn)，電針組小鼠老化行為學(xué)變化得到顯著改善，可能與腦神經(jīng)樹(shù)突長(zhǎng)度及分支數(shù)目明顯增多、海馬突觸后腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）等蛋白表達(dá)水平上升、RhoA和ROCK2表達(dá)降低有關(guān)。聶坤等［16］發(fā)現(xiàn)，與非穴組比較，“益氣調(diào)血，扶本培元”針?lè)梢悦黠@改善SAMP8小鼠水迷宮行為學(xué)結(jié)果，明顯增加癡呆鼠皮層脂筏蛋白數(shù)量，包括微管組裝相關(guān)蛋白、微絲動(dòng)力蛋白家族為主的細(xì)胞骨架蛋白及Rho家族和Ras家族成員為主的小G蛋白分子，這表明依賴細(xì)胞骨架的小G蛋白分子物質(zhì)運(yùn)輸環(huán)節(jié)是針刺治療阿爾茨海默病的效應(yīng)靶點(diǎn)。

2.4 糖尿病胃輕癱 陳小麗等［17］在觀察按部位選穴針刺對(duì)糖尿病胃輕癱（DGP）大鼠的干預(yù)效果時(shí)發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，針刺組的小腸推進(jìn)率和胃竇平滑肌組織RhoA、ROCK、MYPT1、p-MYPT1蛋白的表達(dá)量明顯升高；與配伍遠(yuǎn)端穴及非經(jīng)非穴組比較，配伍局部穴組的大鼠的胃竇平滑肌組織以上蛋白指標(biāo)的表達(dá)量明顯增高，胃竇平滑肌組織RhoA灰度值表達(dá)下降；配伍局部穴組大鼠的飲食量較模型組減少，DGP癥狀顯著改善，這表明配伍局部穴組治療DGP的針刺效果優(yōu)于遠(yuǎn)端取穴和非經(jīng)非穴組。崔晶晶［18］在觀察針刺和益氣健脾中藥復(fù)方對(duì)DGP的效果和機(jī)制后發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，各干預(yù)組大鼠癥狀積分降低、體重升高；中醫(yī)各組血糖顯著降低，西藥組血糖有一定的降低趨勢(shì)；針刺結(jié)合中藥組（針?biāo)幗M）胃排空率升高顯著，優(yōu)于其他治療組；各干預(yù)組胃竇組織RhoA、ROCK2、p-MYPT1、p-MLC蛋白表達(dá)水平均升高，其中針?biāo)幗Mp-MYPT1、p-MLC蛋白升高顯著，優(yōu)于其他治療組。綜上表明，針刺可能是通過(guò)上調(diào)DGP大鼠胃竇RhoA/ROCK信號(hào)通路，促進(jìn)胃平滑肌收縮，增強(qiáng)胃腸動(dòng)力，從而減輕癥狀。

2.5 自發(fā)性高血壓 張宏如等［19-20］發(fā)現(xiàn)麥粒灸能顯著降低自發(fā)性高血壓大鼠（SHRs）血壓，抑制主動(dòng)脈內(nèi)膜增生，增加血清NO含量，顯著下調(diào)RhoA、ROCK1、VEGF、VEGFR2、MLC基因和蛋白表達(dá)。李克嵩［21］也發(fā)現(xiàn)針刺可提高SHRs的NO含量以及NOS活性，降低ET-1、AngⅡ、TNF-α表達(dá)水平，降低RhoA、Rock1、Rac1、Cdc42蛋白含量及其基因表達(dá)水平，提高eNOS蛋白含量及其基因表達(dá)水平。Lai X等［22］探討了SHRs太沖穴位干預(yù)后神經(jīng)系統(tǒng)蛋白質(zhì)組學(xué)的反應(yīng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與非穴干預(yù)比較，太沖針刺干預(yù)收縮壓明顯降低，太沖組熱休克蛋白90等蛋白表達(dá)下調(diào)，Rho GDP解離抑制劑1和超氧化物歧化酶等蛋白表達(dá)上調(diào)，提示針刺可增加SHRs髓質(zhì)中抗氧化酶含量，可能是針刺發(fā)揮降壓作用的部分原因。綜上表明，抑制Rho/ROCK通路可能是針灸降壓的機(jī)理。

2.6 高脂血癥 張瑞［23］發(fā)現(xiàn)艾灸能顯著降低高脂血癥模型鼠血清TC、TG、LDL-C等含量，升高HDL-C和ApoA1含量，顯著減少主動(dòng)脈Rho、ROCK2表達(dá)和陽(yáng)性面積、蛋白表達(dá)、mRNA表達(dá)，增高TGF-β1和IL-10含量，下調(diào)IL-6和IL-17含量，作用與辛伐他汀類似。這表明艾灸可下調(diào)Rho/ROCK信號(hào)通路，雙向調(diào)節(jié)炎癥因子水平，以減緩動(dòng)脈粥樣硬化病理進(jìn)程。陶歡等［24］采用“脂三針”干預(yù)高脂血癥SD大鼠3周后發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，針刺能明顯改善大鼠一般狀態(tài)，降低血脂TC等含量，增加HDL-C含量，增加血清NO含量，減少ET-1含量，改善主動(dòng)脈病理?yè)p傷，顯著降低RhoA、ROCK2、MLCP蛋白表達(dá)。這表明針刺可降低血脂，抑制血管內(nèi)皮損傷，可能與下調(diào)Rho/ROCK通路活性有關(guān)。

2.7 心肌缺血-再灌注損傷 Han Y等［25］將大鼠隨機(jī)分為心肌缺血-再灌注損傷模型組，內(nèi)關(guān)、足三里電針預(yù)處理組，尾靜脈注射抗miR-133a-5p組，電針+抗miR-133a-5p預(yù)處理組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電針預(yù)處理組可顯著減少梗死面積和心肌細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)心功能，降低細(xì)胞凋亡因子p38MAPK、Bax和Caspase-3的表達(dá)；用miR-133a-5p拮抗劑阻斷電針預(yù)處理后，這種現(xiàn)象逆轉(zhuǎn)。這表明電針預(yù)處理可通過(guò)miR-133a-5p下調(diào)RhoA/p38MAPK通路，以保護(hù)MIRI大鼠免受心肌細(xì)胞凋亡的影響。

2.8 創(chuàng)傷性腦損傷 林吉?dú)g［26］研究針刺干預(yù)創(chuàng)傷性腦損傷（TBI）大鼠模型的效應(yīng)機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)針刺能顯著改善大鼠神經(jīng)功能缺損，降低大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)，減少神經(jīng)炎性指標(biāo)CD86陽(yáng)性面積率，降低RhoA、ROCK2蛋白和基因表達(dá)。這表明針刺能夠抑制TBI后大鼠損傷區(qū)腦皮層RhoA/ROCK2信號(hào)通路，改善神經(jīng)炎性變化，促進(jìn)腦損傷恢復(fù)。

2.9 神經(jīng)性耳鳴 鄒春花等［27］采用針刺和聰耳通竅湯治療神經(jīng)性耳鳴患者，觀察治療前后患者血液中5-HT及Rho/ROCK信號(hào)通路的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)針?biāo)幒嫌媒M有效率顯著優(yōu)于單一組，患者血液中5-HT、ROCK蛋白明顯下降。這表明針?biāo)幒嫌弥委熒窠?jīng)性耳鳴療效顯著，其治療效果可能與抑制5-HT/Rho/ROCK信號(hào)通路有關(guān)。

3 小結(jié)

綜上，Rho/ROCK通路介導(dǎo)了神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移、小膠質(zhì)細(xì)胞活化、平滑肌收縮、細(xì)胞凋亡等生理病理過(guò)程，介導(dǎo)了腦缺血再灌注損傷、脊髓及神經(jīng)損傷、創(chuàng)傷性腦損傷、阿爾茨海默病、心肌缺血-再灌注損傷等疾病的病理過(guò)程。目前該通路研究最多的分子包括RhoA、ROCK2、p-MYPT1、p-MLC及Rho GTPase家族Cdc42和Rac1等，少數(shù)學(xué)者采用通路抑制劑，如Y27632，以進(jìn)一步明確針灸效應(yīng)的靶向作用。針灸干預(yù)措施主要以針刺為主，艾灸極少。目前研究主要是以單獨(dú)通路為主，較少采用通路間交互作用影響的研究思路，未來(lái)研究可嘗試增加對(duì)Rho/ROCK的上游和下游影響的分子機(jī)制探索，以豐富網(wǎng)絡(luò)針灸學(xué)理念，也要增加安慰對(duì)照類研究，為穴位效應(yīng)特異性的機(jī)理研究提供更多數(shù)據(jù)支持。