梁 艷，馮成龍，王貞歡，王興霖，楊光婷，黃元君，武 林

黔西南州人民醫(yī)院輸血科，貴州黔西南 562400

根據(jù)國際輸血協(xié)會(huì)(ISBT)的定義，紅細(xì)胞血型是指使用人類同種抗體檢測(cè)的紅細(xì)胞表面抗原，它們是由基因所決定的一種遺傳性狀[1]。紅細(xì)胞血型受ABO、FUT1、FUT2和FUT3等4個(gè)基因的影響。FUT1基因編碼H轉(zhuǎn)移酶，合成紅細(xì)胞膜上和分泌液中的H物質(zhì)，當(dāng)FUT1基因發(fā)生突變時(shí)，酶活力減弱，表現(xiàn)為類孟買血型。類孟買血型在進(jìn)行ABO血型鑒定時(shí)通常表現(xiàn)為正反定型不符，本文中的案例就是在對(duì)患者進(jìn)行血型鑒定中被發(fā)現(xiàn)，經(jīng)進(jìn)一步的基因檢測(cè)，證實(shí)為B型類孟買血型，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1病例資料 女性，38歲，因“反復(fù)上腹部疼痛1年余，再發(fā)10余天”就診，門診以“膽囊結(jié)石伴膽囊炎”收治入院，既往有貧血史7年，貧血原因考慮為“異常子宮出血”。否認(rèn)手術(shù)、輸血、外傷史；入院查體：腹平坦，未見胃腸型及蠕動(dòng)波，右上腹壓痛，無反跳痛及肌緊張，Murphy′s(-)，入院查血常規(guī)示：血紅蛋白(Hb)為85 g/L，血細(xì)胞比容(Hct)為25.3%，平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)及平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)均在正常值范圍內(nèi)。

1.2儀器與試劑 血清學(xué)專用離心機(jī)、普通離心機(jī)、電熱恒溫振蕩箱、冰箱。抗A、抗B單克隆試劑血清購自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司(批號(hào)：20191018)；抗H試劑血清購自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司(批號(hào)：20191121)；人ABO血型反定型用紅細(xì)胞購自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司(批號(hào)：20205337)。

1.3方法 操作按參考文獻(xiàn)[2]和試劑操作說明書進(jìn)行。

1.3.1ABO血型血清學(xué)測(cè)定 (1)正定型:取潔凈小試管 2支，標(biāo)明抗A、抗B，分別加入抗A、抗B試劑血清各2滴于標(biāo)識(shí)試管內(nèi)，再用移液器取50 μL患者5%的紅細(xì)胞懸液分別加入抗A、抗B試管，離心后觀察結(jié)果。(2)反定型:取潔凈小試管3支，標(biāo)明 A、B 和O型細(xì)胞，在3支試管中都加入50 μL患者血漿，再用移液器分別加入 A、B 和O型5%試劑紅細(xì)胞懸液50 μL混勻，離心后觀察結(jié)果。

1.3.2H抗原測(cè)定 取潔凈小試管3支，標(biāo)明待檢、成人O型和成人B型，在3支試管中分別加入50 μL抗H試劑，再用移液器分別加入5%待檢紅細(xì)胞、成人O型紅細(xì)胞和成人B型紅細(xì)胞各50 μL到對(duì)應(yīng)試管中，混勻，離心后觀察結(jié)果。

1.3.3A、B抗原吸收放散試驗(yàn) 取2支潔凈試管，分別標(biāo)識(shí)抗A、抗B，在每支試管中加入1 mL用生理鹽水洗滌3遍的患者紅細(xì)胞，再在相應(yīng)試管中加入抗A試劑、抗B試劑各1 mL，混勻紅細(xì)胞與抗體，在4 ℃冰箱中孵育1 h，孵育期間不時(shí)搖晃混勻，用大量低溫生理鹽水(4 ℃，每次10 mL)洗滌紅細(xì)胞4～5次，留取部分最后一次的洗滌上清液進(jìn)行平行檢測(cè)。使用56 ℃熱放散回收ABO抗體，檢測(cè)放散液及洗滌液。

1.3.4血清吸收試驗(yàn) 取患者1 mL血清，用O細(xì)胞吸收后，再與標(biāo)準(zhǔn)A、B、O細(xì)胞反應(yīng)，檢測(cè)抗體。

1.3.5唾液中A、B、H血型物質(zhì)檢測(cè) 取適量患者唾液，離心后取上清液，在沸水浴中靜置8～10 min去除唾液中的酶，再次離心收集清澈或輕微乳糜液。取4支潔凈試管，分別標(biāo)識(shí)抗A、抗B、抗H及鹽水，在相應(yīng)標(biāo)識(shí)試管中分別加入標(biāo)化血清與處理后的唾液，再分別加入2%～5%A、B、O型試劑紅細(xì)胞作為指示紅細(xì)胞，以檢測(cè)患者唾液中的血型物質(zhì)。

1.3.6FUT1、FUT2基因檢測(cè) 抽取2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血送天津市秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司進(jìn)行FUT1、FUT2基因檢測(cè)。

2 結(jié) 果

(1)ABO 血型鑒定與H抗原鑒定結(jié)果顯示，患者ABO血型正定性表現(xiàn)為O型，反定型A1c管中有4+凝集、Bc管中有1+凝集、Oc管中有2+凝集，正反定型不符，患者紅細(xì)胞上未檢測(cè)到H抗原。(2)紅細(xì)胞A、B抗原吸收放散試驗(yàn)結(jié)果顯示，放散液與A、 B 試劑細(xì)胞反應(yīng)均無凝集。血清吸收試驗(yàn)結(jié)果顯示，Oc吸收后血清與 Ac反應(yīng)凝集強(qiáng)度(4+)，與Bc和Oc反應(yīng)無凝集，表明血清中含有抗A抗體。(3)唾液血型物質(zhì)檢測(cè)結(jié)果顯示，抗A(++++)、抗B(-)、抗H(++)。(4)FUT1、FUT2基因檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)UT1基因發(fā)生了658C>T的純合突變，F(xiàn)UT2基因發(fā)生了c.357C>T純合突變，突變前與突變后表達(dá)的氨基酸一致，不影響基因的表達(dá)。

3 討 論

類孟買血型因紅細(xì)胞上缺乏H抗原而導(dǎo)致A、B血型物質(zhì)不能正常表達(dá)，在血型鑒定時(shí)易誤定為O型，這不僅給血型鑒定工作帶來了困難，同時(shí)對(duì)安全輸血也帶來了一定隱患。因此，在血型鑒定工作中，對(duì)正反定型相符但反定型弱反應(yīng)或者Ac、Bc之間凝集強(qiáng)度差異>2+的標(biāo)本加做反定型Oc對(duì)照及抗H抗體的檢測(cè)極其重要，可進(jìn)一步區(qū)分亞型、自身抗體、孟買血型及類孟買血型[3]。

盡管血清學(xué)凝聚試驗(yàn)是經(jīng)典的血型檢測(cè)方法，具有不可替代性，但同時(shí)也存在一定的局限性，它常常受患者生理和病理變化、近期輸血史、妊娠史、操作人員的操作方法及對(duì)結(jié)果的主觀判讀影響[4]，而基因檢測(cè)可以作為一種新的檢測(cè)方式彌補(bǔ)血清學(xué)檢測(cè)的不足。隨著對(duì)ABO血型系統(tǒng)的不斷研究，類孟買血型的分子機(jī)制也逐漸清晰，有學(xué)者還對(duì)中國人群中FUT1基因和FUT2基因比較常見的突變種類進(jìn)行了深入分析[5-9]。為了明確該例患者的血型，本研究將患者的全血送至天津市秀鵬生物技術(shù)開發(fā)有限公司進(jìn)行FUT1和 FUT2基因檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示FUT1基因發(fā)生了658C>T的純合突變，符合h3型的突變，F(xiàn)UT2基因發(fā)生了c.357C>T純合突變。

本例患者血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，紅細(xì)胞表面未檢測(cè)到 A、B、H 抗原，血清中存在抗A抗體，唾液中檢測(cè)出B和H血型物質(zhì)，盡管吸收放散試驗(yàn)中未檢測(cè)到A或B抗原，考慮主要因血液標(biāo)本量不足有關(guān)，結(jié)合患者以上血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果與FUT1、FUT2基因檢測(cè)的結(jié)果，推論該患者為B型類孟買血型。

類孟買血型患者若需要進(jìn)行輸血治療，首選是輸同型血，但由于此血型罕見，血源的獲得十分困難，因此有學(xué)者建議在緊急情況或者無法獲得同型血液的情況下，可以選擇37 ℃與患者血清無反應(yīng)的同型A(B)或O型紅細(xì)胞進(jìn)行輸血治療[10]，但目前尚無足夠的數(shù)據(jù)支撐這種輸血方式的安全性，筆者建議若在緊急情況下采取這種輸血方式，應(yīng)在輸注全過程密切觀察患者是否出現(xiàn)輸血不良反應(yīng)，以便能及時(shí)采取搶救措施。對(duì)于擇期手術(shù)的患者，建議患者進(jìn)行自體輸血，同時(shí)在術(shù)中實(shí)行血液保護(hù)措施(如術(shù)中自體血回輸、控制性低血壓、血管阻斷術(shù)等)，減少異體血輸注的風(fēng)險(xiǎn)。本研究中患者擬行膽囊切除術(shù)，但患者Hb僅有85 g/L，存在術(shù)中輸血的可能，根據(jù)類孟買血型人群具有家族性遺傳的特點(diǎn)，首先建議對(duì)該患者進(jìn)行家系調(diào)查，尋找同型血液，但該患者父母年邁，子女年幼，兄弟姐妹均在外省務(wù)工，無法進(jìn)行家系調(diào)查尋找同型血液。本例患者貧血是因功能失調(diào)性子宮出血所致，且屬于擇期手術(shù)，因此，建議患者先治療功能失調(diào)性子宮出血，當(dāng)貧血情況得到改善后，進(jìn)行自體血儲(chǔ)存，再進(jìn)行手術(shù)治療，保障手術(shù)安全。

隨著輸血醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，近幾年類孟買血型的報(bào)道也逐漸增加，因?yàn)轭惷腺I血型罕見，筆者建議各臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)在發(fā)現(xiàn)孟買血型或類孟買血型患者時(shí)，應(yīng)積極與當(dāng)?shù)夭晒┭獧C(jī)構(gòu)聯(lián)系，由采供血機(jī)構(gòu)對(duì)孟買血型或類孟買血型者建立管理檔案，并成立稀有血型聯(lián)盟，關(guān)鍵時(shí)刻能實(shí)現(xiàn)互幫互助，同時(shí)動(dòng)員符合獻(xiàn)血條件的稀有血型人員獻(xiàn)血，將其紅細(xì)胞制備為冰凍紅細(xì)胞進(jìn)行長期保存，以便解決稀有血型的血液供應(yīng)問題。