趙榛榛，趙志勇，施憲寶

(1.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州 121000；2.葫蘆島市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧 葫蘆島 125000)

苦苣屬為菊科植物多年生草本植物，約有50余種，我國(guó)境內(nèi)有8種(苦苣菜、裂葉苦苣菜、短裂苦苣菜、長(zhǎng)裂苦苣菜、全葉苦苣菜、花葉滇苦菜、沼生苦苣菜和南苦苣菜)[1]?？嘬牟藶閭鹘y(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，苦苣菜資源分布廣泛[2]，在我國(guó)各地均有分布。苦苣菜性味苦、寒，具有祛瘀止血、清熱解毒、消腫排膿、清肺止咳、益肝利尿的功效[2-3]，主要用于治療咽喉腫痛，癰瘡腫毒，腸炎，痢疾，黃疸，以及蟲蛇咬傷等疾病?？嘬牟撕卸喾N化學(xué)成分，其中黃酮類、萜類、甘油酸酯類、香豆素類、木脂素類以及無機(jī)元素等成分[4-7]。近年來，苦苣中有效成分的制備工藝取得了較為顯著進(jìn)展：苦苣菜內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物研究可以明確的發(fā)酵產(chǎn)生黃酮類化學(xué)成分[8]，應(yīng)用超高壓、大孔吸附樹脂等多種提取純化工藝可獲得純度較高的苦苣總黃酮[9-11]，應(yīng)用超聲技術(shù)制備苦苣多酚類成分[12]。現(xiàn)代研究表明苦苣菜具有多種明確的藥理活性：苦苣菜總黃酮具有肝損傷保護(hù)作用以及心血管保護(hù)作用[13-14]，苦苣菜水提取物具有鎮(zhèn)咳、祛痰功效[15]，其醇提取物則具有降低血糖、血脂的作用[16]。此外，苦苣菜還具有抗氧化、抑菌、抗腫瘤等活性[17]。毒理研究表明，苦苣菜對(duì)于小鼠、大鼠以及Beagle犬的心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)均無明顯的毒性[18]。

本課題組在前期對(duì)苦苣菜的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)分離得到一系列單體成分[2]1423-1426，為了明確苦苣菜的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步完成其化學(xué)成分富集工作，對(duì)苦苣菜乙醇(70%，v/v)提取物進(jìn)行系統(tǒng)分離，采用開放柱色譜，半制備液相色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，從中分離得到8個(gè)單體化合物，進(jìn)一步應(yīng)用核磁共振技術(shù)對(duì)各化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，分別為(7S,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether 9′-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether 9′-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S)-3,3′,5-trimethoxy-4′,7-epoxy-8,5′-neolignan-4,9,9′-triol-9-O-β-D-glucopyranoside、(7S,8R)-dihydroxydehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside、(7R,8S)-dihydroxydehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D glucopyranoside、(7R,8S)-guaiacyl glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether、(7S,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether、(7R,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether 。此8種化合物為首次從苦苣菜屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruck Avance 600 FT-NMR核磁共振波譜儀購于布魯克公司，核磁共振波譜分析采用四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)，Waters 2535制備型高效液相色譜儀購于沃特世科技(上海)有限公司，Welch C18 色譜柱(10 mm×150 mm，5 μm)購于月旭科技(上海)股份有限公司，柱色譜硅膠(100-200目、200-300目)購于青島海洋化工廠，D101型大孔吸附樹脂購于天津波鴻樹脂科技有限公司，葡聚糖凝膠柱色譜LH-20(Sephadex LH-20)購于上海源葉生物科技有限公司，UltimateODS柱色譜填料(40～70 μm)購于月旭科技(上海)股份有限公司，甲醇、乙腈等分析用試劑購于天津科密歐化學(xué)有限公司，提取用乙醇購于萊博生物科技有限公司。苦苣菜藥材購于河北新祁中藥飲品公司，經(jīng)鑒定為菊科苦苣菜屬植物苦苣菜。的干燥全草。

2 提取與分離

苦苣菜的全草藥材25 kg，以70%乙醇回流提取3次，每次2 h，過濾后合并提取液，提取液減壓濃縮得到浸膏約1.6 kg。以適量水溶解后用大孔吸附樹脂柱色譜分離，依次用純水和體積分?jǐn)?shù)10%、30%、50%、95%的乙醇-水溶液梯度洗脫。其中體積分?jǐn)?shù)30%乙醇-水部分(約350 g)經(jīng)硅膠柱色譜分離，流動(dòng)相系統(tǒng)為CH2Cl2～MeOH，體積分?jǐn)?shù)從100∶1～1∶1進(jìn)行梯度洗脫，得到12個(gè)流分(Fr.1 ～ Fr.12)。其中Fr.5～ Fr.7經(jīng)過反復(fù)葡聚糖凝膠柱色譜Sephadex LH-20及ODS柱色譜進(jìn)行分離，最后采用半制備型高效液相色譜儀純化得到化合物8個(gè)化合物，按照上述順序其重量分別為12.2、13.5、8.4、22.0、15.2、16.4、23.2、16.8 mg。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：(7S,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether 9′-O-β-D-glucopyranoside.1H-NMR(600 MHz in DMSO-d6):6.88(1H，d,J=1.5 Hz，H-2′)，6.86(1H，d，J=8.3 Hz，H-5),6.77(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.75(1H，d，J=1.5Hz，H-2)，6.73(1H，d，J=8.3 Hz，H-6′)，6.65(1H,d，J=8.3，1.5Hz，H-6)，5.13(1H，d，J=4.4 Hz，H-7)，4.81(1H，m，H-8)，4.21(2H，m，H-9)，4.00(1H,d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.87(2H，m，H-9′)，3.82(3H,s，H-3-OMe)，3.70(3H，s，H-3′-OMe)，3.54(1H，m,H-6″a)，3.40(1H，m，H-6b″)，3.26(1H，m，H-5″),3.22(1H，m，H-3″)，3.18(1H，m，H-4″)，3.05(1H,m，H-2″)，2.54(2H，m，H-7′)，1.86(2H，m，H-8′);13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC 149.9(C-3′),147.7(C-3),146.6(C-4′),145.8(C-4)，135.7(C-1′)，133.8(C-1),121.2(C-6′)，119.2(C-6)，116.7(C-5′)，115.4(C-5),113.7(C-2′)，112.4(C-2)，103.9(C-1″)，84.9(C-8)，76.8(C-3″),75.7(C-5″)，73.7(C-2″),72.6(C-7)，70.9(C-4″),61.8(C-6″),61.2(C-9′)，60.6(C-9),56.6(3′-OCH3)，55.8(3-OCH3),31.7(C-8′),31.1(C-7′)。

化合物2：(7R,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether 9′-O-β-D-glucopyranoside.1H-NMR(600 MHz in DMSO-d6):6.99(1H，d,J=1.6 Hz，H-2′)，6.85(1H，d，J =8.3 Hz，H-5),6.80(1H，d，J=8.3 Hz，H-5′)，6.78(1H，d，J=1.6Hz，H-2)，6.68(1H，d，J=8.3，1.8Hz，H-6),6.68(1H，d，J=8.3 Hz，H-6′)，4.93(1H，d，J=7.6Hz，H-7)，4.78(1H，m，H-8)，4.26(2H，m，H-9),4.13(1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.87(2H，m，H-9′),3.73(3H，s，H-3-OMe)，3.72(3H，s，H-3′-OMe),3.66(1H，m，H-6″a)，3.49(1H，m，H-6″b),3.30(1H，m，H-5″)，3.17(1H，m，H-3″)，3.15(1H,m，H-4″)，3.09(1H，m，H-2″)，2.51(2H，m，H-7′),1.77(2H，m，H-8′)；13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC149.8(C-3′),148.0(C-3)，146.8(C-4′)，145.5(C-4)，134.4(C-1′),133.4(C-1)，121.2(C-6′)，119.3(C-6)，116.5(C-5′)，114.1(C-5)，112.4(C-2′),111.5(C-2)，104.0(C-1″)，84.8(C-8),76.4(C-3″)，76.1(C-5″)，73.8(C-2″),70.4(C-7)，70.1(C-4″),67.4(C-9′)，62.1(C-6″),60.5(C-9)，55.8(3′-OCH3)，55.6(3-OCH3)，32.2(C-8′)，32.1(C-7′)。

化合物3：(7R,8S)-3,3′,5-trimethoxy-4′,7-epoxy-8,5′-neolignan-4,9,9′-triol-9-O-β-D-glucopyranoside.1H-NMR(600 MHz in DMSO-d6):δH 6.87(1H，brs，H-2′)，6.80(1H，brs，H-6′)，6.65(2H，brs，H-2，6)，5.55(1H，d，J=7.6 Hz，H-7)，4.35(1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.94(1H，m，H-9)，3.73(3H，s，3′-OCH3)，3.70(6H，s，3，5-OCH3)，3.68(1H，m，H-9)，3.55(1H，m，H-6″)，3.52(1H，m，H-8)，3.47(2H，m，H-9′)，3.36(1H，m，H-6″)，3.27( 1H，m，H-5″)，3.22(1H，m，H-4″)，3.09(1H，m，H-2″)，3.06(1H，m，H-3″)，2.64(2H，m，H-7′)，1.74(2H，m，H-8′)；13C-NMR(150 MHz inDMSO-d6):δC147.7(C-3，5)，146.5(C-4′)，142.4(C-3′)，134.4(C-1′)，134.3(C-4)，132.1(C-1)，128.4(C-5′)，116.1(C-6′)，113.7(C-2′)，103.4(C-1″),102.3(C-2)，102.1(C-6)，86.2(C-7)，77.5(C-3″)，76.2(C-5″)，74.5(C-2″)，71.1(C-9)，70.8(C-4″)，61.2(C-6″)，60.7(C-8′)，56.6(3′-OCH3)，55.1(3，5-OCH3)，50.9(C-8)，34.5(C-8′)，31.7(C-7′)。

化合物4：(7S,8R)-dihydroxydehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside.1H-NMR(600 MHz in DMSO-d6):δH7.09(1H，d，J=7.5 Hz，H-5)，6.97(1H，brs，H-2)，6.86(1H，brd，J=7.5 Hz，H-6)，6.86(1H，dd，J=7.5，1. 5 Hz，H-7)，6.62(2H，s，H-2′，6′)，4.82(1H，d，J=6.0 Hz，H-1″)，3.79(3H，s，3-OCH3)，3.75(3H，s，3′-OCH3)，3.71(2H，m，H-9)，3.66(1H，m，H-6″)，3.43(1H，m，H-8)，3.42(1H，m，H-6″)，3.36(2H，m，H-9′)，3.25(1H，m，H-5″)，3.25(1H，m，H-3″)，3.22(1H，m，H-2″)，3.15(1H，m，H-4″)，2.57(2H，m，H-7′)，1.62(2H，m，H-8′)；13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC149.6(C-3)，146.6(C-4)，145.3(C-4′)，143.7(C-3′)，136.5(C-1′)，136.2(C-1)，128.4(C-5′)，118.6(C-6)，116.2(C-6′)，115.8(C-5)，112.2(C-2′)，111.4(C-2)，101.1(C-1″)，86.6(C-7)，76.3(C-5″)，77.7(C-3″)，73.4(C-2″)，68.7(C-4″)，63.4(C-9)，61.6(C-6″)，60.6(C-9′)，55.2(3，3′-OCH3),54.3(C-8)，34.1(C-8′)，31.7(C-7′)。

化合物5：(7R,8S)-dihydroxydehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D glucopyranoside.1H-NMR(600 MHz inDMSO-d6):δH 7.08(1H，d，J=7. 5 Hz，H-5)，6.93(1H，d，J=1.5 Hz，H-2)，6.86(1H，dd，J=7.5，1.5Hz，H-6)，6.86(1H，dd，J=6.5 Hz，H-7)，6.63(2H，s，H-2′，6′)，4.89(1H，d，J=6.0 Hz，H-1″)，3.87(3H，s，3-OCH3)，3.84(3H，s，3′-OCH3)，3.80(2H，m，H-9)，3.69(1H，m，H-6″)，3.44( 1H，m，H-8)，3.44(1H，m，H-6″)，3.32(2H，m，H-9′)，3.26(1H，m，H-3″)，3.26(1H，m，H-5″)，3.23(1H，m，H-2″)，3.20(1H，m，H-4″)，2.58(2H，m，H-7′)，1.63(2H，m，H-8′)；13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC149.6(C-3)，147.2(C-4)，145.7(C-4′)，143.9(C-3′)，135.6(C-1′)，135.0(C-1)，128.3(C-5′)，118(C-6)，116.9(C-6′)，115.2(C-5)，111.5(C-2′)，110.1(C-2)，100.2(C-1″)，85.6(C-7)，77.6(C-3″)，76.2(C-5″)，73.9(C-2″)，70.2(C-4″),63.5(C-9)，60.8(C-6″)，60.8(C-6″)，60.3(C-9′)，56.7(3,3′-OCH3)，54.5(C-8)，34.2(C-8′)，31.1(C-7′)。

化合物6：(7R,8S)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether.1H-NMR(400 MHz in DMSO-d6):6.93(1H，d,J=1.6 Hz，H-2)，6.81(1H，d，J=8.2 Hz，H-5′),6.79(1H，d，J=8.1，1.6Hz，H-6)，6.76(1H，d，J =1.9 Hz，H-2′)，6.62(1H，d，J=8.1 Hz，H-5),6.60(1H，d，J=8.2，1.8 Hz，H-6′)，4.61(1H，d，J =5.1 Hz，H-7)，4.28(1H，m，H-8)，3.78(3H，s，H-3-OMe)，3.65(3H，s，H-3′-OMe)，3.62(1H，m，H-9′a)，3.56(1H，m，H-9′b)，3.56(2H，m，H-9),2.70(2H，m，H-7′)，1.63(2H，m，H-8′);13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC149.1(C-3′)，147.4(C-3)，146.2(C-4′)，145.9(C-4)，134.4(C-1′),133.2(C-1)，120.9(C-6′)，119.2(C-6),116.4(C-5′),114.2(C-5)，113.2(C-2′)，111.9(C-2),84.1(C-8)，71.3(C-7)，60.5(C-9′),60.2(C-9)，56.7(3′-OCH3)，56.5(3-OCH3)，34.9(C-8′)，31.5(C-7′)。

化合物7：(7S,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ethH-NMR(600 MHz in DMSO-d6):6.92(1H，d,J=1.4 Hz，H-2)，6.88(1H，d，J=8.2 Hz，H-5),6.82(1H，s，H-2′)，6.72(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′),6.64(1H，d，J=8.0 Hz，H-6′)，6.60(1H，d，J=8.2,1.4Hz，H-6)，5.29(1H，d，J=4.6 Hz，H-7),4.73(1H，m，H-8)，4.53(1H，m，H-9′a)，4.42(1H,m，H-9′b)，4.31(2H，m，H-9)，3.77(3H，s，H-3-OMe)，3.62(3H，s，H-3′-OMe)，2.70(2H，m，H-7′),1.61(2H，m，H-8′);13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC149.2(C-3′),147.6(C-3)，146.2(C-4′)，145.7(C-4)，133.8(C-1)，133.8(C-1′)，120.3(C-6′)，119.6(C-6)，116.3(C-5′)，114.9(C-5)，113.9(C-2′),111.8(C-2),84.3(C-8),72.6(C-7),60.7(C-9′)，60.1(C-9),56.6(3′-OCH3)，55.6(3-OCH3)，34.4(C-8′)，31.5(C-7′)。

化合物8：(7R,8R)-guaiacyl-glycerol-β-O-4′-dihydroconiferyl ether.1H-NMR(600 MHz in DMSO-d6):6.91(1H，d,J=1.7 Hz，H-2)，6.83(1H，d，J=8.4 Hz，H-5),6.76(1H，d，J=1.9 Hz，H-2′)，6.71(1H，dd，J =8.3，1.8 Hz，H-6)，6.65(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′),6.62(1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6′)，5.30(1H，s，H-7)，4.60(2H，m，H-9)，4.25(1H，m，H-8)，3.75(3H,s，H-3-OMe)，3.72(3H，s，H-3′-OMe)，3.59(1H，m,H-9′a)，3.12(1H，m，H-9′b)，2.54(2H，m，H-7′),1.61(2H，m，H-8′)；13C-NMR(150 MHz in DMSO-d6):δC149.1(C-3′),147.9(C-3)，147.3(C-4)，145.8(C-4′)，134.2(C-1)，133.5(C-1′)，121.2(C-6′)，119.6(C-6)，115.1(C-5′)，114.2(C-5)，113.8(C-2′)，111.8(C-2)，85.6(C-8),72.1(C-7)，60.9(C-9)，61.1(C-9′)，55.1(3′-OCH3)，54.4(3-OCH3)，34.1(C-8′),32.3(C-7′)。

4 討 論

木脂素類化合物廣泛存在于天然藥物及中藥材中，該類化合物是由苯丙素單位(C6 - C3)聚合而成，其原始結(jié)構(gòu)骨架是由兩個(gè)苯丙素單元氧化聚合，同時(shí)也存在三聚和四聚。木脂素類結(jié)構(gòu)類型多樣，可分為簡(jiǎn)單木脂素類、單環(huán)氧木脂素類、雙環(huán)氧木脂素類、聯(lián)苯型木脂素、聯(lián)苯環(huán)辛烯類木脂素、木脂素內(nèi)酯類、環(huán)木脂素類以及具有8-O-4′ 型新木脂素，部分以木脂素類成分還以糖苷形式存在[19]。木脂素化合物具有多種非常重要的生物活性，在多種疾病的治療中已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，如聯(lián)苯雙酯用于肝臟系統(tǒng)疾病的治療、鬼臼毒素對(duì)于腫瘤治療的應(yīng)用。以木脂素類為主要活性成分的中藥，往往具有非常明確的藥效，如五味子、厚樸、細(xì)辛以及連翹等。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們完成對(duì)苦苣菜的系統(tǒng)分離并進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定，得到8個(gè)木脂素類成分，經(jīng)過文獻(xiàn)調(diào)研，所有成分均為從苦苣菜植物中首次分離得到，由于木脂素類成分具有明確的抗氧化、保肝以及抗腫瘤等生物活性，這與苦苣菜的臨床應(yīng)用具有高度的一致性。因此，這些木脂素類化學(xué)成分的發(fā)現(xiàn)，為苦苣菜的藥效物質(zhì)研究提供非常重要的研究?jī)r(jià)值，也為苦苣菜的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的建立以及后續(xù)產(chǎn)品的開發(fā)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。