李惠麗 陳偉明 林若萍 林俊榮 楊坤祥 黃雪霞

【摘要】 目的：探討分析炎癥細(xì)胞因子及T淋巴細(xì)胞亞群評(píng)估川崎病患兒的價(jià)值。方法：選取2019年1月-2020年10月本院兒科收治的60例川崎病患兒作為試驗(yàn)組，選取同時(shí)期就診的60例細(xì)菌感染引起的發(fā)熱患兒作為對(duì)照A組，選取同時(shí)期60例健康體檢的兒童作為對(duì)照B組，均給予炎癥細(xì)胞因子、T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。比較三組T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)、炎性因子指標(biāo)水平，分析川崎病患兒不同時(shí)期與T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)、炎癥因子指標(biāo)水平的相關(guān)性。結(jié)果：試驗(yàn)組急性期CD4+、CD4+/CD8+均較對(duì)照A組、對(duì)照組B組顯著提高，CD3+較對(duì)照A組、對(duì)照組B組顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。試驗(yàn)組急性期IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均較對(duì)照組A組、對(duì)照B組顯著提高，且對(duì)照組A組IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均較對(duì)照組B組顯著提高（P<0.05）。急性期、亞急性期、恢復(fù)期，川崎病患兒CD3+指標(biāo)水平不斷提高，CD4+、CD4+/CD8+、IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均逐漸降低（P<0.05）。經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析，川崎病患兒CD3+水平與疾病分期呈正相關(guān)（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈負(fù)相關(guān)（r=0.-721、-0.605，P<0.001），川崎病患兒IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平與疾病分期均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.781、-0.514、-0.664、

-0.719、-0.652、-0.817，P<0.05）。結(jié)論：川崎病患兒T淋巴細(xì)胞亞群、炎癥因子指標(biāo)水平存在異常，且與其病情的發(fā)展顯著相關(guān)，可作為鑒別川崎病輔助依據(jù)，也可作為評(píng)估川崎病發(fā)展和恢復(fù)程度的參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 川崎病 T淋巴細(xì)胞亞群 免疫功能

Evaluation of the Value of Inflammatory Cytokines and T Lymphocyte Subsets in Children with Kawasaki Disease/LI Huili， CHEN Weiming， LIN Ruoping， LIN Junrong， YANG Kunxiang， HUANG Xuexia. //Medical Innovation of China， 2021， 18（20）： 0-017

[Abstract] Objective： To explore the value of analyzing inflammatory cytokines and T lymphocyte subsets in evaluating children with Kawasaki disease. Method： From January 2019 to October 2020， 60 children with Kawasaki disease admitted to the clinical pediatrics department of our hospital were selected as the experimental group， and 60 children with fever caused by bacterial infection who visited the same period were selected as the control group A， and the same period was selected. Sixty children under physical examination were used as the control group B. They were all tested for inflammatory cytokines and T lymphocyte subgroups. The three groups of T lymphocyte subgroup index levels and inflammatory factor index levels were compared. Children with molecular Kawasaki disease were compared with T lymphocytes at different periods. Correlation between the level of lymphocyte subsets index and the level of inflammatory factors. Result： The acute phase CD4+ and CD4+/CD8+ in the experimental group were significantly higher than those in the control group A and the control group B， and the CD3+ was significantly lower than that of the control group A and the control group B. The differences were statistically significant （P<0.05）. The acute phase IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR of the experimental group were significantly higher than those of the control group A and the control group B， and IL-6， TNF-α， CRP， IFN -γ， MIF and ESR of the control group A group were significantly higher than those in the control group B （P<0.05）. In the acute， subacute， and recovery phases， the CD3+ index levels of children with Kawasaki disease continued to increase， and CD4+， CD4+/CD8+， IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR all gradually decreased （P<0.05）. Pearson linear correlation analysis， CD3+ in children with Kawasaki disease was positively correlated with disease stage （r=0.526， P<0.001）， CD4+， CD4+/CD8+ and disease stage were all negatively correlated （r=-0.721， -0.605， P<0.001）， the levels of IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR in children with Kawasaki disease were negatively correlated with the disease stage （r=-0.781， -0.514， -0.664， -0.719， -0.652， -0.817， P<0.05）. Conclusion： There are abnormalities in T lymphocyte subgroups and inflammatory factors in children with Kawasaki disease， and they are significantly related to the development of the disease， they can be used as an auxiliary basis for distinguishing Kawasaki disease， and can also be used as a reference index for evaluating the development and recovery of Kawasaki disease.

[Key words] Kawasaki disease T lymphocyte subsets Immune function

First-author’s address： Huizhou First Maternal and Child Health Hospital， Huizhou 516000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.20.004

川崎病是臨床上兒科常見病和多發(fā)血管炎性疾病，患兒表現(xiàn)為發(fā)熱、頸部淋巴結(jié)腫大、眼球結(jié)膜充血、皮疹、口干等臨床癥狀[1]。川崎病屬于自限性疾病，雖然預(yù)后良好，但若川崎病患兒不能及早診斷并給予有效的治療，極易誘發(fā)冠狀動(dòng)脈損害，嚴(yán)重的甚至誘發(fā)心肌梗死、猝死，威脅患兒的生命安全[2]。目前臨床上對(duì)于川崎病的發(fā)病機(jī)制尚未明確，但是有學(xué)者認(rèn)為其與T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和炎癥因子誘發(fā)的炎癥密切相關(guān)，參與到川崎病的發(fā)病、進(jìn)展及預(yù)后[3]，本文旨在探討炎癥細(xì)胞因子聯(lián)合T淋巴細(xì)胞亞群評(píng)估川崎病患兒價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月-2020年10月臨床兒科收治的60例川崎病患兒作為研究對(duì)象（試驗(yàn)組），納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床兒科?？?、影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查均符合川崎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：因病原體感染引起的發(fā)熱患兒;血液系統(tǒng)疾病患兒;發(fā)病前60 d使用過免疫調(diào)節(jié)藥物患兒;先天性遺傳病患兒。選取同時(shí)期就診的60例細(xì)菌感染引起的發(fā)熱患兒作為對(duì)照A組，納入標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)室檢查確認(rèn)為細(xì)胞感染，影像學(xué)和實(shí)驗(yàn)室檢查排除川崎病的可能，沒有川崎病疾病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：心血管疾病引起的感染損害患兒;器質(zhì)性心臟疾病患兒。另選取同時(shí)期60例健康體檢的兒童作為對(duì)照B組，納入標(biāo)準(zhǔn)：兒童生長(zhǎng)發(fā)育正常，各項(xiàng)身體指標(biāo)檢查正常，無相關(guān)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：體檢資料不完整;心血管疾病引起的感染損害患兒;器質(zhì)性心臟病患兒。研究對(duì)象家長(zhǎng)簽署知情同意書，自愿參與本研究，本研究開展前經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 川崎病患兒分期標(biāo)準(zhǔn) 發(fā)病1～11 d為急性期，發(fā)病11～21 d為亞急性期，發(fā)病21～60 d為恢復(fù)期[4]。

1.2.2 檢測(cè)方法 （1）T淋巴細(xì)胞亞群：檢測(cè)患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平，檢測(cè)方法為Cell Signaling Technology（CST）提供的流式細(xì)胞術(shù)。（2）炎癥因子：檢測(cè)患兒白細(xì)胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、干擾素γ（IFN-γ）、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（MIF）、紅細(xì)胞沉降率（ESR）水平;IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF采用酶聯(lián)免疫吸附法，CRP采用免疫比濁法，ESR采用魏氏法;試劑為武漢艾迪抗生物科技有限公司提供的試劑盒。（3）血樣采集：所有納入研究的對(duì)象均采集空腹靜脈血5 mL放置于肝素抗凝管中，保存在-70 ℃冰箱里，川崎病患兒于急性期、亞急性期及恢復(fù)期分別采集血樣保存待測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三組研究對(duì)象T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)水平、炎性因子指標(biāo)水平;分析川崎病患兒急性期、亞急性期、恢復(fù)期與T淋巴細(xì)胞亞群、炎性因子指標(biāo)水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Pearson線性相關(guān)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 三組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 三組T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)水平比較 試驗(yàn)組急性期CD4+、CD4+/CD8+水平均較對(duì)照A組、對(duì)照組B組顯著提高，CD3+水平較對(duì)照A組、對(duì)照組B組顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 三組炎性因子指標(biāo)水平比較 試驗(yàn)組急性期IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均較對(duì)照組A組、對(duì)照B組顯著提高，且對(duì)照組A組IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均較對(duì)照組B組顯著提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4 川崎病患兒不同疾病分期與T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)水平相關(guān)性分析 急性期、亞急性期、恢復(fù)期，川崎病患兒CD3+水平不斷提高，CD4+、CD4+/CD8+均水平逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析：川崎病患兒CD3+與疾病分期呈正相關(guān)（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈負(fù)相關(guān)（r=0.-721、-0.605，P<0.001）。

2.5 川崎病患兒不同疾病分期的炎性因子指標(biāo)水平比較 急性期、亞急性期、恢復(fù)期，川崎病患兒IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均逐漸下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表5。

3 討論

臨床上對(duì)于川崎病的病因及發(fā)病機(jī)制尚未有明確的定論，無典型的實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo)和臨床癥狀，其與細(xì)菌感染性發(fā)熱難以鑒別，極易造成誤診、漏診，延誤治療時(shí)間，增加發(fā)生冠狀動(dòng)脈損害、獲得性心臟病的風(fēng)險(xiǎn)，給患兒家長(zhǎng)帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[5-6]，因此，探究具有診治價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)于川崎病的診斷、治療及預(yù)后評(píng)估具有積極意義。

3.1 T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)川崎病診治的影響 T淋巴細(xì)胞是人體免疫反應(yīng)的重要組成部分，機(jī)體的免疫功能、狀態(tài)與T淋巴細(xì)胞水平密切相關(guān)，機(jī)體正常情況下淋巴細(xì)胞可維持在一定范圍內(nèi)，但當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)異常狀態(tài)時(shí)則會(huì)引發(fā)一系列病理變化，造成機(jī)體免疫系統(tǒng)紊亂[7]，依據(jù)表面分化抗原的區(qū)別，可以把T淋巴細(xì)胞分類成CD4+和CD8+兩個(gè)亞群，而CD4+抗原為輔助T細(xì)胞與效應(yīng)T細(xì)胞的表面標(biāo)志，輔助T細(xì)胞通過多種細(xì)胞因子的釋放從而激活輔助B細(xì)胞與效應(yīng)T細(xì)胞，在機(jī)體中可對(duì)炎癥細(xì)胞毒具有殺傷效果，同時(shí)還能夠抵抗炎癥介質(zhì)[8]。CD8+屬于免疫抑制效應(yīng)細(xì)胞，其抗原為抑制T細(xì)胞與細(xì)胞毒T細(xì)胞的表面標(biāo)志，抑制T細(xì)胞釋放抑制因子從而對(duì)B細(xì)胞以及效應(yīng)T細(xì)胞的活化作用起到抑制效果，當(dāng)水平出現(xiàn)下降過度時(shí)可對(duì)免疫系統(tǒng)形成刺激，使得CD4+/CD8+水平升高，造成免疫調(diào)節(jié)作用失衡，免疫系統(tǒng)出現(xiàn)損傷[9]。另外文獻(xiàn)[10]研究認(rèn)為，CD8+細(xì)胞表達(dá)下降時(shí)有可能會(huì)浸潤(rùn)急性期川崎病患兒的血管壁，使得免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常。本研究結(jié)果顯示：川崎病患兒的CD4+、CD4+/CD8+水平均顯著提高，并且處于急性期的患兒CD4+、CD4+/CD8+水平異常升高，CD3+水平在急性期最低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析：川崎病患兒CD3+與疾病分期呈正相關(guān)（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈負(fù)相關(guān)（r=0.-721、-0.605，P<0.001），表明川崎病患兒出現(xiàn)免疫抑制功能紊亂，免疫耐受失去平衡，CD4+淋巴細(xì)胞亢奮，與川崎病的發(fā)病密切相關(guān)，尤其是急性期的川崎病患兒T淋巴細(xì)胞數(shù)量和狀態(tài)發(fā)生變化顯著，促使激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，誘發(fā)血管炎、免疫損傷及冠狀動(dòng)脈損害[11-12]，因此，T淋巴細(xì)胞指標(biāo)水平的變化可輔助評(píng)估川崎病的發(fā)病、進(jìn)展及預(yù)后。

3.2 炎癥因子對(duì)川崎病診治的影響 炎癥因子可增強(qiáng)免疫反應(yīng)的程度，當(dāng)川崎病患兒處于急性期時(shí)，T淋巴細(xì)胞的活躍性增強(qiáng)，激活免疫功能，并且B淋巴細(xì)胞被激活，產(chǎn)生和釋放大量的炎癥因子，細(xì)胞因子的表達(dá)過度增加，機(jī)體產(chǎn)生一系列的免疫應(yīng)答反應(yīng)，極易出現(xiàn)免疫應(yīng)答損傷的同時(shí)損傷冠狀動(dòng)脈[13]。IL-6屬于炎癥細(xì)胞因子，具有刺激免疫應(yīng)答和誘發(fā)炎癥反應(yīng)的作用，但是過度表達(dá)導(dǎo)致輔助性T細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例失去平衡，免疫功能進(jìn)一步紊亂，患兒產(chǎn)生免疫球蛋白耐藥、血管炎反應(yīng)，并且與疾病的進(jìn)展和發(fā)展程度呈正相關(guān)[14-15]。CRP、ESR與川崎病患兒的病情程度呈正相關(guān)，主要用于疾病感染急性期的評(píng)估，也是川崎病診斷、治療評(píng)估的重要指標(biāo)，經(jīng)過免疫球蛋白等治療炎性因子水平可顯著降低[16]。IFN-γ主要產(chǎn)生于活化T細(xì)胞中，其生物活性可對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、星狀細(xì)胞、單核細(xì)胞以及皮膚成纖維細(xì)胞等的MHCⅡ類表達(dá)起到誘導(dǎo)作用，從而參與到特異性的免疫識(shí)別過程以及抗原提呈，此外還能夠上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞的CD54表達(dá)，輔助誘導(dǎo)TNF同時(shí)提高巨噬細(xì)胞對(duì)病原微生物的殺傷作用。IFN-γ作為Th細(xì)胞功能水平的代表性因子，常被用于自身免疫性疾病的檢測(cè)中[17]。TNF-α屬于多肽調(diào)節(jié)的促炎因子，具備廣泛生物活性，通過對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子表達(dá)以及活化的誘導(dǎo)，促進(jìn)中性粒細(xì)胞趨化。急性期川崎病患兒TNF-α水平過度表達(dá)，使得血管炎癥惡化，造成血管壁廣泛損傷[18]。本研究結(jié)果顯示，川崎病患兒的IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均顯著提高，并且急性期、亞急性期、恢復(fù)期的川崎病患兒IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均逐漸下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與文獻(xiàn)[19-20]研究結(jié)論基本一致，可作為鑒別川崎病和感染性發(fā)熱的輔助依據(jù)，也可作為評(píng)估川崎病發(fā)展和恢復(fù)程度的參考指標(biāo)。

綜上所述，川崎病患兒T淋巴細(xì)胞亞群、炎癥因子指標(biāo)水平均存在異常，且與其病情的發(fā)展顯著相關(guān)，可作為鑒別川崎病輔助依據(jù)，也可作為評(píng)估川崎病發(fā)展和恢復(fù)程度的參考指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1]牛超，王琳琳，賈嘗，等.川崎病發(fā)生機(jī)制研究[J].中國(guó)小兒急救醫(yī)學(xué)，2020，27（9）：645-649.

[2]王穎，袁越，高路，等.川崎病患兒血清細(xì)胞因子變化的臨床意義[J].中華實(shí)用兒科臨床雜志，2020，35（13）：974-977.

[3]林淑斌，黃宏琳.川崎病患兒外周血中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)水平研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2020，17（33）：127-130.

[4]江載芳，申昆玲，沈穎.諸福棠實(shí)用兒科學(xué)[M].8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：778-788.

[5]李東秀，黃植寧.小兒川崎病病因及發(fā)病機(jī)制研究現(xiàn)狀[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2021，19（7）：191-194.

[6]劉麗莎，李喆倩，韓勍，等.川崎病患兒凝血指標(biāo)變化及其臨床意義研究[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2019，39（10）：1515-1517，1524.

[7]吳守業(yè)，林道炯，張余轉(zhuǎn).川崎病患兒外周血細(xì)胞因子和T細(xì)胞免疫在疾病不同時(shí)期的表達(dá)特點(diǎn)研究[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2020，35（1）：118-121.

[8]許文苑，孫寶蘭，徐美玉.T淋巴細(xì)胞與川崎病免疫反應(yīng)的研究進(jìn)展[J].江蘇醫(yī)藥，2021，47（1）：97-101.

[9]韓云坤，孫冰，李麗紅，等.川崎病T細(xì)胞免疫及細(xì)胞因子變化的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15（9）：1533-1536.

[10]張炎，猶登霞，余琳琳，等.川崎病患兒不同時(shí)期T細(xì)胞亞群及炎性因子的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2019，31（12）：1588-1590.

[11]李雪茹，解啟蓮，張晨宇，等.川崎病患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群變化及其臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2019，47（1）：9-12.

[12]胡具雄，盧一斌，馬效東，等.細(xì)胞因子在川崎病中的臨床意義[J].浙江醫(yī)學(xué)，2020，42（11）：1135-1137.

[13]吳月.IL-6與經(jīng)典炎癥指標(biāo)預(yù)測(cè)川崎病臨床分型、IVIG反應(yīng)性及冠脈損害的對(duì)比研究[D].合肥：安徽醫(yī)科大學(xué)，2020.

[14]陳玉萍，張?zhí)m.不同炎性指標(biāo)檢測(cè)在川崎病患兒診斷中的價(jià)值[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2020，18（3）：362-364.

[15]陳永琴.川崎病發(fā)病機(jī)制及診治的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床新醫(yī)學(xué)，2019，12（11）：1254-1258.

[16]胡景偉，牛紅艷，薩初然貴，等.川崎病急性期患兒血清對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激、增殖及凋亡的影響[J].山東醫(yī)藥，2020，60（32）：18-21.

[17]史覓桃，賈春梅.T淋巴細(xì)胞亞群在兒童疾病中的研究進(jìn)展[J].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2019，35（12）：121-124.

[18]張少鋒，殷利平.川崎病患兒血清chemerin、omentin-1、APN、IL-1β、TNF-α水平檢測(cè)及其意義[J].臨床急診雜志，2019，20（1）：65-69.

[19]李婷婷.川崎病免疫功能和炎癥因子檢測(cè)[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（90）：164.

[20]李焰，吳新丹，王獻(xiàn)民，等.細(xì)菌感染對(duì)川崎病預(yù)后的影響[J].兒科藥學(xué)雜志，2020，26（11）：8-12.

（收稿日期：2021-04-02） （本文編輯：張爽）