顏孟雄 黃婧 楊再波

慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）為口腔科最常見的牙周類疾病，也是我國(guó)成人失牙的首要病因。慢性牙周炎不僅危害患者局部口腔健康，且致病菌經(jīng)咀嚼等多種途徑進(jìn)入血液循環(huán)后可使機(jī)體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，對(duì)全身多處系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響［1］。牙周炎局部炎癥微環(huán)境及其包含的各類炎性分子是造成牙周支持組織炎癥、進(jìn)行性附著喪失及骨吸收的主要原因［2］。其中白介素-10（interleukin-10，IL-10）、白介素-23（interleukin-23，IL-23）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemo attractant protein-1，MCP-1）被證實(shí)與牙周炎發(fā)病有密切關(guān)系［3］。本文主要分析慢性牙周炎患者齦溝液IL-10、IL-23、MCP-1 水平及其與牙周指數(shù)的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年5月至2020年4月本院口腔診療中心患者134例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①慢性牙周炎者符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，牙齦炎者符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②近12 周內(nèi)未應(yīng)用抗生素、免疫治療藥物、非甾體抗炎藥等；③半年內(nèi)未接受過潔治、系統(tǒng)性牙周治療，測(cè)定牙無齲洞。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并系統(tǒng)性炎癥性疾病、肝腎損傷；②近4 周內(nèi)有相關(guān)感染性疾病、牙周炎病史；③近期吸煙飲酒史或正畸治療史。依據(jù)口腔情況分為對(duì)照組（n=30，牙周健康，無牙周治療史或與牙周炎相關(guān)的全身性疾病、無吸煙酗酒史）、牙齦炎組（n=48）、慢性牙周炎組（n=56），對(duì)照組中男14例，女16例，平均年齡（40.15±4.23）歲，牙齦炎組中男25例，女23例，平均年齡（40.24±4.18）歲，慢性牙周炎組中男29例，女27例，平均年齡（40.34±4.16）歲，依據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［4］進(jìn)行嚴(yán)重程度分級(jí)，本次慢性牙周炎患者分為輕度病變亞組30例，中重度病變亞組26例。3 組的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入組對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 牙周指數(shù)檢查

對(duì)全口余留牙齒進(jìn)行牙周情況檢查，包括菌斑指數(shù)（plaque index，PLI）、出血指數(shù)（blood index，BI）、PD、AL，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［6］進(jìn)行評(píng)估。

1.2.2 齦溝液標(biāo)本采集

所有入選對(duì)象均選取6 顆指數(shù)牙（16、11、26、36、31、46），取6 顆指數(shù)牙的近中頰位點(diǎn)牙周指標(biāo)均值代表該患者牙周情況，均無齲齒、牙髓、根尖病變或咬合創(chuàng)傷，不符合條件者取鄰牙。佩戴無菌手套進(jìn)行臨床操作，小心去除待取部位的齦上菌斑、牙石，無菌干棉卷隔濕，以氣槍吹干牙面10 s，將吸潮紙輕插入受試牙的近中頰位點(diǎn)，在遇輕微阻力時(shí)即停止，30 s 后取出（如被血污染則棄除）。將取完齦溝液后的6 根吸潮紙尖一同放入原EP 管稱重，減去原記錄重量則為齦溝液重量，按1 g/mL換算成體積，記錄后EP 管封口置于-80℃凍存?zhèn)溆?，?biāo)本采集均由同一人獨(dú)立完成。

1.2.3 齦溝液IL-10、IL-23、MCP-1 水平測(cè)定

PBS 緩沖液200 μL 浸潤(rùn)待測(cè)齦溝液紙尖末端，離心半徑10 cm，12 000 r/m 速率離心5 min，取上清2 μL，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（武漢博士德公司）檢測(cè)IL-10、IL-23、MCP-1 水平，將試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至10 μg/mL，取96 孔板，每孔加入標(biāo)準(zhǔn)液0.1 mL，經(jīng)4℃過夜，將待測(cè)樣本與試劑盒一起平衡至室溫；次日加入待測(cè)樣品，100 μL PBS 緩沖液以5 000 r/min 速率離心5 min，去除濾紙條，保留上清液，在37℃下孵育1 h，加入雙抗，經(jīng)37℃孵育30 min，檢測(cè)450 nm 波長(zhǎng)處光密度（optical density，OD）值［7］。

1.3 觀察指標(biāo)

①比較對(duì)照組、牙齦炎組、慢性牙周炎組PLI、BI、PD、AL；②比較對(duì)照組、牙齦炎組、慢性牙周炎組齦溝液中IL-10、IL-23、MCP-1 水平；③比較不同嚴(yán)重程度慢性牙周炎患者牙周指數(shù)及齦溝液中IL-10、IL-23、MCP-1 水平；④分析慢性牙周炎患者溝液中IL-10、IL-23、MCP-1水平與牙周指數(shù)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采取單因素方差分析，組間進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組PLI、BI、PD、AL 比較

3 組PLI、BI、PD、AL 比較：慢性牙周炎組＞牙齦炎組＞對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 3 組PLI、BI、PD、AL 比較（±s）Table 1 Comparison of PLI，Bi，PD and Al in 3 groups（±s）

表1 3 組PLI、BI、PD、AL 比較（±s）Table 1 Comparison of PLI，Bi，PD and Al in 3 groups（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與牙齦炎組比較，bP＜0.05。

組別對(duì)照組牙齦炎組慢性牙周炎組F/t 值P 值n 30 48 56 PLI 0.77±0.08 0.96±0.11a 1.10±0.12ab 90.921＜0.001 BI 0.57±0.06 0.78±0.08a 0.98±0.12ab 185.132＜0.001 PD（mm）2.41±0.26 3.15±0.34a 4.35±0.48ab 267.529＜0.001 AL（mm）0 1.85±0.19 3.52±0.37 28.229＜0.001

2.2 3 組齦溝液IL-10、IL-23、MCP-1 水平比較

牙齦炎組、慢性牙周炎組齦溝液IL-10 低于對(duì)照組，IL-23、MCP-1 水平高于對(duì)照組，慢性牙周炎組齦溝液IL-10 低于牙齦炎組，IL-23、MCP-1 水平高于牙齦炎組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 不同嚴(yán)重程度慢性牙周炎患者牙周指數(shù)及IL-10、IL-23、MCP-1 水平比較

輕度病變亞組齦溝液IL-10 高于中重度病變亞組，PLI、BI、PD、AL、IL-23、MCP-1 水平低于中重度病變亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 3 組齦溝液IL-10、IL-23、MCP-1 水平比較（±s）Table 2 Comparison of the levels of IL-10，IL-23 and MCP-1 in gingival crevicular fluid among 3 groups（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與牙齦炎組比較，bP＜0.05。

組別對(duì)照組牙齦炎組慢性牙周炎組F 值P 值n 30 48 56 IL-10（μg/L）724.15±73.58 697.41±70.51a 524.69±53.49ab 132.054＜0.001 IL-23（μg/L）6.36±0.65 7.27±0.78a 12.44±1.35ab 468.221＜0.001 MCP-1（pg/μL）20.59±2.18 40.18±4.26a 62.55±6.37ab 736.530＜0.001

2.4 慢性牙周炎患者齦溝液IL-10、IL-23、MCP-1水平與牙周指數(shù)相關(guān)性

相關(guān)分析顯示，慢性牙周炎患者齦溝液IL-10 水平與牙周指數(shù)各項(xiàng)呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），IL-23、MCP-1水平均與牙周指數(shù)各項(xiàng)呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表4。

3 討論

慢性牙周炎為常見口腔疾?。?］。牙齦上皮細(xì)胞與免疫細(xì)胞在牙周致病菌作用下，出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，其中IL-10、IL-23、MCP-1 與慢性牙周炎發(fā)展的關(guān)系受到了關(guān)注。IL-23 可起到前炎性因子作用，發(fā)揮促炎作用并影響機(jī)體免疫反應(yīng)；IL-10 與高加索人和亞洲人的牙周炎易感性有關(guān)［8］；MCP-1 作為一種單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞特異性炎性趨化因子也被發(fā)現(xiàn)與炎癥疾病相關(guān)［9］。因此IL-10、IL-23、MCP-1 可能與慢性牙周炎的發(fā)展有密切關(guān)系，明確其相關(guān)性有重要意義。

本研究發(fā)現(xiàn)牙齦炎組、慢性牙周炎組IL-10 低于對(duì)照組，這與國(guó)外Bi 等［10］的報(bào)道結(jié)果一致，表明IL-10 可在一定程度上對(duì)慢性牙周炎患者起到保護(hù)作用。IL-10 可抑制黏附因子表達(dá)，使促有絲分裂物質(zhì)作用減少，降低機(jī)體內(nèi)生長(zhǎng)因子、炎性因子水平。Th17 細(xì)胞可放大炎癥反應(yīng)，而IL-23 為Th17細(xì)胞產(chǎn)生作用的關(guān)鍵因子［11］。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果這與國(guó)外Sadeghi 等［12］的報(bào)道結(jié)果相似。當(dāng)牙齦炎發(fā)生炎癥時(shí)活化的中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞可產(chǎn)生大量IL-23，從而發(fā)揮前炎癥因子作用，加重牙周組織的炎癥程度。早期Bostr?m等［13］報(bào)道，牙周炎患者血清及炎癥牙齦結(jié)締組織MCP-1 水平高于健康牙齦組織，MCP-1 與牙周炎有明顯相關(guān)性，本研究結(jié)論與之一致。MCP-1 過表達(dá)可趨化大量單核巨噬細(xì)胞游走于牙周組織的齦溝液中，分泌黏附分子等炎性介質(zhì)，形成局部炎癥微環(huán)境，導(dǎo)致牙周軟組織炎性破壞［14］。

表3 不同嚴(yán)重程度慢性牙周炎患者牙周指數(shù)及IL-10、IL-23、MCP-1 水平比較（±s）Table 3 Comparison of periodontal index and levels of IL-10，IL-23 and MCP-1 in patients with chronic periodontitis of different severity（±s）

表3 不同嚴(yán)重程度慢性牙周炎患者牙周指數(shù)及IL-10、IL-23、MCP-1 水平比較（±s）Table 3 Comparison of periodontal index and levels of IL-10，IL-23 and MCP-1 in patients with chronic periodontitis of different severity（±s）

病變嚴(yán)重程度輕度病變亞組中重度病變亞組t 值P 值n 30 25 PLI 0.99±0.12 1.13±0.14 4.030＜0.001 BI 0.84±0.08 1.02±0.11 7.066＜0.001 PD（mm）3.88±0.39 4.41±0.45 4.722＜0.001 AL（mm）2.06±0.23 3.67±0.38 19.468＜0.001 IL-10（μg/L）645.15±65.89 506.48±52.64 8.608＜0.001 IL-23（μg/L）10.56±1.18 14.21±1.43 10.465＜0.001 MCP-1（pg/μL）58.16±5.79 63.01±6.45 2.965 0.004

表4 慢性牙周炎患者齦溝液IL-10、IL-23、MCP-1 水平與牙周指數(shù)相關(guān)性Table 4 Correlation between the levels of IL-10，IL-23，MCP-1 in GCF and periodontal index in patients with chronic periodontitis

相關(guān)性分析結(jié)果表明，IL-10、IL-23、MCP-1 與慢性牙周炎患者牙周指數(shù)有一定關(guān)系。IL-10 是最重要的炎癥抑制因子，IL-10 水平異常時(shí)可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能紊亂及病理損傷，因此其與牙周指數(shù)有一定關(guān)聯(lián)［15］。IL-23 水平和自身免疫病及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)［16］，因此IL-23 與牙周指數(shù)也有密切關(guān)聯(lián)，可反映牙周組織損傷程度。MCP-1 則可趨化大量單核巨噬細(xì)胞，其可經(jīng)自分泌方式產(chǎn)生大量MCP-1蛋白，加重炎癥微環(huán)境，此外齦溝液中MCP-1 高表達(dá)也可進(jìn)一步趨化堿性粒細(xì)胞至反應(yīng)區(qū)域，引起牙槽骨吸收，加重牙周組織破壞，因此MCP-1 與牙周指數(shù)也存在關(guān)聯(lián)。本研究也有一定不足之處，所取齦溝液樣本量有限，未進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，由于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)變異系數(shù)（Coefficient of Variation，CV）較大，可能導(dǎo)致本次結(jié)果有局限性，此外每組樣本例數(shù)較少，得出的研究結(jié)論有片面性。后期將擴(kuò)大樣本量，對(duì)慢性牙周炎患者齦溝液重復(fù)采集齦溝液樣本進(jìn)行檢測(cè)，以進(jìn)一步驗(yàn)證本次結(jié)論。

綜上所述，慢性牙周炎患者齦溝液中IL-10 呈低表達(dá)，而IL-23、MCP-1 水平升高，且三者均與牙周指數(shù)（PLI、BI、PD、ALI）有密切關(guān)系，臨床可加以監(jiān)測(cè)。