高嫣

（甘肅省張掖市河西學(xué)院附屬張掖人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，甘肅 張掖 734000）

0 引言

丙型肝炎主要由RNA 病毒引發(fā)，主要傳播渠道為血液傳播及與病毒攜帶者接觸性傳播，RNA 病毒潛伏期比較長，其臨床表現(xiàn)并不顯著，右上腹不適感是攜帶RNA 病毒感染的常見合并癥，但是很容易被患者忽略，對(duì)患者治療產(chǎn)生一定影響。丙型肝炎慢性進(jìn)展過程中，可逐漸轉(zhuǎn)化為慢性肝炎，如果患者未能得到及時(shí)而有效的救治，最終引發(fā)肝腹水、肝硬化，病情嚴(yán)重者發(fā)展至肝癌。因此，對(duì)丙型肝炎患者做出早期診斷，可及時(shí)明確患者病情，并對(duì)其治療提供一定依據(jù)[1]。目前，臨床丙型肝炎患者檢驗(yàn)方法比較多，選擇適宜的檢驗(yàn)方法，對(duì)患者確診病情具有重要幫助。選取84 例丙型肝炎患者，分析不同檢驗(yàn)方法在丙型肝炎患者檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果，包括熒光定量PCR 法、酶聯(lián)免疫法，內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從2018 年1 月-2020 年11 月甘肅省張掖市河西學(xué)院附屬張掖人民醫(yī)院收治的確診丙型肝炎患者中選取滿足研究條件的84 例患者，將其作為觀察樣本，回顧性分析上述患者的臨床資料，所選病患均滿足疾病檢驗(yàn)各項(xiàng)操作指征，且患者本人依從性良好。所選病患均分別行熒光定量PCR 法、電化學(xué)發(fā)光法兩種檢驗(yàn)方法，本組患者中，男44 例，女40 例，年齡25～60 歲，平均（34.12±3.09）歲。數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果顯示（P>0.05），可開展對(duì)比分析。所有患者均能夠做好各項(xiàng)操作的配合，納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：①病歷資料完整；②患者本人知情同意；③滿足檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)；④認(rèn)知功能正常；⑤能夠正常交流；⑥成年人。排除標(biāo)準(zhǔn)：①拒絕復(fù)查及隨訪；②合并嚴(yán)重軀體疾?、酆喜?yán)重血液性疾病；④合并器質(zhì)性病變；⑤合并其他嚴(yán)重傳染性疾??；⑥合并心肺、肝腎功能嚴(yán)重異常；⑦合并嚴(yán)重精神障礙；⑧不符合臨床檢驗(yàn)操作。

1.3 檢驗(yàn)方法

本組患者均分別接受熒光定量PCR 法和酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)，收集受檢者清晨空腹靜脈血，劑量為3mL，以3000r/min 速度對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行離心處理，離心時(shí)間控制在10min，取上清液保留，并將其作為檢驗(yàn)標(biāo)本。取上清液，將上清液充分混合在組織裂解液中，然后將其放入水浴鍋中，時(shí)間控制在15min 左右，溫度控制在60℃，再次對(duì)其進(jìn)行離心處理，取其上清液，利用上清液制作脫氧核糖苷酸模板，之后將其放置在定量 PCR 儀器上，選取合適菌落行檢驗(yàn)，在待測樣本上直接獲取具有特異性的血清熒光抗體，洗滌后通過熒光顯微鏡觀察，從而對(duì)待測樣本的病毒感染情況作出判斷。酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)操作選用標(biāo)準(zhǔn)試劑盒，在血清中添加酶復(fù)合物，并對(duì)其進(jìn)行孵育，孵育時(shí)間60min，觀察混合物，處于無光狀態(tài)后持續(xù)半小時(shí)，待完全反應(yīng)后，在混合物中添加終止液，待反應(yīng)終止后，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判斷。為保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，上述兩種檢驗(yàn)操作均由同一名臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)醫(yī)師完成，操作由同一臺(tái)機(jī)器、同一個(gè)采血小組完成，嚴(yán)格按照熒光定量PCR 法和酶聯(lián)免疫法完成相關(guān)檢驗(yàn)操作，根據(jù)檢驗(yàn)試劑要求進(jìn)行測定，做好檢驗(yàn)流程質(zhì)量控制，準(zhǔn)確記錄兩種檢驗(yàn)方法陽性檢出情況。

1.4 觀察指標(biāo)

通過對(duì)兩組數(shù)據(jù)的比較分析，對(duì)比熒光定量PCR法和電化學(xué)發(fā)光法丙型肝炎檢驗(yàn)陽性檢出率，準(zhǔn)確記錄后做好對(duì)比工作。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)分析利用SPSS 26.0 軟件，t檢驗(yàn)計(jì)量資料（），用χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料[n（%）]，P<0.05 說明兩組差異較為明顯。

2 結(jié)果

熒光定量PCR 法丙型肝炎檢驗(yàn)陽性例數(shù)為81 例，陽性檢出率為96.43%（81/84），酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)丙型肝炎陽性例數(shù)為例，陽性檢出率為86.90%（73/84），P<0.05。見表1。

表1 兩種檢驗(yàn)方法陽性檢出情況對(duì)比（n，%））

3 討論

丙型肝炎由丙型肝炎病毒（HCV）感染引發(fā)，是引發(fā)丙肝的關(guān)鍵因素，誘發(fā)因素包括過度勞累、長期飲酒，同時(shí)肝毒性藥物也是發(fā)病的主要原因，主要傳播途徑為血液傳播、母嬰傳播及性傳播[3]。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，近年來嬰幼兒丙型肝炎病毒感染發(fā)病率逐年上升，影響較大，需要引起臨床的廣泛關(guān)注與重視。嬰幼兒人群發(fā)病率比較高的原因在于遺傳因素，且其免疫功能尚未完全形成，因此更容易感染此病[4]。由于患兒病情嚴(yán)重，為避免造成嚴(yán)重后果，需加強(qiáng)患兒的治療與干預(yù)，為改善患兒病情提供更多幫助。丙型肝炎分為急性和慢性兩種，急性丙型肝炎患者病情比較輕，主要臨床表現(xiàn)為惡心、厭食、全身乏力等。而對(duì)于慢性丙型肝炎患者而言，初期臨床癥狀表現(xiàn)比較輕，表現(xiàn)主要為腹脹、食欲不振，隨著病情進(jìn)展，可逐漸演變成肝硬化和肝腹水，并且合并腹腔積液、黃疸等，部分患者會(huì)伴有肝性腦病，對(duì)患者生命安全造成嚴(yán)重威脅[5]。實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)證實(shí)，近年來臨床丙型肝炎病毒感染率逐年升高，導(dǎo)致患者生活質(zhì)量明顯下降?；谏鲜龇治稣J(rèn)為，做好早期丙型肝炎診斷，對(duì)患者后續(xù)治療及愈后均可發(fā)揮明顯作用。有學(xué)者指出，對(duì)于丙型肝炎患者，其病程周期比較長，HCV 轉(zhuǎn)陰率比較低，一旦發(fā)生誤診或漏診，會(huì)延誤患者治療，增加惡性并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，是引起患者死亡的主要因素[6]。針對(duì)丙型肝炎患者的預(yù)防和治療，目前臨床尚無特效疫苗和特效藥物，因而做好早期預(yù)防和檢測，及時(shí)做好診斷，可明顯降低丙型肝炎患者發(fā)病率。

最初，主要采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢驗(yàn)，對(duì)于病毒性肝炎的診斷，隨后，臨床陸續(xù)開展酶聯(lián)免疫吸附法，目前已經(jīng)發(fā)展到基于DNA 的多種測方法，在肝炎病毒感染診斷中發(fā)揮明顯作用[7]。目前，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)是目前診斷肝炎病毒檢驗(yàn)的主要檢測方式，大量實(shí)踐工作經(jīng)驗(yàn)證實(shí)，熒光定量PCR 準(zhǔn)確率比較高，與常規(guī)為檢驗(yàn)方法相比，熒光定量PCR 檢驗(yàn)?zāi)軌蝻@著提高臨床診斷效果。與此同時(shí)，血清學(xué)檢驗(yàn)操作便利，陽性檢出率比較高，在臨床中有廣泛的應(yīng)用。但是有文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果顯示，血清學(xué)檢驗(yàn)方法總體效果不如電化學(xué)發(fā)光法[8]。因此，分析不同檢驗(yàn)方法在丙型肝炎病毒感染中的診斷作用，具有現(xiàn)實(shí)意義。本次研究主要是探討不同檢驗(yàn)方法對(duì)丙型病毒性肝炎的檢驗(yàn)結(jié)果。既往臨床將酶聯(lián)免疫法檢驗(yàn)結(jié)果作為丙型肝炎患者檢驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)，此種方法是最早應(yīng)用于丙型肝炎患者診斷的檢驗(yàn)方法，應(yīng)用范圍廣，總體檢驗(yàn)效果良好。但是由于此種檢驗(yàn)方法操作流程繁瑣復(fù)雜，對(duì)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部溫度條件及濕度條件的要求也比較高，檢驗(yàn)成本比較高，且一旦出現(xiàn)偏差，會(huì)導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果受到嚴(yán)重影響，造成檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性降低[9]。為提升檢驗(yàn)效率與質(zhì)量，發(fā)展新型檢驗(yàn)技術(shù)，并將其應(yīng)用在丙型肝炎患者檢驗(yàn)中，已經(jīng)成為臨床的共識(shí)。

肝炎病毒入侵到肝部后，會(huì)產(chǎn)生一定有毒物質(zhì)，被直接帶入到血液循環(huán)中，從而破壞相關(guān)的彈性蛋白，對(duì)肝細(xì)胞組織造成嚴(yán)重?fù)p傷。血清學(xué)檢驗(yàn)是指通過含有已知性抗體的免疫血清，與分離培養(yǎng)的未知純種細(xì)菌或標(biāo)本中的抗原進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)，從而確定病毒感染類型[10]。熒光定量PCR 檢測法屬于新型細(xì)菌檢驗(yàn)方法，屬于生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，利用光譜技術(shù)和DNA雜交優(yōu)勢，有效提高病毒檢驗(yàn)的敏感性、準(zhǔn)確性及檢出率。PCR 檢測法操作簡單，檢測過程中等待時(shí)間較短，不易受到外界不良因素的影響，也不會(huì)輕易將檢驗(yàn)標(biāo)本中的原有菌群給破壞掉，評(píng)價(jià)較高。有文獻(xiàn)[11]報(bào)道認(rèn)為，對(duì)于丙型肝炎患者而言，采用熒光定量PCR 檢測法進(jìn)行檢驗(yàn)，不僅可進(jìn)行定量分析，還具有定性檢驗(yàn)作用，檢驗(yàn)靈敏度比較高，且具有較強(qiáng)的特異性。

丙型肝炎病毒感染如果不及時(shí)進(jìn)行治療和干預(yù)，會(huì)增加肝損傷程度，加重患者病情，進(jìn)而增加臨床治療難度。目前，臨床診斷主要包括抗原檢測、血清學(xué)檢驗(yàn)等。本研究結(jié)果顯示，熒光定量PCR 法丙型肝炎檢驗(yàn)陽性率為96.43%，酶聯(lián)免疫法丙型肝炎檢驗(yàn)陽性率為86.90%（P<0.05），與文獻(xiàn)[12]分析報(bào)道結(jié)果基本一致，充分說明熒光定量PCR 法在丙型肝炎患者檢驗(yàn)中的應(yīng)用優(yōu)勢和使用價(jià)值。大量研究已經(jīng)證實(shí)，血清學(xué)檢驗(yàn)利用抗原與抗體之間專一性識(shí)別和結(jié)合的特征，對(duì)病毒進(jìn)行診斷和漸變，不僅靈敏度高，同時(shí)檢驗(yàn)工作操作便利。但是，熒光定量PCR 檢測將熒光探針或者熒光染料加入到常規(guī)PCR 檢驗(yàn)技術(shù)操作中，實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)，然后對(duì)病毒檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行定量分析，彌補(bǔ)病毒含量較低時(shí)無法檢出病毒的弊端[13]。本研究也存在一定局限性，僅對(duì)兩種檢驗(yàn)方法的丙型肝炎病毒陽性檢出率進(jìn)行對(duì)比分析，應(yīng)在日后相關(guān)研究中適當(dāng)增加觀察指標(biāo)，并且納入更多具有典型特點(diǎn)的病例，并且盡量減少地區(qū)、環(huán)境、氣候以及流行年份等因素的影響，從而為丙型肝炎病毒感染臨床診斷提供更多可行思路。

綜上所述，與酶聯(lián)免疫法相比，熒光定量PCR 法診斷丙型肝炎，陽性檢出率更高，操作更為簡便，檢驗(yàn)結(jié)果更為客觀，建議推廣。