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地克珠利納米乳含量測(cè)定方法的建立及穩(wěn)定性研究*

2021-03-05 10:04洪偉鳴張梁秋
廣州化工 2021年4期
關(guān)鍵詞:乙腈批號(hào)納米

丁 寧,洪偉鳴,張梁秋

(江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,江蘇 泰州 225300)

地克珠利(Diclazuril)又名氯嗪苯乙氰,屬三嗪苯乙腈化合物,是一種聚酯類藥物,同時(shí)也是理想的抗球蟲藥物,具備高效、低毒、廣譜的特點(diǎn)[1],廣泛用于雞、鴨和兔球蟲病,在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中也得到一定應(yīng)用。地克珠利在水中幾乎不溶,水溶性差成為限制地克珠利制劑發(fā)展的主要因素。納米乳(Nanoemulsion)制劑是指粒徑分布在1~100 nm,外觀澄清、透明且動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)穩(wěn)定的體系,其可以增加難溶性藥物的溶解度,提高生物利用度[2],包括O/W型、W/O型、B.C型,其中O/W 型納米乳可以與水以任意比例互溶。本課題組針對(duì)地克珠利溶解度差的問(wèn)題,將其溶解于適當(dāng)?shù)挠拖嘀?,制備了O/W型地克珠利納米乳,極大提高了地克珠利的溶解度,以期為地克珠利新劑型開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 藥物與試劑

Diclazuril標(biāo)準(zhǔn)品(95%,批號(hào):fy-m0222a),南通飛宇生物科技有限公司購(gòu)買。地克珠利納米乳(規(guī)格:20 mg/16 m:, 批號(hào):20181210、20181211、20181212),自研。乙腈(色譜純,批號(hào):r181202),甲醇(色譜純,批號(hào):r181308),美國(guó)DIKMA;磷酸(分析純,批號(hào):20180908),冰乙酸(分析純,批號(hào):20180920),N,N-二甲基甲酰胺(分析純,批號(hào):20181001),國(guó)藥集團(tuán)。

1.2 含量測(cè)定

1.2.1 色譜條件

色譜柱為 Waters Xbridge C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相為乙腈:水:磷酸:冰乙酸(54:46:0.15:0.15(V/V/V/V));流速為1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為 280 nm;進(jìn)樣量為 20 μL;柱溫為 25 ℃。

1.2.2 溶液的制備

對(duì)照品儲(chǔ)備液: 精密稱取20 mg地克珠利標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL 容量瓶中,用 N,N-二甲基甲酰胺作溶劑溶解并定容[2],然后搖勻,此即為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

供試品溶液及陰性對(duì)照溶液:分別精密移取2 mL地克珠利納米乳樣品溶液和2 mL空白納米乳樣品溶液,分別置于50 mL 容量瓶中,各加入2 mL乙腈溶液,用超聲波清洗機(jī)超聲10 min后充分破乳,再用流動(dòng)相稀釋定容至50 mL,搖勻后分別作為供試品溶液及陰性對(duì)照溶液。

1.2.3 系統(tǒng)適用性

分別取上述三種溶液按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣、檢測(cè),并記錄色譜圖。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

分別精密移取適量對(duì)照品儲(chǔ)備液于適宜規(guī)格的容量瓶中,用流動(dòng)相配制成濃度為2.02、4.04、10.12、20.24 和40.48 μg/mL 的對(duì)照品系列溶液,在“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)樣后記錄色譜圖。以地克利珠對(duì)照品系列溶液的濃度C及色譜峰面積 A分別作為橫縱坐標(biāo),線性回歸后繪制地克珠利對(duì)照品系列溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5 精密度

分別取濃度為 4.04、10. 12 和 40. 48 μg/mL 的地克珠利對(duì)照品溶液,在“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6 次,記錄色譜圖,并根據(jù)峰面積并計(jì)算RSD。

1.2.6 穩(wěn)定性

取批號(hào)為20181210、20181211、20181212的三批地克珠利納米乳樣品,按照“1.2.2”項(xiàng)下處理方法,分別制備地克珠利納米乳供試品溶液,在室溫條件下靜置,于0、2、4、6、12 和 24 h取樣,在“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣,記錄色譜圖,并根據(jù)峰面積并計(jì)算RSD。

1.2.7 重復(fù)性

取批號(hào)為20181210的地克珠利納米乳樣品,按照“1.2.2”項(xiàng)下處理方法,平行制備地克珠利納米乳供試品溶液6份,按“1.2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖,并根據(jù)峰面積并計(jì)算RSD。

1.2.8 加樣回收率

分別精密量取“1.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液4.0,3.4 和 2.6 mL 各3份,置于10 mL 容量瓶中,分別加入濃度為20.24 μg/mL的地克珠利對(duì)照品溶液4 mL,用流動(dòng)相定容并搖勻。分別制成濃度為 120%、100%、80%的加樣回收率樣品溶液各3 份,進(jìn)樣檢測(cè)并根據(jù)峰面積計(jì)算加樣回收溶液中地克珠利的含量,進(jìn)而與理論含量進(jìn)行比較,計(jì)算加樣回收率和RSD。

1.2.9 供試品含量測(cè)定

取批號(hào)為20181210、20181211、20181212的三批地克珠利納米乳樣品,按 “1.2.2”項(xiàng)下方法,分別制備地克珠利納米乳供試品溶液,在“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣,記錄色譜圖,每批次樣品平行進(jìn)樣3次,根據(jù)色譜圖峰面積計(jì)算地克珠利納米乳的含量。

1.3 樣品穩(wěn)定性考察

1.3.1 影響因素試驗(yàn)

取批號(hào)為20181210、20181211、20181212的三批地克珠利納米乳樣品各3份于50 mL 透明螺口瓶中,分別進(jìn)行高溫(40 ℃恒溫)、高濕(相對(duì)濕度為75%,溫度為 25 ℃的恒溫)和強(qiáng)光(光照強(qiáng)度為4000 lx)試驗(yàn)。以上影響因素試驗(yàn)樣品分別在0、5、10天取樣,經(jīng)建立的高效液相色譜法測(cè)定含量,并觀察外觀有無(wú)顏色變化、分層或絮凝的現(xiàn)象。

1.3.2 加速試驗(yàn)

取批號(hào)為20181210、20181211、20181212的三批地克珠利納米乳樣品裝于50 mL 透明螺口瓶中,在溫度為32 ℃、濕度為65%的加速試驗(yàn)條件下靜置6個(gè)月,分別在0、1、2、3、6月取樣,經(jīng)建立的高效液相色譜法測(cè)定含量,并觀察外觀有無(wú)顏色變化、分層或絮凝的現(xiàn)象。

2 結(jié)果與討論

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 系統(tǒng)適用性

圖1為對(duì)照品溶液色譜圖、圖2為供試品溶液色譜圖、圖3為陰性對(duì)照溶液色譜圖。由圖1~圖3可見(jiàn),地克珠利吸收峰的保留時(shí)間為 7.7 min,供試品與對(duì)照品中地克珠利的保留時(shí)間一致且峰形較好,無(wú)明顯前沿、拖尾等現(xiàn)象,而陰性供試品在相應(yīng)位置未出現(xiàn)吸收峰,表明地克珠利納米乳制備所使用的輔料對(duì)地克珠利高效液相色譜法測(cè)定含量無(wú)干擾,該方法專屬性好,適用于地克珠利納米乳含量測(cè)定。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖Fig.1 Chromatogram of reference solution

圖2 供試品溶液色譜圖Fig.2 Chromatogram of test solution

圖3 陰性對(duì)照溶液色譜圖Fig.3 Chromatogram of negative control solution

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

以對(duì)照品系列溶液中地克珠利峰面積 A對(duì)地克珠利的濃度 C線性回歸,得繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 如圖4所示。得線性回歸方程為 A=38584C+4480.4(R2=0.9999),地克珠利濃度在 2.02~40.48 μg/mL 范圍內(nèi)其線性關(guān)系良好。

圖4 地克珠利標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.4 Dikezhuli standard curve

2.1.3 精密度

精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1,數(shù)據(jù)表明該檢測(cè)方法系統(tǒng)精密度良好,適用于地克珠利納米乳含量的測(cè)定。

表1 地克珠利高效液相精密度試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Precision test results of diclazuril by HPLC

2.1.4 穩(wěn)定性

經(jīng)測(cè)定,3 批樣品的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD值分別為 0.67%、0.55%和 0.69%,這表明地克珠利納米乳供試品溶液在室溫環(huán)境下24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.5 重復(fù)性

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算,地克珠利納米乳樣品溶液的重復(fù)性RSD值為2.14%,表明本方法適用于地克珠利納米乳樣品的含量測(cè)定,且重復(fù)性良好。

2.1.6 加樣回收率

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算,3個(gè)濃度加樣回收率樣品的平均加樣回收率分別為100.38%、100.81%和101.87%,見(jiàn)表2,表明該方法用于測(cè)定地克珠利納米乳樣品加樣回收率較高。

表2 地克珠利加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Test results of sample recovery of diclazuril

2.1.7 供試品含量測(cè)定

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算,3批地克珠利納米乳樣品含量分別為標(biāo)示量的96.75%、97.79%、97.53%,見(jiàn)表3。

表3 地克珠利納米乳含量測(cè)定結(jié)果Table 3 Determination results of diclazuril nanoemulsion

2.2 樣品穩(wěn)定性考察

2.2.1 影響因素試驗(yàn)

經(jīng)考察,3批地克珠利納米乳樣品影響因素試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。在高溫試驗(yàn)條件、高濕試驗(yàn)條件和強(qiáng)光試驗(yàn)條件下地克珠利納米乳外觀無(wú)明顯變化,澄清、透明,且無(wú)分層或絮凝等情況。高溫、高濕和強(qiáng)光對(duì)其含量均無(wú)明顯影響。

表4 地克珠利納米乳影響因素試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Test results of influencing factors of diclazuril nanoemulsion

2.2.2 加速試驗(yàn)

經(jīng)考察,3批地克珠利納米乳樣品加速試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。在溫度為32 ℃、濕度為65%的加速試驗(yàn)條件下,6個(gè)月內(nèi)地克珠利納米乳樣品含量穩(wěn)定,外觀澄清、透明且無(wú)分層或絮凝等現(xiàn)象。

表5 地克珠利納米乳加速試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Accelerated test results of diclazuril nanoemulsion

3 討 論

地克珠利具有水難溶性的特點(diǎn),極大的限制了制劑的發(fā)展而影響到臨床應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)將地克珠利制備成O/W型納米乳,不僅提高了地克珠利的水溶性,且可以與水以任意比例混溶,提高臨床應(yīng)用中藥物的給藥均勻性。O/W型地克珠利納米乳在含量測(cè)定時(shí)需要進(jìn)行破乳,若破乳劑選擇不當(dāng)或超聲破乳的時(shí)間和功率不足,將導(dǎo)致破乳不充分,影響高效液相檢測(cè)峰面積,使結(jié)果偏小。

目前,國(guó)內(nèi)外地克珠利含量測(cè)定通常使用紫外分光光度法[11]、液-質(zhì)聯(lián)用法[12]和高效液相色譜法[13],本實(shí)驗(yàn)中采用高效液相色譜法,方法簡(jiǎn)單,方便快捷,實(shí)用性強(qiáng)。在建立高效液相色譜法測(cè)定地克珠利納米乳中地克珠利含量的方法中,考察了甲醇-磷酸、乙腈-磷酸、乙腈-冰乙酸、乙腈-磷酸-冰乙酸等流動(dòng)相體系[13],最終乙腈:水:磷酸:冰乙酸(54:46:0.15:0.15(V/V/V/V))體系作為流動(dòng)相能明顯改善拖尾且理論塔板數(shù)高,因此選擇的流動(dòng)相為乙腈:水:磷酸:冰乙酸(54:46:0.15:0.15(V/V))。

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