摘 要：以南方高叢藍(lán)漿果品種“南月”優(yōu)選系離體葉片誘導(dǎo)出的愈傷組織為材料，開(kāi)展了激素、培養(yǎng)基及光照強(qiáng)度對(duì)愈傷組織分化影響的研究。結(jié)果表明：不同激素處理對(duì)藍(lán)漿果葉片愈傷組織分化的效果不同，其中以4mg/L的ZT誘導(dǎo)分化效果最好;經(jīng)MWPM培養(yǎng)基培養(yǎng)的愈傷組織轉(zhuǎn)綠率最高;光照強(qiáng)度對(duì)藍(lán)漿果葉片愈傷組織分化具有一定的影響，強(qiáng)光下誘導(dǎo)出的愈傷組織分化率較高。

關(guān)鍵詞：藍(lán)漿果葉片;愈傷組織分化;激素;培養(yǎng)基;光照

中圖分類號(hào) Q813.1;Q949.772.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2021）03-0015-02

愈傷組織在除去生長(zhǎng)素或降低生長(zhǎng)素濃度的培養(yǎng)基上即能發(fā)生器官的再分化，形成不定芽。筆者以南方高叢藍(lán)漿果品種“南月”優(yōu)選系A(chǔ)18愈傷組織為材料，研究激素、培養(yǎng)基、光照強(qiáng)度對(duì)藍(lán)漿果葉片愈傷組織分化的影響，以期為建立高效的藍(lán)漿果再生體系提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 南方高叢藍(lán)漿果品種“南月”優(yōu)選系A(chǔ)18誘導(dǎo)出并培養(yǎng)30d的愈傷組織。

1.1.2 培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基為WPM（不同培養(yǎng)基處理除外），在培養(yǎng)基中加入蔗糖25g/L（不同蔗糖濃度處理除外）、瓊脂5g/L、TDZ 0.5mg/L（不同激素處理除外），pH調(diào)至5.3。配制好的培養(yǎng)基經(jīng)常規(guī)滅菌后備用。

1.2 方法 取培養(yǎng)30d的愈傷組織接種于培養(yǎng)基上， 每個(gè)處理接種30塊愈傷組織，于溫度（25±2）℃、光照1800～2000lx（不同光照處理除外）、光照時(shí)間16h/d的條件下培養(yǎng)。每天觀察愈傷組織轉(zhuǎn)化情況，60d后統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)綠率及出芽情況。

轉(zhuǎn)綠率（%）=（轉(zhuǎn)綠芽塊數(shù)/接種芽塊數(shù)）×100

1.2.1 細(xì)胞分裂素對(duì)藍(lán)漿果愈傷組織分化的影響 激素處理設(shè)置為：ZT 4mg/L、TDZ 0.5mg/L、CPPU 2mg/L，對(duì)照（不添加任何細(xì)胞分裂素）。

1.2.2 培養(yǎng)基對(duì)藍(lán)漿果愈傷組織分化的影響 取培養(yǎng)30d的愈傷組織接種于培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基分別設(shè)置為WPM、MWPM、1/2WPM（大量元素減半，微量不變）、1/2MS（大量元素減半，微量不變）。

1.2.3 光照強(qiáng)度對(duì)愈傷組織分化的影響 光照強(qiáng)度處理設(shè)置為：全暗（0）、弱光（0～500lx）、正常光（1000～1500lx）、強(qiáng)光（2000～2500lx）。

1.3 數(shù)據(jù)處理 利用Excel2003軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 激素對(duì)藍(lán)漿果愈傷組織分化的影響 將生長(zhǎng)較好的愈傷組織接種到分化培養(yǎng)基上，愈傷組織繼續(xù)膨大增殖，雖然增殖較慢，但20d后能夠看到愈傷組織的表面有白色透明突起，標(biāo)志著分化的開(kāi)始。繼續(xù)培養(yǎng)，可以得到綠色的小芽苗。由表1可知，不同激素處理對(duì)藍(lán)漿果葉片愈傷組織分化的效果不同。4mg/L ZT和 0.5mg/L TDZ所處理的愈傷組織分化率一致，但芽點(diǎn)數(shù)量及質(zhì)量以ZT效果較好;經(jīng)2mg/L CPPU處理的愈傷組織轉(zhuǎn)綠率低且大部分枯死;對(duì)照組愈傷組織分化效果居中。由此可見(jiàn)，4mg/L ZT誘導(dǎo)分化效果最好。

2.2 培養(yǎng)基對(duì)藍(lán)漿果愈傷組織分化的影響 由表2可知，培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織轉(zhuǎn)化具有一定影響。其中，經(jīng)MWPM培養(yǎng)的愈傷組織轉(zhuǎn)綠率最高，其他幾種培養(yǎng)基轉(zhuǎn)綠率相差不大，但經(jīng)不同培養(yǎng)基培養(yǎng)的愈傷組織在轉(zhuǎn)綠后均呈枯萎狀。

2.3 光照強(qiáng)度對(duì)藍(lán)漿果愈傷組織分化的影響 由表3可知，光照強(qiáng)度對(duì)愈傷組織分化影響較大。全暗條件下，愈傷組織轉(zhuǎn)綠率為0，愈傷呈黃褐色;弱光下，愈傷組織轉(zhuǎn)綠率為36.67%，芽點(diǎn)量中等，色澤綠但部分呈枯萎狀;正常光下，轉(zhuǎn)綠率為86.67%，芽點(diǎn)質(zhì)量與弱光下誘導(dǎo)出的不定芽相同;強(qiáng)光下，愈傷組織轉(zhuǎn)綠率為90%，但芽點(diǎn)數(shù)量較少，色澤綠但部分呈枯萎狀。由此可見(jiàn)，光照強(qiáng)度對(duì)藍(lán)漿果葉片愈傷組織分化具有一定的影響，強(qiáng)光下誘導(dǎo)出的愈傷組織分化率較高。

3 結(jié)論與討論

影響愈傷組織分化為不定芽的因素有很多[1-2]，如激素、培養(yǎng)基及光照條件、愈傷組織轉(zhuǎn)接時(shí)間、愈傷組織轉(zhuǎn)接方式等。低濃度的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配比有利于愈傷組織的分化[3-4]，若細(xì)胞分裂素在培養(yǎng)基中添加較少，則不能促進(jìn)分化，但添加過(guò)多也會(huì)使愈傷組織變硬，失去光澤，顏色由綠變成褐色，因此選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素濃度有利于藍(lán)漿果愈傷組織分化出芽。本研究中選取較常用的幾個(gè)誘導(dǎo)不定芽再生的激素進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果顯示適宜濃度的ZT與TDZ較適宜誘導(dǎo)愈傷組織分化為不定芽。任何一種植物的組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的篩選是必不可少的過(guò)程。張愛(ài)香等[5]對(duì)春石斛蘭愈傷組織組織進(jìn)行分化時(shí)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)愈傷組織分化率最高的培養(yǎng)基為MS+NAA 1.2mg/L+KT1.5mg/L。本試驗(yàn)中，較利于愈傷組織分化的基本培養(yǎng)基為MW PM。光照條件是葉片愈傷組織誘導(dǎo)和分化的一個(gè)重要因素。通常情況下，在離體培養(yǎng)過(guò)程中，不同的物種、同一物種的不同外植體甚至同一外植體的不同誘導(dǎo)階段對(duì)光照的反應(yīng)都有可能不同。本研究中，強(qiáng)光照較利于愈傷組織分化，說(shuō)明在進(jìn)行愈傷組織分化試驗(yàn)時(shí)有必要進(jìn)行一定的光照。

愈傷組織的質(zhì)量是影響其分化的主要因素。愈傷組織塊較干燥、色澤內(nèi)部淡黃外表白色、結(jié)構(gòu)緊實(shí)、表面有白色顆粒狀凸起的愈傷組織容易分化成苗。一般在白色凸起部位先呈現(xiàn)綠色，最后發(fā)育成芽。表面濕潤(rùn)、松軟的愈傷組織塊不易分化出芽。顏色暗黃的愈傷組織塊在光照下極易褐化，不具有分化能力。在進(jìn)行轉(zhuǎn)基因研究時(shí)需對(duì)愈傷組織狀況進(jìn)行篩選，把握好最佳愈傷組織分化時(shí)間。

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（責(zé)編：徐世紅）

作者簡(jiǎn)介：張祝麗（1985—），女，安徽安慶人，從事園林園藝方面工作。? 收稿日期：2021-01-07