董奎良，姚洋，劉嬌媛

（大石橋市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 營(yíng)口 115100）

急性白血病屬于臨床中發(fā)生率較高的一種血液系統(tǒng)腫瘤，是一類造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，臨床主要表現(xiàn)為白血病細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖，凋亡受到阻礙，抑制正常造血[1]?；熓乾F(xiàn)階段臨床治療急性白血病的主要方式，但臨床治療效果不佳，具有較高的復(fù)發(fā)率和死亡率[2]。有研究[3]結(jié)果顯示，急性白血病的發(fā)生、發(fā)展與基因和相關(guān)信號(hào)通路異常密切相關(guān)。本研究主要分析急性白血病患者紅細(xì)胞生成素（EPO）及紅細(xì)胞生成素受體（EPOR）的表達(dá)及其臨床意義，以期為急性白血病的防治提供指導(dǎo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2018年2月至2019年7月收治的急性白血病患者80例，其中急性髓系白血病患者（AML組）與急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL組）各40例，并選擇同期收治的40例非血液系統(tǒng)疾病患者作為對(duì)照組。AML 組男28 例，女12例；年齡3～44 歲，平均（21.2±2.3）歲。ALL 組男 25 例，女15例；年齡4～43歲，平均（20.6±2.7）歲。對(duì)照組男23例，女17例；年齡8～52歲，平均（20.3±3.1）歲。3組臨床資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：急性白血病患者均滿足相關(guān)的診斷標(biāo)準(zhǔn)；肝腎功能無(wú)異常；患者知情同意并簽署知情同意書(shū)；本研究經(jīng)本院倫理協(xié)會(huì)審核批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：凝血功能異常者；精神疾病者；意識(shí)障礙者；嚴(yán)重肝腎功能異常者。

1.2 方法 ①選擇ELISA法對(duì)骨髓血漿中的EPO、EPOR水平進(jìn)行檢測(cè)：收集研究對(duì)象骨髓上清液，置于-80 ℃的環(huán)境下保存，根據(jù)ELISA試劑盒操作步驟開(kāi)展相關(guān)檢測(cè)。②采用RTPCR法檢測(cè)EPO、EPOR的mRNA表達(dá)水平：收集研究對(duì)象骨髓沉淀，置于-80 ℃的環(huán)境下保存，根據(jù)RNAis Plus操作步驟提取骨髓RNA，檢測(cè)其濃度，選擇TaKaRa Prime seripttm RT reagen tKit逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用熒光定量PCR法檢測(cè)mRNA水平。③采用Westernblot法檢測(cè)EPO、EPOR蛋白表達(dá)水平：收集研究對(duì)象骨髓沉淀，置于-80 ℃的環(huán)境下保存，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度，配制濃度為5%的濃縮膠和濃度為10%的SDS-PAGE 分離膠，50 μg 蛋白上樣電泳，轉(zhuǎn)至 0.2 μm PVDF膜，選擇濃度為5%的脫脂奶粉在室溫下封閉2 h，一抗4 ℃孵育過(guò)夜，然后進(jìn)行洗膜處理，二抗室溫孵育1 h，然后選擇ECL顯影曝光。

1.3 觀察指標(biāo) 比較AML 組、ALL 組和對(duì)照組骨髓血漿中EPO、EPOR水平及其mRNA、蛋白水平表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組骨髓血漿中 EPO、EPOR 水平比較 ALL 組、AML 組骨髓血漿中的EPO表達(dá)明顯高于對(duì)照組，EPOR表達(dá)明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；ALL組、AML組骨髓血漿中的EPO、EPOR表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 3組骨髓血漿中EPO、EPOR水平表達(dá)比較（）Table 1 Comparison of the expression of EPO and EPOR levels in bone marrow plasma among the three groups()

表1 3組骨髓血漿中EPO、EPOR水平表達(dá)比較（）Table 1 Comparison of the expression of EPO and EPOR levels in bone marrow plasma among the three groups()

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05

組別ALL組AML組對(duì)照組EPOR表達(dá)（ng/mL）1.61±0.48a 1.59±0.87a 8.43±1.24例數(shù)40 40 40 EPO表達(dá)（pg/mL）830.34±261.44a 940.24±330.96a 486.28±57.15

2.2 3 組骨髓血漿中EPO mRNA、EPOR mRNA 水平比較 ALL組、AML組骨髓血漿中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；ALL 組、AML 組骨髓血漿中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

2.3 3組骨髓血漿中EPO、EPOR蛋白水平表達(dá)比較 ALL組、AML 組骨髓血漿中EPO、EPOR 蛋白水平表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；而ALL 組、AML 組骨髓血漿中EPO、EPOR 蛋白水平表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表3。

表2 3組骨髓血漿中EPO mRNA、EPOR mRNA水平比較（）Table 2 Comparison of the levels of EPOmRNA and EPOR mRNA in bone marrow plasma among the three groups()

表2 3組骨髓血漿中EPO mRNA、EPOR mRNA水平比較（）Table 2 Comparison of the levels of EPOmRNA and EPOR mRNA in bone marrow plasma among the three groups()

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05

EPOR mRNA 2.76±1.73a 3.02±1.33a 0.81±0.25組別ALL組AML組對(duì)照組例數(shù)40 40 40 EPO mRNA 3.86±1.17a 4.09±1.76a 0.84±0.14

表3 3組骨髓血漿中EPO、EPOR蛋白水平表達(dá)比較（）Table 3 Comparison of the expression of EPO and EPOR protein levels in bone marrow plasma among three groups()

表3 3組骨髓血漿中EPO、EPOR蛋白水平表達(dá)比較（）Table 3 Comparison of the expression of EPO and EPOR protein levels in bone marrow plasma among three groups()

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05

EPOR蛋白水平表達(dá)2.35±0.92a 3.35±1.08a 0.44±0.05組別ALL組AML組對(duì)照組例數(shù)40 40 40 EPO蛋白水平表達(dá)1.46±0.25a 1.42±0.26a 0.72±0.18

3 討論

本研究結(jié)果顯示，急性白血病患者EPO、EPOR 均呈高表達(dá)，與焦楨等[4]研究結(jié)果一致。白血病患者骨髓中的白血病細(xì)胞增殖現(xiàn)象較顯著，機(jī)體處于持續(xù)缺氧狀態(tài)，導(dǎo)致EPO、EPOR分泌出現(xiàn)異常增加；同時(shí)，EPO/EPOR參與的JAK/STAT信號(hào)通路被激活，導(dǎo)致白血病細(xì)胞出現(xiàn)無(wú)線增值，而有關(guān)其具體的作用機(jī)制還應(yīng)深入探討[5-6]。相關(guān)研究結(jié)果顯示，在前列腺癌、膀胱移行癌、卵巢癌等腫瘤患者也存在EPO、EPOR高表達(dá)；同時(shí)，與分級(jí)、預(yù)后、危險(xiǎn)度密切相關(guān)，患者惡性程度越嚴(yán)重，表示患者局部缺氧現(xiàn)象越明顯，EPO分泌也越顯著[7-8]。以上結(jié)果表明，通過(guò)檢測(cè)EPO、EPOR 表達(dá)可對(duì)急性白血病患者的預(yù)后進(jìn)行判斷。

本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，ALL 組、AML 組骨髓血漿中的EPO表達(dá)明顯升高（P＜0.05）；ALL組、AML組骨髓血漿中的EPOR 表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。急性白血病患者EPOR信號(hào)通路中的JAK/STAT 途徑表現(xiàn)為持續(xù)活化狀態(tài)，導(dǎo)致大量的EPOR轉(zhuǎn)入到細(xì)胞內(nèi)，參與到基因調(diào)控中，進(jìn)而減少血漿中的表達(dá)量，然而該論點(diǎn)還應(yīng)通過(guò)深入研究進(jìn)一步論證[9-10]。

綜上所述，急性白血病患者的EPO、EPOR呈高表達(dá)，可根據(jù)EPO、EPOR表達(dá)量對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行判斷。