周娟 程素平

（1，江蘇省南通市動物疫病預防控制中心 226000；2，江蘇省海安市畜牧獸醫(yī)站 226600）

小反芻獸疫又稱“羊瘟”，是由副粘病毒科 （Paramyxoviridac）麻疹病毒屬中的小反芻獸疫病毒引起的羊的高度接觸性動物傳染病，山羊最易感，易感羊群的發(fā)病率和死亡率可達100%[1]。該病是OIE 法定報告動物疫病，也是全球計劃根除的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。2012 年國務院辦公廳發(fā)布《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012-2020 年)》，明確將其列入13 種重點防范的外來動物疫病。

2007 年小反芻獸疫首次傳入我國西藏阿里地區(qū)，2013 年11 月底小反芻獸疫再次傳入我國，疫情波及多個省份[2]。2015年南通市各市、縣、區(qū)由于從外地調(diào)運未經(jīng)嚴格檢疫的活羊而引發(fā)疫情，全市畜牧獸醫(yī)部門迅速行動，疫情得到有效控制，最大程度降低疫情造成的損失。

南通市是養(yǎng)羊大市，年養(yǎng)殖量約320 萬只。切實做好小反芻獸疫防控工作，事關(guān)養(yǎng)羊業(yè)持續(xù)健康發(fā)展。本病主要通過直接接觸傳染，病畜的分泌物和排泄物是傳染源，處于亞臨床型的病羊尤為危險?；疾⊙蛑饕憩F(xiàn)為體溫升高、口炎、肺炎、腹瀉、眼部、鼻腔處有漿液性分泌物等。小反芻獸疫潛伏期為4～5d，最長21d，自然發(fā)病僅見于山羊和綿羊，嚴重爆發(fā)時死亡率達100%，幼年動物感染后發(fā)病率和死亡率都很高。小反芻獸疫屬于外來疫病的一種，隨著南通市畜牧業(yè)的快速發(fā)展，與外界的物種交流逐漸頻繁，特別是活羊調(diào)運頻繁，易發(fā)生小反芻獸疫[3]。為進一步做好小反芻獸疫防控工作，貫徹落實《全國小反芻獸疫消滅計劃》 （農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2015〕 34 號），和《關(guān)于印發(fā)2019 年南通市動物疫病監(jiān)測與流行病學調(diào)查工作方案的通知》 （通農(nóng)牧〔2019〕 37 號），科學評估疫情風險與防控效果，更好地保障畜禽養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，了解南通市7 個縣（市）區(qū)羊群的小反芻獸疫免疫抗體水平和流行情況，于2019年10 月底至11 月初采用ELISA 方法和熒光RT-PCR 方法對采集的435 份羊血清和125 份口鼻拭子進行集中監(jiān)測，為制定小反芻獸疫的防控措施和消滅小反芻獸疫提供科學依據(jù)，現(xiàn)將檢測結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清樣品

南通市各縣（市）、區(qū)動物疫病預防控制中心依據(jù)《關(guān)于秋防集中監(jiān)測送樣的通知》 （通疫控〔2019〕 30 號）于11 月11 日前根據(jù)各縣（市）、區(qū)的送樣任務以隨機的方式采集符合要求的血清樣品共345 份、口鼻拭子樣品125 份送至南通市動物疫病預防控制中心，簡稱被動送樣。

《關(guān)于開展全市秋季重大動物疫病防疫工作檢查及飛行監(jiān)測采樣的通知》 （通疫控〔2019〕 31 號）由南通市級在養(yǎng)殖量較高的6 個縣(市) 區(qū)中隨機抽取海安、如皋、如東3 個縣（市）區(qū)，于11 月5～8 日由市級動物疫病預防控制中心檢查組采取現(xiàn)場查閱相關(guān)資料和采樣相結(jié)合的方法進行檢查，每個縣（市）區(qū)隨機抽查2 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)檢查1 個規(guī)模羊場及1個禽場（不與縣級抽查重復），由檢查組人員全程參與采樣并按規(guī)定封存保管交檢查組人員當日帶回南通市動物疫病預防控制中心，常規(guī)分離血清樣品并編號。3 個縣（市）共采集羊血樣90 份，簡稱飛行采樣。

2019 年秋防集中監(jiān)測共采集29 個羊場血樣435 份、口鼻拭子125 份，詳見表1。

1.1.2 檢測試劑和主要儀器

小反芻獸疫病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒 （批號：020171907）和小反芻病毒野毒特異性熒光RT-PCR 檢測試劑盒（批號：040211903）均購自青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心，酶標儀sunrise、熒光PCR 儀7500、Eppendorf 移液器等其余儀器和耗材為本實驗室自備。

1.2 檢測方法

1.2.1 ELISA 檢測原理及方法

采用小反芻獸疫診斷技術(shù)（GB/T 27982-2011）國家標準，利用阻斷ELISA 原理檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，本實驗嚴格按照小反芻獸疫抗體檢測試劑盒說明書操作。

1.2.2 ELISA 判定標準

在陽性對照阻斷率（PB）＞60，陰性對照阻斷率（PB）＜40，試驗結(jié)果成立的前提下，被檢樣品的阻斷率＞50，判為陽性，被檢樣品的阻斷率≤50，判為陰性。

表1 南通市秋防集中監(jiān)測羊樣品明細表

1.2.3 RT-PCR 檢測原理及方法

用自動核酸提取儀提取各類樣本中的RNA，每份被檢樣品使用1 個PCR 管，每管中依次加入：熒光RT-PCR 反應液21ml，酶混合液1ml，被檢樣品中提取RNA 溶液3ml。每次檢測設置陽性對照和陰性對照。加樣后，將PCR 管置于熒光PCR儀內(nèi)進行如下反應：50℃反轉(zhuǎn)錄15min；95℃，3min；然后進行40 個循環(huán)的PCR 擴增，擴增條件為94℃15s，60℃45s，在每個循環(huán)的第二步（60℃45s）收集熒光信號，其中報告熒光為FAM。

1.2.4 RT-PCR 判定標準

陽性對照出現(xiàn)特異性擴增曲線且Ct 值＜35，陰性對照無Ct值且無特異性擴增曲線。如果被檢樣品的Ct 值≤35 且有特異性擴增曲線則結(jié)果判為野毒株陽性；若Ct 值＞35 則判為野毒株陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原學檢測結(jié)果

2019 年南通市秋季集中監(jiān)測對采集的4 個場125 份口鼻拭子采用熒光RT-PCR 方法進行小反芻獸疫病毒野毒株病原學檢測，檢測結(jié)果全部為陰性，表明南通市沒有小反芻獸疫野毒株感染。

2.2 血清抗體檢測結(jié)果

2.2.1 南通市各縣（市）區(qū)被動送樣樣品的免疫抗體檢測結(jié)果

由表2 可知，2019 年秋季南通市羊小反芻獸疫被動送樣的7 個縣（市）區(qū)23 個養(yǎng)殖場（戶）345 份樣品的小反芻獸疫抗體陽性率平均為98.55%、平均阻斷率為89.32%，高于國家規(guī)定的70%的標準，表明南通市小反芻獸疫防疫情況較好，免疫效果達到較高水平。

2.2.2 “飛行采樣” 的縣（市）羊小反芻獸疫免疫抗體檢測

由表3 可知，“飛行采樣” 采集3 個縣（市）6 個場90 份樣品羊小反芻獸疫免疫抗體平均陽性率96.67%，平均阻斷率89.29%；僅有1 個場的抗體陽性率為80%，阻斷率為81.09%，其余場的陽性率均為100%。說明飛行采樣的羊場小反芻獸疫免疫效果也較好，均超過國家規(guī)定的標準。

2.2.3 南通市各縣（市）區(qū)的羊小反芻獸疫免疫抗體秋防集中檢測

由表4 可知，南通市7 個縣（市）區(qū)的435 份樣品中有427 份羊小反芻獸疫陽性，陽性率為98.16%，所有縣（市）區(qū)的羊小反芻獸疫免疫抗體陽性率均高于95%，且平均阻斷率也達到89.32%，說明南通市的羊小反芻獸疫的免疫水平在動物疫病防控系統(tǒng)的全體同志的共同努力下取得了較好的免疫效果，為重大動物疫病的防控打下堅實的基礎，為逐步消滅羊小反芻獸疫打下堅實的基礎。

3 討論

（1）南通市2019 年秋防集中監(jiān)測羊小反芻獸疫的免疫抗體陽性率超過了國家規(guī)定的70%的標準，且小反芻獸疫的病原學檢測也均為陰性，表明南通市羊群免疫抗體水平較高且養(yǎng)殖環(huán)境也是清凈的。小反芻獸疫是我國中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012～2020 年）優(yōu)先防治和重點防范的動物疫病之一，南通市的各縣（市）區(qū)政府通過購買服務，防疫員包村包戶，每年進行二次重大動物疫病普免、夏季集中補免和消毒滅源三大行動，同時監(jiān)督規(guī)模羊場按本場疫苗免疫程序進行免疫并逐步完善綜合防控措施，使小反芻獸疫得到一定程度的控制，因此，近年來未曾見疫病發(fā)生。

表2 南通市各縣（市）區(qū)被動送樣樣品的免疫抗體檢測結(jié)果

表3 “飛行采樣” 的縣（市）羊小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果

表4 南通市各縣（市）區(qū)小反芻獸疫免疫抗體檢測結(jié)果匯總

（2）目前，小反芻獸疫尚無有效的治療措施，實行小反芻獸疫強制免疫是最有效的防治措施，小反芻獸疫疫苗對溫度非常敏感，運輸過程中應采用全程冷鏈運輸?shù)姆绞?。抗體檢測和病原學監(jiān)測是評估小反芻獸疫疫苗的免疫效果，科學制定免疫程序的重要手段，本次檢測的小反芻獸疫病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒和小反芻病毒野毒特異性熒光RT-PCR 檢測試劑盒均購自青島立見，檢測結(jié)果表明，南通市2019 年所有縣（市）區(qū)的羊小反芻獸疫免疫抗體陽性率達98.16%，且平均阻斷率也達到89.32%，“飛行采樣” 采集3 個縣（市）6 個場90 份樣品羊小反芻獸疫免疫抗體平均陽性率96.67%，平均阻斷率89.29%；病原學檢測結(jié)果也均為陰性。南通市重大動物疫病的防疫工作是在監(jiān)管員的監(jiān)督下，防疫員領(lǐng)取政府統(tǒng)一招標采購的疫苗（全程冷鏈運輸），規(guī)模羊場由自場防疫員進行防疫，散養(yǎng)戶由防疫員上門進行防疫并詳細記錄免疫時間、疫苗批號、生產(chǎn)廠家等信息，各縣（市）區(qū)重大動物疫病指揮部定期或不定期進行檢查，南通市一年兩次進行“飛行采樣” 檢查，經(jīng)過近幾年的經(jīng)驗總結(jié)，全市防疫密度和防疫質(zhì)量有了大幅提高，也多次得到省表揚。此次檢測結(jié)果也表明，南通市小反芻獸疫免疫效果較好，病原學檢測結(jié)果均為陰性，說明近期內(nèi)發(fā)生小反芻獸疫的風險較低。

（3）獸醫(yī)工作者和養(yǎng)羊場（戶）應注意以下幾個方面的工作：一是加強羊只的引種檢疫和流通環(huán)節(jié)監(jiān)管，加強小反芻獸疫防控技術(shù)的宣傳指導，提高基層獸醫(yī)工作者和養(yǎng)殖戶的防控意識，最終實現(xiàn)小反芻獸疫的消滅計劃；二是加強飼養(yǎng)管理和羊場環(huán)境控制，保證動物營養(yǎng)均衡；三是選擇合適、質(zhì)量過關(guān)的疫苗與藥物，制訂合理的免疫和用藥方案，充分發(fā)揮疫苗及藥物的作用，做好新老疫病的控制和預防工作；四是實行嚴格的生物安全措施；五是羊場特別是規(guī)?；驁鲆龊靡卟〉亩ㄆ谠\斷與監(jiān)測，有針對性采取防控措施。

（4）病原學和抗體集中檢測對羊小反芻獸疫的免疫效果評價及免疫程序的制定有重要指導意義，對調(diào)整優(yōu)化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關(guān)重要。此次檢測結(jié)果表明，南通市轄區(qū)羊場免疫抗體陽性率均較高，良好的防疫質(zhì)量在重大動物疫病防控中有不可替代的作用。南通市每年組織2 次集中監(jiān)測和“飛行采樣” 檢查，既是對縣（市）區(qū)進行考核，也對規(guī)模羊場和散養(yǎng)戶的防疫有促進作用，及時掌握小反芻獸疫群體免疫力，對小反芻獸疫的預防、控制、凈化和消滅具有積極的推動作用，對養(yǎng)殖場戶宣傳生物安全的重要性，督促養(yǎng)殖戶加強飼養(yǎng)管理，搞好綜合防控工作，提高羊群的抵抗力，保障養(yǎng)羊業(yè)的健康發(fā)展。